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新疆葡萄树伤流液多糖的分离纯化及其抗氧化活性研究

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新疆葡萄树伤流液多糖的分离纯化及其抗氧化活性研究

作者：布热米古丽·买买提新疆医科大学

学位级别：硕士

目的：比较新疆葡萄树伤流液多糖含量及分离纯化葡萄树伤流液多糖，初步分析结构并测定其抗氧化活性。方法：1.采用蒽酮-硫酸法比较多糖含量;2.利用醇沉法、改进的Sevage法制备粗多糖;3.经过DEAE-52、SephadexG-150对粗多糖进行分离纯化... 详细信息

目的：比较新疆葡萄树伤流液多糖含量及分离纯化葡萄树伤流液多糖，初步分析结构并测定其抗氧化活性。方法：1.采用蒽酮-硫酸法比较多糖含量;2.利用醇沉法、改进的Sevage法制备粗多糖;3.经过DEAE-52、SephadexG-150对粗多糖进行分离纯化;4.研究多糖组分的理化性质，采用气相色谱法分析单糖组成，并用UV、IR法进行初步结构分析;5.以羟自由基、氧自由基、DPPH自由基、亚硝基自由基、ABTS自由基为指标检测多糖组分及原液的抗氧化能力。结果：1.阿图什木纳格伤流液中多糖含量最高为816μg·mL-1，吐鲁番马奶子伤流液中多糖含量最低为18.3μg·mL-1;2.确定葡萄树伤流液多糖的制备条件为：20%醇沉除杂质、80%醇沉得粗多糖、改进的Sevage法除蛋白;3.喀什和吐鲁番葡萄树伤流液粗多糖经过DEAE-52分离分别得到8个多糖组分;两地各4个多糖组分经过SephadexG-150纯化后，其洗脱峰均为单峰，分子量在1.4×104－1×105之间;4.多糖组分均不含核酸和蛋白质，都具有多糖的特征吸收峰;通过GC分析得出GBSK-3的单糖组成较简单，主要由木糖组成;多糖GBST-5由鼠李糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成;多糖GBSK-2，GBSK-5，GBST-3的单糖组成相似主要由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成;多糖GBSK-1，GBST-1，GBST-2的单糖组成相似主要由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成。5.各组多糖都具有不同程度的抗氧化活性，对羟自由基清除能力强于对其它四种自由基清除能力。结论：1.葡萄树伤流液中的多糖含量不仅产地之间有差异还品种之间也有明显的差异;2.采用DEAE-52纤维素和SephadexG-150对葡萄树伤流液多糖进行分离纯化，得到了较好的分离效果，说明此方法适合分离纯化葡萄树伤流液多糖。3.喀什和吐鲁番葡萄树伤流液多糖组分的分子量、红外光谱信息、单糖组成均存在一定的差异，这印证了其在生物活性上的差异。4.葡萄树伤流液多糖均具有一定程度的抗氧化活性，尤其对羟自由基活性最强，此性质跟原液一致。

关键词：葡萄树伤流液多糖分离纯化抗氧化活性研究

新疆葡萄树伤流液抗氧化活性及其检测方法的研究

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新疆葡萄树伤流液抗氧化活性及其检测方法的研究

作者：阿吉姑·阿布都热西提新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:建立一种适合于检测水溶性物质抗氧化活性的简便方法,用该方法检测并比较新疆不同产地葡萄树伤流液的体外抗氧化活性。对活性显著葡萄树伤流液进行理化特性研究。方法:(1)用Mn与HO作用产生的羟自由基(·OH)迅速氧化分解PAR[4-(2-... 详细信息

目的:建立一种适合于检测水溶性物质抗氧化活性的简便方法,用该方法检测并比较新疆不同产地葡萄树伤流液的体外抗氧化活性。对活性显著葡萄树伤流液进行理化特性研究。方法:(1)用Mn与HO作用产生的羟自由基(·OH)迅速氧化分解PAR[4-(2-吡啶偶氮)-间苯二酚]与Mn离子反应生成的螯合物,在极短时间内使其500nm处的吸光度发生显著变化,从而可间接快速检测·OH的产生量;优化了反应体系中的pH、[PAR]、[Mn ]和[HO]等实验条件,并考察验证该方法的重现性。为验证该方法的可行性,以维生素C为基准物质,采用建立的方法测定维生素C清除羟自由基能力,将其结果与羟自由基试剂盒法,二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)法进行比较。(2)对新疆葡萄树伤流液的理化特性进行研究;采用Mn-HO-PAR分光光度法及超氧阴离子自由基(O2-·)试剂盒评价不同产地葡萄树伤流液对·OH和O2-·的清除能力。(3)考察前处理、温度等对和田红葡萄树伤流液抗氧化活性的影响;研究和田红葡萄树伤流液在不同萃取溶剂中的抗氧化活性。(4)对和田红葡萄树伤流液中的抗氧化物质进行定性分析。结果:(1)建立的Mn-HO-PAR法稳定性好,操作简便、快速,可作为一种简便的体外筛选抗氧化剂的方法。Mn-HO-PAR法、DPPH·法、羟自由基试剂盒法测得维生素C的IC50分别为0.013 mg·mL-1 ,0.005 mg·mL-1 ,0.200 mg·mL-1。(2)葡萄树伤流液显弱酸性;在205、215nm处有较强的吸收,在250-270nm之间有较弱吸收,紫外吸收特性具有产地差异性,其中和田红葡萄树伤流液的吸收强度高于其它地区葡萄树伤流液;和田、阿图什和喀什红葡萄树伤流液以及吐鲁番无核白葡萄树伤流液对·OH的清除率分别为73.36%、57.15%、50.58%、32.45%,Vc(0.01 mg·mL-1)为33.28%;而对O2-·的清除率分别为24.79%、27.78%、29.81%、18.82%、Vc(0.15 mg·mL-1)为44.19%。(3)和田红葡萄树伤流液清除·OH能力具有极强的热稳定性;经乙醚、石油醚萃取后其无机相对·OH的清除率分别为67.71%、70.14%。(4)和田红葡萄树伤流液在糖类及三萜皂苷类专属性反应中为阳性,其理化性质与黄酮类及葡萄中常见的相关化合物的理化特性相比均有差异。结论:(1)本文所建立的检测方法中,Mn-HO体系能产生较强的·OH,可用于抗氧化物质清除·OH活性的测定。(2)葡萄树伤流液对·OH的清除能力强,但对O2-·的清除能力较弱,其抗氧化活性随葡萄品种、产地、生态气候条件的不同有所差异,结果表明和田红葡萄树伤流液清除·OH能力最强。(3)和田红葡萄树伤流液对·OH的清除能力受温度的影响小,具有极强的热稳定性;其中抗氧化活性物质极性大,其主要性质与常见的抗氧化物质性质不同,具体的有效成分有待进行进一步的研究。

关键词：葡萄树伤流液抗氧化活性羟自由基 PAR[4-(2-吡啶偶氮)-间苯二酚]

新疆吐鲁番、喀什葡萄树伤流液多糖分离纯化及其抗氧化活性比较研究

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西北药学杂志 2016年第2期31卷 124-130页

作者：吕乐布热米古丽.买买提艾尔肯.依不拉音新疆医科大学药学院乌鲁木齐830011 新疆喀什地区人民医院药剂科喀什844000

目的确定新疆葡萄树伤流液多糖含量,探究吐鲁番无核白和喀什木纳格萄萄树伤流液多糖及其纯化组分的抗氧化活性。方法采用蒽酮-硫酸法检测多糖含量,利用醇沉法和改进的Sevage法制备粗多糖,经过DEAE-52纤维素柱对粗多糖进行分离纯化,以羟... 详细信息

目的确定新疆葡萄树伤流液多糖含量,探究吐鲁番无核白和喀什木纳格萄萄树伤流液多糖及其纯化组分的抗氧化活性。方法采用蒽酮-硫酸法检测多糖含量,利用醇沉法和改进的Sevage法制备粗多糖,经过DEAE-52纤维素柱对粗多糖进行分离纯化,以羟自由基、超氧自由基、DPPH·自由基、亚硝基自由基、ABTS·自由基为指标检测多糖组分及原液的抗氧化能力。结果吐鲁番无核白和喀什木纳格葡萄树伤流液中多糖含量分别为114和193μg·mL-1,经过DEAE-52纤维素柱分离分别得到8个多糖组分,其中两者4个含量较高的多糖组分和原液都具有不同程度的抗氧化活性,且对羟自由基的清除能力强于对其他4种自由基的清除能力,两地葡萄树伤流液的抗氧化活性存在差异。结论吐鲁番无核白和喀什木纳格葡萄树伤流液的多糖组分均具有一定的抗氧化活性,并且其抗氧化活性存在差异。

关键词：多糖葡萄树伤流液纯化抗氧化活性

新疆3个地区葡萄树伤流液抗氧化能力的比较研究

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西北药学杂志 2017年第5期32卷 537-540页

作者：米尔扎提.麦麦提吕乐艾尔肯.依不拉音喀日耶姆.艾海提新疆医科大学公共卫生学院乌鲁木齐830011 新疆医科大学药学院乌鲁木齐830011 新疆医科大学中心实验室乌鲁木齐830011

目的比较研究新疆3个地区葡萄树伤流液的抗氧化能力。方法采用统计分析方法研究新疆葡萄树伤流液对·OH,O_2~,DPPH·,NO_2~和ABTS·这5种自由基的清除率。结果单因素方差分析结果显示,喀什木纳格、吐鲁番无核白以及和田沙依巴克乡... 详细信息

目的比较研究新疆3个地区葡萄树伤流液的抗氧化能力。方法采用统计分析方法研究新疆葡萄树伤流液对·OH,O_2~,DPPH·,NO_2~和ABTS·这5种自由基的清除率。结果单因素方差分析结果显示,喀什木纳格、吐鲁番无核白以及和田沙依巴克乡红葡萄的葡萄树伤流液对5种自由基的清除能力间差异有统计学意义(P葡萄树伤流液对5种自由基的清除能力之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 3个地区的葡萄树伤流液都有很强的抗氧化活性,差异无统计学意义。各产地葡萄树伤流液对·OH自由基的清除能力比其他自由基强,并存在明显差异。

关键词：葡萄树伤流液抗氧化能力方差分析

喀什木纳格葡萄树伤流液多糖的分离纯化及其单糖组成分析

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新疆医科大学学报 2013年第11期36卷 1558-1561页

作者：艾尔肯.依不拉音布热米古丽.买买提黄琼新疆医科大学药学院乌鲁木齐830011

目的研究分析喀什木纳格葡萄树伤流液中多糖的分离纯化及其单糖组成成分。方法采用醇沉法提取多糖,Sevage法脱蛋白,经DEAE-52纤维素及SephedexG-150凝胶柱分离纯化,采用气相色谱分析法测定单糖组成。结果 80%乙醇沉淀、Sevage法除蛋白... 详细信息

目的研究分析喀什木纳格葡萄树伤流液中多糖的分离纯化及其单糖组成成分。方法采用醇沉法提取多糖,Sevage法脱蛋白,经DEAE-52纤维素及SephedexG-150凝胶柱分离纯化,采用气相色谱分析法测定单糖组成。结果 80%乙醇沉淀、Sevage法除蛋白得粗多糖;葡萄树伤流液粗多糖经过DEAE-52分离纯化分别得到GBSK-1、GBSK-2、GBSK-3、GBSK-4、GBSK-5、GBSK-6、GBSK-7和GBSK-8共8个多糖组分。其中4个多糖组分经过SephadexG-150纯化后,其洗脱峰均为单峰;通过GC分析得出GBSK-3的单糖组成较简单,主要由木糖组成;多糖GBSK-2、GBSK-5的单糖组成相似,主要由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成;多糖GBSK-1的单糖组成主要由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成。结论该方法较好地分离纯化葡萄树伤流液多糖。GC分析适用于多糖中的单糖组成分析,为葡萄树伤流液的开发和利用提供了科学依据。

关键词：葡萄树伤流液多糖分离纯化单糖组成气相色谱

气相色谱法测定吐鲁番无核白葡萄树伤流液组成多糖的单糖

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西北药学杂志 2015年第3期30卷 221-224页

作者：艾尔肯.依不拉音布热米古丽.买买提米尔扎提.麦麦提新疆医科大学药学院乌鲁木齐830011 新疆喀什地区人民医院药剂科喀什844000 新疆医科大学公共卫生学院乌鲁木齐830011

目的对吐鲁番葡萄树伤流液多糖进行分离纯化,并分析其单糖组成。方法采用醇沉法提取多糖,Sevage法脱蛋白,经DEAE-52纤维素柱及Sephadex G-150凝胶柱分离纯化,采用气相色谱分析单糖组成。结果用体积分数80%乙醇沉淀、Sevage法除蛋白,得... 详细信息

目的对吐鲁番葡萄树伤流液多糖进行分离纯化,并分析其单糖组成。方法采用醇沉法提取多糖,Sevage法脱蛋白,经DEAE-52纤维素柱及Sephadex G-150凝胶柱分离纯化,采用气相色谱分析单糖组成。结果用体积分数80%乙醇沉淀、Sevage法除蛋白,得葡萄树伤流液粗多糖,粗多糖经过DEAE-52纤维素柱分离得到8个多糖组分,编号分别为:组分-1,组分-2,组分-3,组分-4,组分-5,组分-6,组分-7,组分-8。其中4个多糖组分经过Sephadex G-150纯化后,通过GC分析组分-1和组分2含有鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖;组分-3含有鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖;组分-5含有鼠李糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖。结论该方法可较好地分离纯化葡萄树伤流液多糖。采用GC分析多糖的单糖组成,研究结果适用于多糖中的单糖组成分析。

关键词：葡萄树伤流液多糖分离纯化单糖组成气相色谱

新疆葡萄树伤流液蛋白含量测定及抗氧化活性研究

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新疆医科大学学报 2013年第11期36卷 1562-1564页

作者：黄琼艾尔肯.依不拉音伊合提巴尔.穆拉提新疆医科大学药学院乌鲁木齐830011

目的了解新疆葡萄树伤流液蛋白含量及其抗氧化能力。方法采用考马斯亮蓝法测定新疆葡萄树伤流液的蛋白含量;以抗坏血酸为阳性对照,应用ABTS法、羟自由基试剂盒法、DPPH法和亚硝酸盐法,研究其对自由基的清除能力。结果不同产地、品种的... 详细信息

目的了解新疆葡萄树伤流液蛋白含量及其抗氧化能力。方法采用考马斯亮蓝法测定新疆葡萄树伤流液的蛋白含量;以抗坏血酸为阳性对照,应用ABTS法、羟自由基试剂盒法、DPPH法和亚硝酸盐法,研究其对自由基的清除能力。结果不同产地、品种的葡萄树伤流液蛋白含量不同,其中和田木纳格最高,为22.4±0.07μg/mL;不同产地、品种的葡萄树伤流液清除自由基的能力不同,但对·OH的清除能力明显高于对DPPH·和NO-2·的清除能力。结论新疆葡萄树伤流液因产地和品种的不同,其蛋白含量及清除自由基能力也不同。

关键词：葡萄树伤流液蛋白质抗氧化抗坏血酸

新疆葡萄树伤流液化学成分分析及抗氧化性研究

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新疆葡萄树伤流液化学成分分析及抗氧化性研究

作者：朱富荣新疆医科大学

学位级别：硕士

目的：1、对新疆不同品种、产地葡萄树伤流液中组分及抗氧化活性进行比较测定;2、以新疆喀什产的木纳格品种的伤流液为研究对象，以体外抗氧化试验为活性评价手段，采用HPD400大孔树脂对其抗氧化活性物质进行初步纯化，并结合高效液相... 详细信息

目的：1、对新疆不同品种、产地葡萄树伤流液中组分及抗氧化活性进行比较测定;2、以新疆喀什产的木纳格品种的伤流液为研究对象，以体外抗氧化试验为活性评价手段，采用HPD400大孔树脂对其抗氧化活性物质进行初步纯化，并结合高效液相色谱、制备液相色谱法进一步分离纯化。方法：1、采用系统预实验方法对新疆葡萄树伤流液的化学成分进行了初探。2、以没食子酸为标准品，采用Folin-Ciocalteu比色法测定新疆不同品种葡萄树伤流液中总多酚的含量。3、采用异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生化试剂衍生化后进行高效液相色谱(HPLC)分析，测定9种新疆葡萄树伤流液中17种游离氨基酸的含量。4、采用电感耦合等离子体发射光谱法测定不同产地、不同品种的新疆葡萄树伤流液中各矿质元素的含量，并采用SPSS17.0主成分分析法和聚类分析法对测定结果进行特征分析。5、以新疆不同品种、产地的葡萄树伤流液为研究对象，采用分光光度法测定其还原能力、·OH、DPPH·、O·、NO·的清除能力，以VC作为对照。6、采用HPD400大孔树脂对喀什木纳格品种伤流液中抗氧化活性物质进行了纯化。采用高效液相色谱(HPLC)对HPD400大孔树脂60%乙醇洗脱部分进行了化学成分分析，测定了白藜芦醇的含量。同时HPLC测定了不同品种、产地的葡萄树伤流液及HPD400大孔树脂60%乙醇洗脱部分中6种单体酚(没食子酸、儿茶素、咖啡酸、表儿茶素、对香豆酸、阿魏酸)的含量。7、采用半制备液相色谱对HPD400大孔树脂60%乙醇洗脱部分进一步分离纯化，采用羟自由基测试盒对分离组分测定·OH的抑制率，以VC(0.2mg·mL)为对照。结果：1、葡萄树伤流液中可能含有氨基酸、蛋白质、糖类及其苷类、皂苷，可能不含黄酮类和生物碱类或是含量低未达检测限。2、以没食子酸为标准品，多酚的浓度在0-6mg·L范围内与吸光度有良好的线性关系。该方法的稳定性、重现性、精密度及加标回收率的RSD均符合药典要求。3、不同品种、产地葡萄树伤流液中游离氨基酸有116种，其中7种为必需氨基酸。4、经主成分分析得3个主成分，其累计方差贡献率达92.49%。第一主因子的方差贡献率为60.92%，故确定其所对应的Ca、Mg、P和S是新疆葡萄树伤流液中所含的特征元素。聚类分析将6个样品，基本按品种和地域性聚为2组。5、新疆葡萄树伤流液对自由基清除能力大小的顺序：·OH>DPPH·>O·，具有一定的清除NO·作用。6、喀什木纳格伤流液中的白藜芦醇经HPD400大孔树脂富集之后含量从34.53μg·L提高到344.65μg·L。新疆不同品种、产地的葡萄树伤流液中没食子酸的含量有差异，最高的是和田木纳格伤流液2.45μg·mL，最低的是阿图什木纳格伤流液0.29μg·mL。喀什木纳格伤流液中的没食子酸经HPD400大孔树脂富集之后含量从1.03μg·mL提高到1.44μg·mL。其它5种单体酚均部分检出。7、通过半制备液相色谱分离得到9个组分，对·OH的抑制率范围为48.89%-70.71%，VC(0.2mg·mL)为57.40%。结论：1、首次对新疆葡萄树伤流液中的化学成分进行预实验，为其资源的开发提供了理论参考。2、多酚含量同一品种不同地区有差异，同一地区不同品种也是有差异的，造成多酚含量差异的原因除了与品种有关外，还与地理环境有一定的关系。3、不同品种葡萄树伤流液的氨基酸含量差异较大，但是各类氨基酸含量分布与组成类似。4、不同产地、不同品种的葡萄树伤流液中矿质元素呈现一定的选择性累积和地域性差异。5、新疆葡萄树伤流液具有强的抗氧化活性，尤其清除·OH的能力最强，清除O·的能力最弱。6、HPD400大孔树脂对白藜芦醇具有好的富集作用，白藜芦醇、没食子酸及部分检出的5种单体酚，虽然含量低，但可能是葡萄树伤流液抗氧化活性物质之一。7、制备液相色谱进一步分离纯化得到的9个组分，均具有抗氧化活性，说明此法可以用来纯化葡萄树伤流液中抗氧化活性物质。

关键词：葡萄树伤流液化学成分品种抗氧化分离纯化