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火龙果溃疡病菌实时荧光定量PCR内参基因的筛选

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生物技术通报 2023年第5期39卷 92-102页

作者：姚姿婷曹雪颖肖雪李瑞芳韦小妹邹承武朱桂宁广西壮族自治区农业科学院植物保护研究所、广西作物病虫害生物学重点实验室、农业农村部华南果蔬绿色防控重点实验室南宁530007 广西大学农学院南宁530004

火龙果溃疡病是由火龙果溃疡病菌引起的重要真菌病害,近年来在世界火龙果产区的爆发严重影响了火龙果产业的发展。为研究火龙果溃疡病菌响应逆境胁迫的基因表达和功能,需要筛选火龙果溃疡病菌在各种条件下表达稳定的内参基因。以火龙果... 详细信息

火龙果溃疡病是由火龙果溃疡病菌引起的重要真菌病害,近年来在世界火龙果产区的爆发严重影响了火龙果产业的发展。为研究火龙果溃疡病菌响应逆境胁迫的基因表达和功能,需要筛选火龙果溃疡病菌在各种条件下表达稳定的内参基因。以火龙果溃疡病菌菌株LJ02为研究对象,以在马铃薯葡萄糖液体培养基(PDW)培养的菌丝体为对照组,以在LB培养基培养的菌丝体和分别在添加过氧化氢、吡唑醚菌酯和苯醚甲环唑的PDW培养的菌丝体为处理组。利用实时荧光定量PCR技术以及内参基因稳定性评估软件(geNorm、NormFinder、Bestkeeper和RefFinder),评估18个候选内参基因(CYT1、SDH2_1、TBCC、SUI1、RPL19、PPH、ATP5B、UBE2_16、RPL13、UBE2_2、PRS17、SUCLA2、ATP5A、TUB1_2、ACT1、EFTU、EF1A和GAPDH)的表达稳定性。结果显示,火龙果溃疡病菌的18个候选基因在上述培养条件下的Ct值介于14.80-24.66之间,表达水平适中;稳定性最高的内参基因是CYT1,其次为SUI1,GAPDH和ACT1的稳定性最差;最少使用2个内参基因组合可以提高定量PCR分析结果的准确性,此时SUCLA2和ATP5A是最稳定的内参基因组合。该结果可为研究火龙果溃疡病菌生物学过程中的基因表达提供理论依据。

关键词：火龙果溃疡病菌内参基因实时荧光定量PCR 菌丝生长表达分析非生物胁迫内参基因分析软件

磷酸氢二铵对糙皮侧耳菌丝生长及基质降解酶活性的影响

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菌物学报 2022年第4期41卷 658-667页

作者：胡延如柴茜茜董浩哲文晴申进文河南农业大学生命科学学院河南郑州450002

氮源种类和浓度均会对糙皮侧耳Pleurotus ostreatus菌丝长势、生长速率以及代谢产生影响,而氮匮乏与氮过量积累都会对糙皮侧耳的生长产生不利影响。为了研究氮源对糙皮侧耳菌丝生长和基质降解酶活性的影响,本研究选取磷酸氢二铵[(NH4)2H... 详细信息

氮源种类和浓度均会对糙皮侧耳Pleurotus ostreatus菌丝长势、生长速率以及代谢产生影响,而氮匮乏与氮过量积累都会对糙皮侧耳的生长产生不利影响。为了研究氮源对糙皮侧耳菌丝生长和基质降解酶活性的影响,本研究选取磷酸氢二铵[(NH4)2HPO4]作为唯一氮源,通过在培养基中添加不同浓度的磷酸氢二铵检测糙皮侧耳菌丝生长速率和木质纤维素降解酶的活性,筛选出糙皮侧耳生长的最适磷酸氢二铵浓度。结果表明,当磷酸氢二铵的添加浓度区间为10–20 mmol/L时菌丝长势最好。以缺氮时的酶活作为对照,当磷酸氢二铵的添加浓度为10 mmol/L时,羧甲基纤维素酶的活力最强,显著高于对照组(P0.05);当添加浓度为40 mmol/L时,木聚糖酶的活力最强,显著高于对照组(P<0.05);当添加浓度为10mmol/L时,漆酶的活力最强,显著高于对照组(P<0.05)。基质降解酶活性越强,越有利于糙皮侧耳对基质的降解利用。本研究为糙皮侧耳的栽培提供理论和实践指导,对糙皮侧耳产业发展具有积极意义。

关键词：糙皮侧耳磷酸氢二铵酶活性菌丝生长

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培养料容重对黑木耳菌丝特性及出耳的影响

食用菌学报 2024年第3期31卷 29-34页

作者：包旭翔马银鹏卢方张介驰黑龙江省科学院微生物研究所黑龙江哈尔滨150010 黑龙江省科学院高技术研究院黑龙江哈尔滨150001

采用机械压料装置,通过湿热塑形制备0.72、0.80(对照)、0.88、0.96、1.04 g·cm^(-3)黑木耳(Auricularia heimuer)菌包,比较蒙古栎(Quercus mongolica)屑为主料的不同培养料容重对菌丝生长速度、CO_(2)释放和水分挥发强度、干物质分解... 详细信息

采用机械压料装置,通过湿热塑形制备0.72、0.80(对照)、0.88、0.96、1.04 g·cm^(-3)黑木耳(Auricularia heimuer)菌包,比较蒙古栎(Quercus mongolica)屑为主料的不同培养料容重对菌丝生长速度、CO_(2)释放和水分挥发强度、干物质分解利用、pH、电导率、胞外酶活性、木质纤维素含量和第一潮产量和性状的影响。结果表明:在实验范围内,与对照相比,容重最小(0.72 g·cm^(-3))时,侧面和垂直菌丝生长速度较快,干物质分解利用较多,体积消耗较少,pH较高,电导率较高,木质素、纤维素含量较高,出耳时间(8.00±1.00) d较短、耳片较长(8.93±1.29) cm、耳片较厚(0.39±0.09) mm、硬度(1.62±0.08) N和泡发率7.31±0.59较低;研究结果可为黑木耳培养料容重的选择提供参考。

关键词：袋栽黑木耳培养料容重菌丝生长干物质消耗木质纤维素降解

一株土壤来源的贝莱斯芽孢杆菌抑制黄曲霉生长机理研究

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河南工业大学学报（自然科学版） 2023年第1期44卷 68-74页

作者：王静张威樊磊谢澳文杨浩杰魏闪翟焕趁胡元森吕扬勇河南工业大学生物工程学院河南郑州450001

为了更加安全有效地防治黄曲霉及其毒素污染,从花生田地土壤中分离获得了一株对黄曲霉生长具有良好抑制作用的菌株,通过平板对峙试验,验证其拮抗黄曲霉的效果;通过16S rDNA序列分析、构建进化树以及生理生化指标明确菌株种属信息;通过... 详细信息

为了更加安全有效地防治黄曲霉及其毒素污染,从花生田地土壤中分离获得了一株对黄曲霉生长具有良好抑制作用的菌株,通过平板对峙试验,验证其拮抗黄曲霉的效果;通过16S rDNA序列分析、构建进化树以及生理生化指标明确菌株种属信息;通过发酵优化、孢子萌发试验,发现该菌株在葡萄糖培养基、蔗糖培养基、牛肉膏培养基中的发酵液均能抑制黄曲霉孢子萌发,其中在葡萄糖培养基中的发酵液抑制效果最强,并考察了其对黄曲霉菌丝生长及孢子产生的抑制作用;采用PI和DAPI染色探讨了发酵液抑制黄曲霉菌丝生长的机理。结果表明:分离获得的菌株在平板对峙试验中能够显著抑制黄曲霉菌落生长,该菌株为革兰氏阳性菌株贝莱斯芽孢杆菌;在葡萄糖培养基中发酵48 h获得的发酵液对黄曲霉孢子萌发抑制率最佳,达到79.35%;在固体PDA培养基上对黄曲霉菌落生长抑制率为29%,对孢子生成的抑制率为54%;染色结果显示,发酵液中的抑菌物质能够通过破坏黄曲霉细胞膜的通透性以及损伤DNA的方式抑制菌丝生长。该菌株及其发酵液对黄曲霉具有较好的防治作用,具有进一步开发为农产品防霉剂的潜力。

关键词：黄曲霉拮抗作用贝莱斯芽孢杆菌菌丝生长

草莓褐色叶斑病病原菌Pilidium lythri鉴定及室内防治药剂筛选

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农药学学报 2023年第5期25卷 1076-1084页

作者：闫奕彤孙浚源李福鑫张桂军闫哲黄中乔高慧鸽毕扬北京农学院农业农村部北方城市重点实验室北京102206 中国农业大学植物病理学系北京100193

近年来,由病原菌Pilidium lythri引起的草莓褐色叶斑病,是一种在中国发生严重的新病害。作者在2015年至2017年间,从北京市昌平区、山东省诸城市和湖南省娄底市采集有症状的草莓样品共90株,每地30株,根据形态学特征、分子生物学及系统发... 详细信息

近年来,由病原菌Pilidium lythri引起的草莓褐色叶斑病,是一种在中国发生严重的新病害。作者在2015年至2017年间,从北京市昌平区、山东省诸城市和湖南省娄底市采集有症状的草莓样品共90株,每地30株,根据形态学特征、分子生物学及系统发育分析,其中26株分离物被鉴定为P.lythri,并且山东和湖南系首次发现由P.lythri引起的草莓褐色叶斑病。鉴于目前中国还没有登记用于防治草莓褐色叶斑病的杀菌剂。本研究通过室内毒力测定法测定了26株P.lythri菌株对8种常用杀菌剂和1种新型杀菌剂双苯菌胺(SYP-14288)的敏感性。结果表明:SYP-14288对P.lythri菌丝生长的抑制活性最强,平均EC_(50)值为(0.33±0.06)μg/mL,可将其作为防治草莓褐色叶斑病的首选药剂;氟环唑、苯醚甲环唑、咪鲜胺、戊唑醇、百菌清和腈菌唑对P.lythri的平均EC_(50)值在3.92~72.58μg/mL之间,其中菌株对嘧菌酯和代森锰锌的敏感性较低。该研究结果可为合理使用杀菌剂防治由P.lythri引起的草莓褐色叶斑病提供参考。

关键词： Pilidium lythri 草莓褐色叶斑病菌丝生长双苯菌胺

核转运蛋白SsKapJ调控甘蔗鞭孢堆黑粉菌有性配合与菌丝生长

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菌物学报 2022年第3期41卷 478-491页

作者：陈金辉甘永健崔国兵邓懿祯华南农业大学植物保护学院广东省微生物信号与病害防控重点实验室群体微生物研究中心广东广州510642

为了研究核转运蛋白SsKapJ在甘蔗鞭孢堆黑粉菌中发挥的作用,本研究利用PEG介导的原生质体转化方法获得基因敲除突变体,并进行了相关生物学表型分析。结果显示潜在核转运蛋白基因SsKapJΔ突变体有性配合和菌丝生长显著减弱,转录组分析SsK... 详细信息

为了研究核转运蛋白SsKapJ在甘蔗鞭孢堆黑粉菌中发挥的作用,本研究利用PEG介导的原生质体转化方法获得基因敲除突变体,并进行了相关生物学表型分析。结果显示潜在核转运蛋白基因SsKapJΔ突变体有性配合和菌丝生长显著减弱,转录组分析SsKapJ参与环磷酸腺苷/蛋白激酶A(cAMP/PKA)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径调控。另一方面,SsKapJΔ突变体担孢子对吡唑醚菌酯杀真菌剂敏感性增强,但突变体对苯菌灵杀真菌剂敏感性以及环境胁迫测试(渗透压、细胞壁抑制剂、氧化还原和乙醇)中较野生型没有明显变化。本研究结果揭示了SsKapJ核转运蛋白在甘蔗鞭孢堆黑粉菌的有性配合和菌丝生长过程中具有重要调控作用,为后续开展核运输途径调控真菌有性配合/二态型转变研究提供基础。

关键词：甘蔗鞭孢堆黑粉菌有性配合核转运蛋白杀真菌剂菌丝生长

与兰茂牛肝菌菌丝生长相关的潜在小分子物质分析

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云南大学学报(自然科学版) 2023年

作者：陈幽幽刘佳艳张曦予袁鹏宇陈鹏至杨晓敏安霜周雪吕为王成凤董杰刘夏张实润李宗菊云南大学生命科学学院云南大学生态与环境学院云南大学国际河流与生态安全研究院

兰茂牛肝菌（Lanmaoa asiatica）为云南名贵的野生食用外生菌根真菌，在纯培养条件下菌丝生长极其缓慢.为进一步了解与兰茂牛肝菌纯培养菌丝生长相关的物质，本文同时运用核磁共振（1H-NMR）、气相质谱（GC-MS）和液相质谱（LC-MS）3种... 详细信息

兰茂牛肝菌（Lanmaoa asiatica）为云南名贵的野生食用外生菌根真菌，在纯培养条件下菌丝生长极其缓慢.为进一步了解与兰茂牛肝菌纯培养菌丝生长相关的物质，本文同时运用核磁共振（1H-NMR）、气相质谱（GC-MS）和液相质谱（LC-MS）3种代谢组学技术，分析纯培养35 d的菌丝体（J35）及其着生组织块（Z35）的小分子差异物质.研究结果表明，Z35与J35比较，有232个差异物质，其中谷氨酸等131个物质显著或极显著上调，而且4-氨基丁酸、琥珀酸、延胡索酸等12个物质仅在菌丝体中检测到. 131个上调的物质富集到了26条通路，其中影响最大的是丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸通路，丁酸通路，甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸通路.谷氨酸是链接三条通路的枢纽物质，4-氨基丁酸、琥珀酸、延胡索酸是丁酸通路的三大关键物质.丁酸通路是各条通路的核心，谷氨酸、4-氨基丁酸、琥珀酸、延胡索酸通过丁酸通路进入到营养代谢的中心（TCA循环），为菌丝的生长提供营养物质.谷氨酸等232个差异物质，对菌丝体生长可能起着一定的调控及促进作用.以上研究为兰茂牛肝菌的人工培养提供了一定的理论基础.

关键词：兰茂牛肝菌 H-NMR GC-MS LC-MS 菌丝生长小分子物质

贵州火龙果溃疡病有效药剂的筛选及田间防效评价

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中国南方果树 2022年第6期51卷 100-103页

作者：柏自琴赵晓珍李兴忠王彬马玉华贵州省农业科学院果树科学研究所贵阳550006

火龙果溃疡病是贵州火龙果重要病害,为筛选防治火龙果溃疡病的有效药剂,测定了12种化学药剂和11种生物药剂对火龙果溃疡病菌(新暗色柱节孢菌Neoscytalidium dimidiatum)菌丝生长速率的影响,并开展了田间药效试验。结果表明,50%多菌灵可... 详细信息

火龙果溃疡病是贵州火龙果重要病害,为筛选防治火龙果溃疡病的有效药剂,测定了12种化学药剂和11种生物药剂对火龙果溃疡病菌(新暗色柱节孢菌Neoscytalidium dimidiatum)菌丝生长速率的影响,并开展了田间药效试验。结果表明,50%多菌灵可湿性粉剂等7种化学药剂,以及1%申嗉霉素悬浮剂等4种生物药剂对火龙果溃疡病菌的抑制效果较好,EC_(50)<15 mg/L。田间药效试验发现,化学药剂中75%肟菌·戊唑醇水分散粒剂5000倍液,生物药剂中80%乙蒜素乳油5000倍液的防效最佳,分别为86.33%和70.63%。推荐75%肟菌·戊唑醇水分散粒剂、40%氟硅唑乳油、10%苯醚甲环唑水分散粒剂、80%乙蒜素乳油、0.3%四霉素水剂用于防控火龙果溃疡病。

关键词：火龙果溃疡病新暗色蛀节孢Neoscytalidium dimidiatum 菌丝生长 EC_(50) 田间防效

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寒地越冬模式下的羊肚菌生产菌株筛选

北方园艺 2023年第8期 115-120页

作者：马庆芳张丕奇马银鹏戴肖东田洁萍刘佳宁黑龙江省科学院微生物研究所黑龙江哈尔滨150010

以引进的22株羊肚菌生产菌株为试材,对比不同菌株cPDA平板培养基和栽培种培养基菌丝生长情况,寒地条件下暖棚内采用“秋播春收”模式,研究了cPDA培养基和栽培种培养基生长情况,并进行栽培比较试验,以期选育出适于寒冷地区栽培的优良生... 详细信息

以引进的22株羊肚菌生产菌株为试材,对比不同菌株cPDA平板培养基和栽培种培养基菌丝生长情况,寒地条件下暖棚内采用“秋播春收”模式,研究了cPDA培养基和栽培种培养基生长情况,并进行栽培比较试验,以期选育出适于寒冷地区栽培的优良生产菌株。结果表明:22个生产菌株,依据cPDA平板培养基生长情况可分为3个组群;依据栽培种生长情况可分为2个组群;从栽培试验结果看,9号菌株出菇早,产量最高,单畦产量为5 319 g;21、19号和12号菌株相较于9号菌株出菇晚,单畦产量分别为4 341、4 059 g和3 429 g,经3个生产周期多点试验栽培,均取良好效果,初步确认这4个菌株可在寒冷地区推广使用。

关键词：羊肚菌生产菌株菌丝生长栽培