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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第5期33卷 489-496页

作者：李月舟周汉清彭锋张志鸿上海200433 复旦大学生命科学学院!生理学和生物物理学系立人实验室

机械应力在心血管系统的正常生理和病理中都起着重要的作用。实验中观察到当提高红细胞悬浮液的旋转速度时会导致葡萄糖跨膜输入的速率增加。改变溶液渗透压及用使细胞膜曲率变化的药物 (氯丙嗪 )是对红细胞作用的另二种力学因素 ,研究... 详细信息

机械应力在心血管系统的正常生理和病理中都起着重要的作用。实验中观察到当提高红细胞悬浮液的旋转速度时会导致葡萄糖跨膜输入的速率增加。改变溶液渗透压及用使细胞膜曲率变化的药物 (氯丙嗪 )是对红细胞作用的另二种力学因素 ,研究发现它们同样也能对葡萄糖和阴离子的运输有影响。根据运输速率的温度特性给出了这些力学因素作用下葡萄糖、阴离子运输时活化能的变化。活化能的减小和运输速率的增加有很好的对应关系 :活化能减小使膜上运输蛋白在运输过程中的构象变化更为容易。对红细胞血影的内禀荧光淬灭测量表明 ,机械应力是通过影响膜上葡萄糖运输蛋白 (GLUT1)和阴离子交换蛋白 (带 3蛋白 )的构象起作用的。当用抑制剂抑制了阴离子的运输后 ,观察到此时葡萄糖跨膜运输对机械应力的响应发生改变 ,这再次表明在红细胞膜上GLUT1和带 3蛋白之间存在着信号连接

关键词：机械应力红细胞葡萄糖运输阴离子交换

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表达D-氨甲酰水解酶的枯草芽孢杆菌代谢工程研究

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作者：杜燕天津大学

学位级别：硕士

D-对羟基苯甘氨酸(D-HPG)作为一些重要的β-内酰胺类抗生素的侧链基团,是半合成抗生素的医药中间体。海因酶法是目前最有潜力的D-HPG生产方法,其以D,L-对羟基苯海因为原料,经D-海因酶(DHase)和D-氨甲酰水解酶(DCase)两步催化反应生成D-... 详细信息

D-对羟基苯甘氨酸(D-HPG)作为一些重要的β-内酰胺类抗生素的侧链基团,是半合成抗生素的医药中间体。海因酶法是目前最有潜力的D-HPG生产方法,其以D,L-对羟基苯海因为原料,经D-海因酶(DHase)和D-氨甲酰水解酶(DCase)两步催化反应生成D-HPG。DHase和DCase通常存在于野生型细菌或重组菌中,由于DCase活性低于DHase,限制了海因酶法的反应速率,并造成中间物积累。本文研究了重组枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)表达DCase,以及影响细胞DCase活性和稳定性的一些关键因素。采用人工基因P-adc表达DCase,构建了不同拷贝数整合表达和质粒表达的重组***菌株。结果表明,基因拷贝数与细胞DCase活性不成比例关系,双拷贝整合表达菌株DN02的DCase活性最高,为132 U/g DCW。葡萄糖和蔗糖作为碳源,有利于提高细胞DCase活性。但是,PTS碳源所引起的碳分解代谢物阻遏效应导致发酵液酸化,而降低细胞DCase活性与稳定性。缺陷葡萄糖运输蛋白Pts G或抗终止蛋白Glc T,使葡萄糖吸收速率降低57%,能够显著缓解发酵液酸化,衍生菌DN12的DCase活性达到518 U/g DCW。Pts G缺陷与Glc T缺陷等效,表明pts G的表达强烈依赖Glc T的抗终止作用。Pts G能够补偿Glc U或Glc P的单缺陷或双缺陷,但Pts G,Glc P和Glc U共缺陷不再降低细胞的葡萄糖吸收速率,表明***还存在未知的葡萄糖运输途径。在以葡萄糖为碳源的条件下,通过修饰cre box,而减弱Ccp A介导的葡萄糖对cit Z表达的抑制。结果使柠檬酸循环增大,乙酸合成量降低24%,发酵液酸化程度减轻,衍生菌株DN16p2的DCase活性达到615 U/g DCW。通过修饰调控元件而减弱Cod Y对cit B表达的抑制,结果使柠檬酸循环进一步增大及乙酸合成减少,衍生菌株DN17p3的DCase活性达到641 U/g DCW。由此过分增大柠檬酸循环通量,在供氧不变的条件下,将会诱导乳酸合成而加重发酵液酸化,对细胞DCase活性产生不利影响。通过Cit B的R741E点突变,消除Cit B对cit Z m RNA的去稳定作用,导致柠檬酸循环增大,乙酸产量降低71%,羟基丁酮产量降低16%。但是,进一步降低乙酸产量对提高细胞DCase活性仅有轻微作用。在***中共表达DCase和DHase,细胞DCase活性低于对应的DCase单表达菌株,表明DCase的表达受到多拷贝质粒p UBS存在的抑制。

关键词： D-氨甲酰水解酶葡萄糖运输 citZ citB 枯草芽孢杆菌

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K_(ATP)通道与青少年糖代谢异常的认识、特征及处理

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实用糖尿病杂志 2017年第4期13卷 7-9页

作者：陈阳李玉芳刘国良鞍山市双山医院内分泌科 110000 中国医科大学第一附属医院 110001

维持正常人血糖的平稳，需要先天的、后天的多种因素的参与：遗传基因、酶、胰岛素等，其中尽管各因素有多大比例参与，但是通常葡萄糖运输足以有效地允许细胞内和细胞外葡萄糖浓度的快速平衡。悉知胰岛素在其中伴演着十分重要的角色，... 详细信息

维持正常人血糖的平稳，需要先天的、后天的多种因素的参与：遗传基因、酶、胰岛素等，其中尽管各因素有多大比例参与，但是通常葡萄糖运输足以有效地允许细胞内和细胞外葡萄糖浓度的快速平衡。悉知胰岛素在其中伴演着十分重要的角色，但还有一个就是A11P敏感K＋通道（K＋-ATP通道）。

关键词： KATP通道糖代谢异常青少年葡萄糖浓度葡萄糖运输遗传基因 K+通道胰岛素

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