检索结果-南通市图书馆

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

植物甾醇及其衍生物的生物合成途径研究进展

中草药 2022年第18期53卷 5884-5898页

作者：赵曼孔珂昕薛露张成玉周迎颜晓晖天津中医药大学组分中药国家重点实验室天津301617 天津中医药大学中药学院天津301617

植物甾醇是一类在植物中广泛存在的、具有环戊烷多氢菲骨架的甾体类化合物,是植物细胞膜的重要组成部分。植物甾醇在植物体内以游离形式和共轭形式存在,游离甾醇是植物细胞膜的重要结构成分,可维持细胞膜流动性、调节其立体结构,共轭甾... 详细信息

植物甾醇是一类在植物中广泛存在的、具有环戊烷多氢菲骨架的甾体类化合物,是植物细胞膜的重要组成部分。植物甾醇在植物体内以游离形式和共轭形式存在,游离甾醇是植物细胞膜的重要结构成分,可维持细胞膜流动性、调节其立体结构,共轭甾醇则在植物的生长发育及应激反应中发挥重要作用。植物甾醇的生物合成过程非常复杂,可分为环阿屯醇的合成、4-甲基-24-亚甲基胆甾-7-烯醇的合成及菜油甾醇、β-谷甾醇、豆甾醇的合成3个阶段,涉及近30步反应,受角鲨烯合酶、甾醇侧链还原酶等多种酶的调控。总结了植物甾醇及其部分衍生物生物合成途径的研究进展,以期为利用合成生物学技术创建这类重要植物天然产物的人工生物合成体系提供参考。

关键词：植物甾醇生物合成途径乙酰辅酶A 环阿屯醇菜油甾醇 β-谷甾醇豆甾醇油菜素内酯芸苔素内酯合成生物学

超高效液相色谱—大气压化学电离—飞行时间质谱法测定油茶籽油中的3种甾醇

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

食品与机械 2023年第7期39卷 56-61页

作者：潘锦华陈峰白建平段雪菲李绮淇广州检验检测认证集团有限公司广东广州511447 国家加工食品质量检验中心〔广东〕广东广州511447

目的:为准确测定油茶籽油中的β-谷甾醇、菜籽甾醇、菜油甾醇含量。方法:建立超高效液相色谱—四极杆/飞行时间质谱测定方法。样品以6-酮胆甾烷醇为内标物,50 mL乙醇加热回流提取30 min,离心分层后,样液经Xbridge BEH C_(18)(100 mm×4.... 详细信息

目的:为准确测定油茶籽油中的β-谷甾醇、菜籽甾醇、菜油甾醇含量。方法:建立超高效液相色谱—四极杆/飞行时间质谱测定方法。样品以6-酮胆甾烷醇为内标物,50 mL乙醇加热回流提取30 min,离心分层后,样液经Xbridge BEH C_(18)(100 mm×4.6 mm,2.5μm)色谱柱洗脱分离,大气压化学电离源(APCI)电离和正离子模式分析测试。结果:3种甾醇在0.1~10.0 mg/L的质量浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数R^(2)均大于0.9992,本底值0.5,1.0,2.0,10.0倍添加水平的回收率为84.5%~99.5%,相对标准偏差(RSDs)为3.92%~7.44%,方法检出限均为1.0 mg/kg,方法定量限为3.0 mg/kg。结论:该方法操作简单、溶剂消耗少且环保、回收率及重现性好,可用于准确测定油茶籽油中的3种甾醇。

关键词：超高效液相色谱—四极杆/飞行时间质谱大气压化学电离油茶籽油 β-谷甾醇菜籽甾醇菜油甾醇

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

重组酿酒酵母生物合成菜油甾醇

化工学报 2021年第8期72卷 4314-4324页

作者：周武林高惠芳吴玉玲张显徐美娟杨套伟邵明龙饶志明江南大学生物工程学院江苏无锡214122

菜油甾醇作为甾体药物(孕酮、雄烯二酮、氢化可的松等)的重要合成前体已受到国内外研究学者的广泛关注。首先通过生物信息学分析,筛选了10种不同来源的7-脱氢胆固醇还原酶DHCR7,并采用CRISPR/Cas9基因编辑技术将酿酒酵母(Saccharomyces ... 详细信息

菜油甾醇作为甾体药物(孕酮、雄烯二酮、氢化可的松等)的重要合成前体已受到国内外研究学者的广泛关注。首先通过生物信息学分析,筛选了10种不同来源的7-脱氢胆固醇还原酶DHCR7,并采用CRISPR/Cas9基因编辑技术将酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)内源的ERG5基因替换成不同来源的DHCR7基因,构建了菜油甾醇合成菌株。结果发现整合来源于Pangasianodon hypophthalmus DHCR7的菌株Zw507表现出最高的菜油甾醇的产量216.93 mg/L。进一步筛选了10种酵母内源启动强度较强的启动子来与PhDHCR7基因进行组合,结果显示以TEF1p为启动子时菜油甾醇的产量最高可达253.35 mg/L。为了进一步提高菜油甾醇产量,增加了DHCR7表达盒在酵母基因组上的拷贝数。当拷贝数为3个时,菜油甾醇的产量达到最高302.27 mg/L。最终,通过5 L发酵罐进行补料分批发酵,实现了916.88 mg/L菜油甾醇产量。该菌株可作为后续甾体药物生物合成的优良底盘细胞。

关键词： 7-脱氢胆固醇还原酶酿酒酵母菜油甾醇合成生物学补料分批发酵

不同组分及剂量植物甾醇对体外瘤胃微生物发酵的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

南京农业大学学报 2024年

作者：朱玉喜曹雨涵吕东海高健郭孟娇孙展英孙晓妮成艳芬刘锁珠刘艳丰新疆畜牧科学院饲料研究所南京农业大学动物消化道营养国际联合研究中心消化道微生物研究室南京诺齐生物科技有限公司西藏农牧学院动物科技学院

(目的)本研究旨在评价植物甾醇的组成和剂量在体外对瘤胃微生物发酵的影响。(方法)本试验采用双因素试验设计，设置不同组分(菜油甾醇、菜籽甾醇、谷甾醇和β -谷甾醇，编号为：A-D)和添加剂量(即0、0.03、0.10、0.20 μg·mL-1)的植物... 详细信息

(目的)本研究旨在评价植物甾醇的组成和剂量在体外对瘤胃微生物发酵的影响。(方法)本试验采用双因素试验设计，设置不同组分(菜油甾醇、菜籽甾醇、谷甾醇和β -谷甾醇，编号为：A-D)和添加剂量(即0、0.03、0.10、0.20 μg·mL-1)的植物甾醇，添加到含60 mL瘤胃培养基和0.60 g全混合日粮的血清瓶中。血清瓶放置在恒温培养箱中39 ℃培养24 h，培养过程中动态测定血清瓶中的总气体和甲烷产量，在发酵结束时分别收集剩余培养基和发酵底物，分析底物消失率和微生物代谢参数，包括乳酸、氨氮、挥发性脂肪酸和微生物蛋白的浓度。(结果)结果表明，在0.20 μg·mL-1条件下的植物甾醇β-谷甾醇的产气量高于其它处理(P 甾醇的剂量可提高瘤胃微生物代谢所产生的总挥发性脂肪酸的浓度(P 甾醇的效果最好。针对各处理中植物甾醇组分及比例不同，进行线性回归分析，结果显示，植物甾醇产品中的菜油甾醇和β-谷甾醇对微生物生长代谢有促进作用，而菜籽甾醇和豆甾醇对微生物活动有抑制作用。(结论)综上所述，添加菜油甾醇和β-谷甾醇可促进体外瘤胃微生物生长与代谢，本试验中β-谷甾醇在0.20 μg·mL-1时效果最好，且在本试验所用到的植物甾醇组分中，菜油甾醇和β -谷甾醇对瘤胃微生物体外活动的促进效果最为显著。

关键词：瘤胃微生物体外发酵植物甾醇菜油甾醇 β-谷甾醇挥发性脂肪酸

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

植物甾醇的超高效液相色谱测定方法的研究

营养学报 2023年第3期45卷 301-305页

作者：尹丹阳赵莹赵迪张宇晨胡佳薇陕西省疾病预防控制中心西安710054

目的优化植物甾醇测定皂化以及萃取条件,建立反相超高效液相色谱法测定植物性食品中三种植物甾醇(β-谷甾醇、豆甾醇和菜油甾醇)的方法。并用此方法测定了几种陕西省特色食品中三种植物甾醇的含量,为准确衡量居民日常膳食中的植物甾醇... 详细信息

目的优化植物甾醇测定皂化以及萃取条件,建立反相超高效液相色谱法测定植物性食品中三种植物甾醇(β-谷甾醇、豆甾醇和菜油甾醇)的方法。并用此方法测定了几种陕西省特色食品中三种植物甾醇的含量,为准确衡量居民日常膳食中的植物甾醇摄入量提供了新的方法。方法样品经过皂化和液液萃取后采用AgilentPoroshell120PheHex色谱柱(2.1 mm×100 mm,2.7μm)进行分离,以甲醇-水梯度洗脱。DAD检测器在190~400 nm范围内进行3D扫描,选择200nm作为三种植物甾醇的特征吸收波长进行检测。结果三种植物甾醇在浓度为5.00~300μg/ml内呈良好线性关系,相关系数r>0.997;三种植物甾醇检出限为0.08 mg/100g,定量限为0.24 mg/100g;通过优化皂化条件和提取试剂,最终选择5 ml 50%KOH溶液用来皂化样品,选择乙酸乙酯:正己烷(1:1)作为植物甾醇的提取试剂。样品中三种植物甾醇高中低3个浓度水平的测量精密度为2.3%~4.7%、加标回收率为82.4%~102.0%。结论本研究建立的反相超高效液相色谱方法检测植物性食品中三种植物甾醇灵敏准确,适用于植物性食品中三种植物甾醇的同时测定。

关键词：超高效液相色谱法 β-谷甾醇豆甾醇菜油甾醇植物性食品

响应面法优化解脂亚罗酵母产菜油甾醇培养基组成

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国油脂 2023年第2期48卷 85-90页

作者：谭思远陈月星雷秋燕佘佳怡孟永宏商洛学院生物医药与食品工程学院陕西商洛726000 陕西秦岭特色生物资源产业技术研究院陕西商洛726000 陕西师范大学食品工程与营养科学学院西安710119

为提高解脂亚罗酵母PMEDD菌株菜油甾醇的产量,对此菌株发酵培养基组成进行了优化。采用单因素实验探究碳源种类、氮源种类、碳源质量浓度、氮源质量浓度、KH2PO4质量浓度对菜油甾醇产量的影响。在此基础上,采用响应面实验对发酵培养基... 详细信息

为提高解脂亚罗酵母PMEDD菌株菜油甾醇的产量,对此菌株发酵培养基组成进行了优化。采用单因素实验探究碳源种类、氮源种类、碳源质量浓度、氮源质量浓度、KH2PO4质量浓度对菜油甾醇产量的影响。在此基础上,采用响应面实验对发酵培养基组成进行了优化。结果表明:培养基组成为葡萄糖3.17 g/100 mL,蛋白胨1.44 g/100 mL,KH2PO40.65 g/100 mL,Uracil 0.1 g/100 mL,YNB 0.42 g/100 mL,MgSO4·7H2O 0.15 g/100 mL时,菜油甾醇的产量达到最大,为16.49μg/mL,优化后菜油甾醇的产量为优化前的2.10倍。采用优化后的培养基,可有效提高解脂亚罗酵母PMEDD菌株菜油甾醇的产量。

关键词：解脂亚罗酵母菜油甾醇响应面法培养基优化

Phytosterol content and the campesterol:sitosterol ratio influence cotton fiber development: role of phytosterols in cell elongation

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Science China(Life Sciences) 2016年第2期59卷 183-193页

作者： Shasha Deng Ting Wei Kunling Tan Mingyu Hu Fang Li Yunlan Zhai Shue Ye Yuehua Xiao Lei Hou Yan Pei Ming Luo Key Laboratory of Biotechnology and Crop Quality Improvement Ministry of AgricultureBiotechnology Research Center Southwest University

Phytosterols play an important role in plant growth and development,including cell division,cell elongation,embryogenesis,cellulose biosynthesis,and cell wall formation.Cotton fiber,which undergoes synchronous cell elongation and a large amount of cellulose synthesis,is an ideal model for the study of plant cell elongation and cell wall biogenesis.The role of phytosterols in fiber growth was investigated by treating the fibers with tridemorph,a sterol biosynthetic inhibitor.The inhibition of phytosterol biosynthesis resulted in an apparent suppression of fiber elongation in vitro or in planta.The determination of phytosterol quantity indicated that sitosterol and campesterol were the major phytosterols in cotton fibers;moreover,higher concentrations of these phytosterols were observed during the period of rapid elongation of fibers.Furthermore,the decrease and increase in campesterol:sitosterol ratio was associated with the increase and decease in speed of elongation,respectively,during the elongation stage.The increase in the ratio was associated with the transition from cell elongation to secondary cell wall synthesis.In addition,a number of phytosterol biosynthetic genes were down-regulated in the short fibers of ligon lintless-1mutant,compared to its near-isogenic wild-type TM-1.These results demonstrated that phytosterols play a crucial role in cotton fiber development,and particularly in fiber elongation.

关键词：植物甾醇细胞伸长菜油甾醇棉纤维醇含量生物合成抑制剂植物生长发育 β-谷甾醇

杰丁塞伯林德纳氏酵母CRISPR/Cas9基因编辑系统开发及其在异源甾醇生产菌株改造中的应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

杰丁塞伯林德纳氏酵母CRISPR/Cas9基因编辑系统开发及其在异源甾...

作者：顾丽杉长春工业大学

学位级别：硕士

杰丁塞伯林德纳氏酵母(Cyberlindnera jadinii·CJ)是美国食品和药物管理局(FDA)认证的GRAS安全菌种,已在食品和饲料行业使用了近一个世纪,是重要的工业生产酵母。杰丁塞伯林德纳氏酵母属于Crabtree-阴性酵母,具有强大的呼吸能力,生长快... 详细信息

杰丁塞伯林德纳氏酵母(Cyberlindnera jadinii·CJ)是美国食品和药物管理局(FDA)认证的GRAS安全菌种,已在食品和饲料行业使用了近一个世纪,是重要的工业生产酵母。杰丁塞伯林德纳氏酵母属于Crabtree-阴性酵母,具有强大的呼吸能力,生长快速,因此常被用来生产蛋白(单细胞蛋白,各种工业酶)以及一些高附加值天然产物(如β-葡聚糖,生物素,类胡萝卜素等)。由于杰丁塞伯林德纳氏酵母属于四倍体酵母,应用传统的遗传操作工具对其进行遗传改造需要四轮操作才能完成,费时费力。因此有必要开发更为简单高效的遗传操作工具,使该酵母的工业应用潜能进一步得到释放。CRISPR/Cas9基因编辑系统是高效的基因编辑工具,具有编辑效率高,可同时编辑多个等位基因,以及无痕编辑等特点。该技术经过近些年的发展,已广泛应用于各种非常规酵母的遗传改造。由于CRISPR/Cas9基因编辑系统还没在杰丁塞伯林德纳氏酵母中建立,本课题着重开展了相关开发工作。本课题首先设计并构建了可应用于杰丁塞伯林德纳氏酵母CICC#1769菌株基因编辑的一元CRISPR/Cas9质粒pCJ-Cas9-sgRNA-G418。该质粒由六个独立模块组成,包括(M1)含有噬菌体f1的DNA复制原点(f1 ori)的模块;(M2)G418抗性筛选标记模块;(M3)杰丁塞伯林德纳氏酵母自主复制序列(ARS)模块;(M4)用内源tRNA(UGG反密码子)启动子驱动的单向导RNA(SgRNA)表达模块;(M5)质粒复制起点(ori)和氨苄青霉素抗性筛选标记模块;(M6)用内源核苷二磷酸还原酶Cj RNR2启动子驱动的化脓性链球菌Sp Cas9基因表达模块。用该质粒敲除CICC#1769菌株中的磷酸核糖氨基咪唑羧甲基化酶编码基因ADE2,发现一次转化同时敲除掉四个ADE2等位基因的效率可达85%。为进一步提升基因编辑效率,本课题随后对pCJ-Cas9-sgRNA-G418质粒中的一些关键元件进行优化:(1)通过测试不同长度和来源的自主复制序列,发现分离自杰丁塞伯林德纳氏酵母核染色体上的1.9Kb长度的ARS1对维持质粒的稳定性效果最好。(2)通过测试不同内源tRNA启动子驱动表达sgRNA的能力,发现不同tRNA启动子具有相似的基因编辑效率。(3)发现用THD3(编码糖酵解关键酶甘油醛-3-磷酸脱氢酶)组成型强启动子驱动Sp Cas9核酸表达可显著提升基因编辑效率至100%。最终整合优化元件的质粒被命名为pCJ-Cas9-sgRNA-G418-II。本课题其次测试了基因组杂合位点对基因编辑效率的影响。借助2%w/v葡萄糖生长条件下的RNA-seq转录组数据,本课题发现CICC#1769菌株核基因组呈现“AAAB”核型并存在大量杂合位点。本课题通过在ADE2基因中选择特殊位置的20 nt间隔序列(spacer)S1和S2,分别测试了间隔序列中含有1个或2个单核苷酸突变(SNV)对基因编辑的影响。结果发现,CRISPR/Cas9系统对仅含有一个SNV的位点的包容性较好,编辑效率依然可达100%;但无法对含有2个SNV的位点进行编辑。考虑到G418筛选成本较高,本课题进一步在CICC#1769菌株中构建了营养缺陷型筛选体系。通过pCJ-Cas9-sgRNA-G418-II质粒敲除URA3基因,获得了四个等位基因缺失的纯合突变体ΔURA3。将URA3表达盒替换G418表达盒,最终构建成了可用于尿嘧啶营养缺陷筛选的质粒pCJ-Cas9-sgRNA-URA3。由于该质粒在YPD培养继代过程中可丢失,因此可以应用该质粒实现连续的基因编辑。微生物宿主实现异源高附加值生物制品生产需要借助代谢工程手段引入有单个或多个基因所组成的特定的生物合成途径,而精准的将这些异源生物合成途径插入到杰丁塞伯林德纳氏酵母的多倍体基因组中目前还存在挑战。为了验证本课题开发的CRISPR/Cas9系统在代谢工程改造中的应用效果,本课题选择了在CICC#1769菌株中异源合成代表性的植物甾醇“菜油甾醇”以及动物甾醇“胆固醇”作为案例,测试了将单一或多个基因表达盒经一次转化同时插入四个等位基因的相同位点的效率。本研究将土豆来源的甾醇7位脱氢酶StDWF5整合至酵母麦角固醇合成关键基因ERG5位点,实现了酵母从头合成菜油甾醇,整合效率为100%。对获得的菜油甾醇生产菌株CJ-Cam摇瓶发酵120 h后,菜油甾醇的产量达到92.1 mg/L。随后本课题尝试将土豆来源的甾醇7位脱氢酶StDWF5,原鸡来源的甾醇24位脱氢酶Gg DHCR24,以及内源的3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶HMG1的基因过表达盒,同时插入到ERG5位点从而获得胆固醇从头合成菌株CJ-Cho。结果显示用1Kb同源臂进行同源重组组装时,阳性率可达62.5%。对CJ-Cho摇瓶发酵120 h后,胆固醇产量达到81.8 mg/L。进一步对CJ-Cho菌株的

关键词：杰丁塞伯林德纳氏酵母 CRISPR/Cas9 酵母甾醇从头合成菜油甾醇胆固醇

菜油甾醇和孕烯醇酮在耶氏解脂酵母中的合成与优化

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

菜油甾醇和孕烯醇酮在耶氏解脂酵母中的合成与优化

作者：张羽天津大学

学位级别：硕士

菜油甾醇和孕烯醇酮是异源合成甾体激素类药物的重要前体及中间体。本文拟在耶氏解脂酵母中引入异源菜油甾醇和孕烯醇酮合成路径,并通过异源蛋白来源筛选、竞争性路径敲除、乙酰CoA来源与分配优化,蛋白截短和重定位等策略,以期在耶氏解... 详细信息

菜油甾醇和孕烯醇酮是异源合成甾体激素类药物的重要前体及中间体。本文拟在耶氏解脂酵母中引入异源菜油甾醇和孕烯醇酮合成路径,并通过异源蛋白来源筛选、竞争性路径敲除、乙酰CoA来源与分配优化,蛋白截短和重定位等策略,以期在耶氏解脂酵母中实现菜油甾醇和孕烯醇酮的高水平表达。菜油甾醇在耶氏解脂酵母中合成需引入异源关键酶—7脱氢胆固醇还原酶(DHCR7),本研究对6种DHCR7来源进行筛选获得DHCR7最佳来源—斑马鱼(Danio rerio),通过生物信息学分析发现D409E、G408P及L404F(L404M)是影响酶活性的三个关键突变点,其中D409E突变使非洲爪蟾(Xenopus laevis)来源DHCR7酶活下降86%。通过敲除麦角固醇路径酶ERG5,并导入斑马鱼(Danio rerio)来源DHCR7,获得仅积累菜油甾醇的高产菌株SyBEl02060056,其摇瓶水平产量是报道最高产量的1.38倍。以该菌株为底盘,在葡萄糖和葵花籽油两种碳源下表征13种乙酰CoA合成与分配相关基因对菜油甾醇的调控作用,得出以葵花籽油为碳源时的3个关键代谢调控靶点HMGR、ACL和POX2,这三个靶点分别使菜油甾醇产量提高1.32、1.22和1.19倍。在5-L发酵罐中进行发酵工艺优化获得菜油甾醇最高产量941.5 mg/L,为目前已知最高产量。孕烯醇酮在耶氏解脂酵母菌株中以菜油甾醇为前体经P450scc系统(包括CYP11A1、AdR和Ad X)催化合成。对36种不同来源P450scc组合进行筛选,首次实现孕烯醇酮在耶氏解脂酵母中的全合成,并获得最佳组合野猪(Sus scrofa)来源CYP11A1及牛(Bos taurus)源AdR和Ad X。探究影响孕烯醇酮合成的因素,包括底物特异性、前体菜油甾醇存在形式、前体与酶接触及酶活性等,发现前体与酶空间位置隔离及酶活性不足是导致孕烯醇酮产量较低的关键。通过选用强启动子并将野猪(Sus scrofa)来源CYP11A1重定位于脂质体膜上,使孕烯醇酮产量达到3.1±0.5 mg/L,提高了13倍。本研究采用多种策略对耶氏解脂酵母中菜油甾醇和孕烯醇酮的合成进行优化,为其他萜烯类物质产量提升提供多种有效优化方式,同时为其他微生物高产萜烯类物质提供借鉴意义。另外本实验获得的菜油甾醇及孕烯醇酮高产菌株可供后续甾体激素类产物的进一步合成。

关键词：甾体激素药物菜油甾醇孕烯醇酮合成生物学耶氏解脂酵母产量优化