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基于体内过程的防己黄芪汤干预阿霉素肾病药效成分定性和定量研究

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基于体内过程的防己黄芪汤干预阿霉素肾病药效成分定性和定量研究

作者：杨柳山西大学

学位级别：硕士

选题依据:防己黄芪汤始载于《金匮要略》,具有利水消肿、益卫固表等功效。近年来关于防己黄芪汤在临床上的应用主要集中于心源性水肿和肾病综合征等疾病,确切的利水消肿药理作用使得防己黄芪汤近年来越来越受到关注。到目前为止,课题组... 详细信息

选题依据:防己黄芪汤始载于《金匮要略》,具有利水消肿、益卫固表等功效。近年来关于防己黄芪汤在临床上的应用主要集中于心源性水肿和肾病综合征等疾病,确切的利水消肿药理作用使得防己黄芪汤近年来越来越受到关注。到目前为止,课题组前期通过谱效相关辨识黄芪在防己黄芪汤干预阿霉素肾病大鼠的药效成分群。同时,课题组前期建立了防己黄芪汤体内外化学成分的分析方法,初步研究了生理状态防己黄芪汤的体内代谢,但鉴定的成分较少,分析不全面,且未对病理状态下防己黄芪汤成分的吸收进行研究。因此,进一步基于体内过程辨识防己黄芪汤干预阿霉素肾病的药效成分,并确定药效成分的含量,是至关重要的。本研究首先基于UHPLC-Q-Exactive MS对防己黄芪汤入血、尿和粪便中的成分进行分析,明确防己黄芪汤在体内的代谢过程;其次进行动物实验的研究,构建阿霉素肾病大鼠模型,采用代谢组学结合多元统计分析比较两种机体状态下药物的吸收差异成分,明确防己黄芪汤干预阿霉素肾病的药效物质基础;最后,建立基于UPLC-Qtrap-MS技术同时测定防己黄芪汤中19种成分的方法。以期通过体内过程研究,明确防己黄芪汤治疗肾病综合征的物质基础,为防己黄芪汤进一步开发成组分明确、质量可控的中药复方制剂奠定基础,并且为黄芪资源分类评价提供依据。研究目的:本研究采用体内过程分析方法,辨识防己黄芪汤干预阿霉素肾病大鼠的药效成分群,为中药的物质基础研究提供思路,同时为黄芪的分类应用提供研究基础。研究方法:(1)通过UPLC-Q-Exactive MS分析对正常大鼠灌胃防己黄芪汤的血清样本进行体内成分代谢分析。通过多次给予SD大鼠高剂量防己黄芪汤后,甲醇蛋白沉淀法进行血清样品前处理,利用固相萃取处理尿样和粪便,结合体外二级离子碎片和Compound Discover 2.0软件预测,研究防己黄芪汤在生理状态下的原型化合物及其代谢产物;(2)采用代谢组学结合多元统计分析技术,对正常组(C)、模型组(M)、正常大鼠复方干预组(C-FHT)、模型大鼠复方干预组(M-FHT)的血清进行分析,确定复方发挥疗效的药效标志物;同时应用多元统计分析方法分析生理和病理状态下复方的体内代谢谱,分析其在两种机体状态下的吸收差异成分;最后通过相关性分析潜在药效成分与药效标志物之间的相关性,锁定复方的有效成分及其相关的代谢物;(3)利用UPLC-Qtrap-MS联用技术,通过优化色谱和质谱参数,建立了一种同时测定防己黄芪汤中19种成分的方法。研究结果:(1)通过UPLC-Q-Exactive MS分析,共鉴定了100个化合物,其中包括22种原型成分及78种代谢产物。结果表明:灌胃防己黄芪汤水提液后,大鼠血液、尿液和粪便中的主要化学成分为黄酮类化合物及其代谢产物。其中代谢产物主要是以毛蕊异黄酮与甘草异黄酮葡萄糖醛酸化的Ⅱ相代谢产物为主。上述结果提示这些入血成分可能是防己黄芪汤治疗阿霉素肾病的潜在的药效成分。(2)采用代谢组学技术对4组血清样本包括C、M、C-FHT、M-FHT,进行分析,结合多元统计分析筛选差异代谢物。通过内源性差异代谢物含量变化分析可以看出,生理状态下,防己黄芪汤可显著降低10-HDA含量,显著提高LPE含量(18:2),但对生理状态下的其他代谢物影响不显著。而在病理状态下,防己黄芪汤可显著逆转10-DHA,aspartyl-L-proline,2-methylbutyrylcarnitine,safingol,uric acid和Bis(4-ethylbenzylidene)sorbitol等6个代谢差异物的紊乱。进一步的代谢通路分析显示,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成、亚油酸代谢、苯丙氨酸代谢、鞘脂代谢等为关键通路。生理状态下与病理状态下吸收有差异的原型成分包括FanGhinoline、(+)-Tetrandrine、AtractylenolideIII、Liquiritin和Liquiritin。差异代谢产物包括M1、M2、M3、M4、M5、M6和M7等。通过相关分析可以得出,14个组分如FanGhinoline、(+)-Tetrandrine、AtractylenolideIII、AtractylenolideI、Liquiritin、isoLiquiritin和M1等与药效标志物高度正相关和负相关。然而,其在体内调节的具体关系还需进一步研究。(3)成功构建了基于UPLC-Qtrap-MS技术同时测定防己黄芪汤中19种指标成分的方法。这些成分包括芒柄花苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、紫檀烷、紫檀烷苷、异黄烷、甘草素、甘草苷、甘草次酸、粉防己碱、防己诺啉碱、白术内酯Ⅰ、白术内酯ⅡⅠ、异黄烷苷、黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ和黄芪皂苷Ⅲ和黄芪皂苷Ⅳ。采用多重反应监测模式(MRM)在正、负离子模式下进行检测。方法学结果表明:线性关系良好(R≥0.9990),加样回收率在96.10%-101.70%之间。该

关键词：防己黄芪汤肾病综合征代谢组学血清药物化学药效成分

巴戟胶囊浸膏药效成分含量测定和对骨质疏松大鼠的疗效及机制研究

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巴戟胶囊浸膏药效成分含量测定和对骨质疏松大鼠的疗效及机制研究

作者：李烨西南大学

学位级别：硕士

背景巴戟胶囊浸膏是上市中成药（国药准字Z20050069）,是由巴戟天、何首乌、淫羊藿、续断等16味中药材组成的复方制剂。功能：补肾壮腰,调经。主治：用于肾阳不足而致的神疲不振,腰膝软弱,亦用于夜尿频繁,月经不调。但该上市中成药... 详细信息

背景巴戟胶囊浸膏是上市中成药（国药准字Z20050069）,是由巴戟天、何首乌、淫羊藿、续断等16味中药材组成的复方制剂。功能：补肾壮腰,调经。主治：用于肾阳不足而致的神疲不振,腰膝软弱,亦用于夜尿频繁,月经不调。但该上市中成药缺乏药效成分含量的控制标准,临床应用中发现该制剂具有一定的改善更年期绝经后妇女骨质疏松的作用。本实验室受生产厂家重庆希尔安药业有限公司委托,进行巴戟胶囊质量控制标准提升,以及巴戟胶囊改善更年期妇女骨质疏松的效果验证,并研究其可能的作用机制。目的 1.建立巴戟胶囊浸膏药效成分含量测定方法,为制订其质量控制标准奠定基础,阐释临床疗效的物质基础。 2.观察巴戟胶囊浸膏对雌性去势骨质疏松模型大鼠的治疗效果,并初步探讨其作用机制,为临床扩大适应范围提供实验依据。方法 1.巴戟胶囊浸膏主要药效成分的含量测定参照《中国药典》一部（2010年版）,采用紫外分光光度法和高效液相色谱法对巴戟胶囊浸膏中与抗骨质疏松有关的主要药效物质总多糖、总蒽醌、二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚、淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ、阿魏酸、绿原酸、梓醇等成分进行检测,建立该制剂10种药效物质含量测定方法,为其复方质量标准的初步建立和药效学研究结果的进一步验证提供实验依据。 2.巴戟胶囊浸膏对雌性去势骨质疏松模型大鼠的药效学实验研究（1）巴戟胶囊浸膏对雌性去势大鼠骨质疏松模型血清生化指标的影响实验取70只SD大鼠,雌性,体重230士10.0g。随机分为7组,分别为模型对照组、中药（仙灵骨葆）阳性对照组（0.27g·kg-1·d-1）、西药（阿仑膦酸钠）阳性对照组（0.003g·kg-1·d-1）、假手术对照组、巴戟胶囊浸膏低剂量组（0.09g·kg-1·d-1）、巴戟胶囊浸膏中剂量组（0.27g·kg-1·d-1）、巴戟胶囊浸膏高剂量组（0.81g·kg-1·d-1）、每组10只。除假手术对照组外,所有大鼠均手术摘除卵巢建立骨质疏松动物模型,以阴道涂片和全身骨密度扫描判定造模是否成功。取造模成功的动物60只,术后1月开始给药,每天1次,连续灌胃3个月。假手术组和模型组给予同等量的溶媒。所有大鼠在给药结束时收集24h空腹尿液,称重后股动脉放血处死。取血清,检测钙（Ca）、磷（P）、1,25双羟维生素D3（1,25（OH）2VD3）碱性磷酸酶（AKP）及抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）的含量。取血浆,检测骨钙素（OC）、甲状旁腺素（PTH）及成骨生长肽（OGP）的含量。取24h上清尿液,检测尿胶原吡啶交联产物（PYD）的含量。（2）巴戟胶囊浸膏对雌性去势大鼠骨质疏松模型骨矿含量的影响实验动物分组及手术造模方法同上。大鼠处死后,取左侧股骨置于烤箱中60℃过夜,电子天平称其干重（g）,马氏炉中800℃锻烧6h,再称其灰重（g）。计算每克骨组织的灰分含量。取骨灰溶于混酸（浓硝酸：高氯酸=4：1）消化后,用TAS-990型原子吸收分光光度计测定骨铜、锌、铁、钙及镁的含量。（3）巴戟胶囊浸膏对雌性去势大鼠骨质疏松模型骨密度的影响实验动物分组及手术造模方法同上。大鼠处死后,取右侧股骨和腰椎（L1-4）,剔除软组织,用骨矿物质含量分析仪（美国GE公司生产的DPX型双能X线骨密度仪）测定大鼠右侧股骨和腰椎骨密度（BMD）。（4）巴戟胶囊浸膏对雌性去势大鼠骨质疏松模型骨形态计量学的影响实验动物分组及手术造模方法同上。大鼠处死后,取大鼠左侧胫骨和腰椎（L5）制作骨组织石蜡切片,HE染色,采用OLYMPUSDP72显微镜采集图像,Image-proplus6.0图像分析系统对骨组织形态计量学松质骨和皮质骨静态参数进行测量和计算。（5）巴戟胶囊浸膏对雌性去势大鼠骨质疏松模型骨生物力学的影响实验动物分组及手术造模方法同上。大鼠处死后,取股骨、腰椎试验。①股骨三点弯曲实验：取大鼠右侧股骨全长,剔除周围软组织后置于万能材料试验机上,支点跨距20mm,加压点为中点,选取标定载荷10kg,加载速度2mm-min-1,记录其载荷-位移曲线和应力-应变曲线。②腰椎压缩实验：完整取出腰椎（L1-4）,剔除周围软组织,剪除椎体上下椎间盘、棘突及附件,并用细砂纸打磨成上下平面平行且与纵轴垂直高度约为6.01mm的圆柱体后进行椎体压缩试验,取加载速度5.0mm-min-1,记录其载荷-位移曲线与应力-应变曲线。 3.巴戟胶囊浸膏对雌性去势骨质疏松模型大鼠的作用机制研究采用免疫组织化学方法检测骨保护素（Osteoprotegerin, OPG）和核因子KB受体活化因子配基（receptor activator of nuclear factor-κ B ligand, RANKL）的蛋白表达,初步探讨巴戟胶囊复方浸膏治疗绝经后骨质疏松症的作用机制。

关键词：巴戟胶囊浸膏骨质疏松症药效成分去卵巢骨保护素（OPG）核因子κB受体活化因子配体（RANKL）

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翻白草有效成分及其药理作用研究进展

实用中医药杂志 2024年第2期40卷 387-390页

作者：李英红张建博滕曼吴晨曦高秀娟江春花华北理工大学中医学院河北唐山063210

翻白草(Potentilla discolor Bunge)是蔷薇科委陵菜植物的带根全草,性平,味甘微苦,分布广泛,种类丰富,可清热凉血解毒,主治肺热咳喘、痢疾、疮疡等症。翻白草具有多类药效成分,其中以黄酮类、苷类、萜类、甾类和多酚类研究最为广泛[1];... 详细信息

翻白草(Potentilla discolor Bunge)是蔷薇科委陵菜植物的带根全草,性平,味甘微苦,分布广泛,种类丰富,可清热凉血解毒,主治肺热咳喘、痢疾、疮疡等症。翻白草具有多类药效成分,其中以黄酮类、苷类、萜类、甾类和多酚类研究最为广泛[1];其主要活性成分包括齐墩果酸、熊果酸、没食子酸、咖啡酸、木犀草素、槲皮素、山奈酚、原儿茶酸等[2-3]。

关键词：清热凉血解毒带根全草肺热咳喘翻白草甾类药效成分原儿茶酸齐墩果酸

不同生境因子组合对铁皮石斛生长发育及药效成分含量的影响

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不同生境因子组合对铁皮石斛生长发育及药效成分含量的影响

作者：唐丽吉首大学

学位级别：硕士

铁皮石斛(Dendrobium candidum Wall.ex Lindl.)为兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium)植物,是我国传统的珍惜名贵中药材,其在降血糖、提高免疫力、抗肿瘤等方面具有显著的功效。由于人们灭绝式的开采方式致使野生石斛资源日趋于枯竭,... 详细信息

铁皮石斛(Dendrobium candidum Wall.ex Lindl.)为兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium)植物,是我国传统的珍惜名贵中药材,其在降血糖、提高免疫力、抗肿瘤等方面具有显著的功效。由于人们灭绝式的开采方式致使野生石斛资源日趋于枯竭,故开展人工栽培及其技术研究对于保护石斛野生资源和满足市场需求具有重要意义。本研究考察了不同生长年龄铁皮石斛三大药效成分(总多糖、总生物碱及总黄酮)的含量差异、不同生境因子(光照、温度、水分、养分等)及其水平组合处理对铁皮石斛的光合特性、生长发育及三大药效成分含量的影响,以期为人工规模化栽培铁皮石斛提供科学依据。研究结果如下:1.不同生长龄铁皮石斛茎与叶中总多糖、总生物碱及总黄酮含量分析铁皮石斛总多糖主要集中于茎,含量较高(57%4%);总生物碱和总黄酮主要集中于叶,含量均较低;铁皮石斛二年生茎中的总多糖最高(35.32%),半年生叶中的总黄酮最高(0.104%),一年生叶中的总生物碱最高(0.036%)。若从总生物量、药效成分总量、生长周期以及生产成本等因素综合考虑,人工栽培的铁皮石斛应以3年生长龄采收为宜,不宜超过4年以上。2.不同生境因子组合处理下铁皮石斛叶绿素荧光光合特性研究日均高温(20.5℃)和中、低水平的光照(7200 Lx400 Lx)更有利于提高铁皮石斛叶绿素的含量。相对湿度对铁皮石斛叶绿素荧光光合参数影响最大,在日均湿度为82.5%的生境因子组处理下,铁皮石斛的表观电子传递速率(ETRmax)和半饱和光强(Ik)更高,而日均湿度低于62.5%对铁皮石斛的生长产生了胁迫伤害。试验组B(光照21600 Lx、日均温度20.5℃、日均湿度72.5%、0.05%养分)和试验组C(光照2400 lx、日均温度16.5℃,日均湿度72.5%、养分0.1%)这2个生境因子组合处理的叶绿素含量较高、ETR、PSⅡ原初光能转化效率(F/Fm)、实际光量子效率(Y(Ⅱ))等叶绿素荧光光合参数更优,有利于提高铁皮石斛的光合效率。3.不同生境因子组合处理对铁皮石斛生长发育特征的影响在不同生境因子组合处理下,各试验组铁皮石斛的株高、茎粗、叶片数、分蘖数以及生物量等生长发育指标之间存在明显差异。通过方差分析,可知4种生境因子对铁皮石斛生长发育指标影响效应的大小排序为:温度>光照>相对湿度>养分。以铁皮石斛的生物量为参考指标,根据极差分析可推论,对铁皮石斛生长发育及生物量积累最为有利的生境因子组合是:高光照(21600 Lx)、日均高温度(20.5℃)、日均相对中湿度(72.5%)、低养分(0.05%)即为试验组中的处理组B。4.不同生境因子组合处理对铁皮石斛总多糖、总生物碱及总黄酮含量的影响光照、温度、水分、营养等生境因子及其不同水平的组合对铁皮石斛的总多糖、总生物碱及总黄酮含量均产生明显的影响,根据方差分析的结果可知:光照对总多糖的百分含量影响最为显著;温度对总生物碱和总黄酮的影响最大;相对湿度对总多糖、总生物碱和总黄酮百分含量影响最大;养分对各成分含量的影响均不明显。总多糖是铁皮石斛最关键的质量评价标准,光照强度是决定铁皮石斛品质最重要的影响因子,根据极差分析可推论:光照强度2400 Lx、日均温度20.5℃、日均湿度72.5%、养分0.2%是更有利于提高铁皮石斛总多糖百分含量和产量的最佳组合。

关键词：铁皮石斛生境因子药效成分光合特性生长发育

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长白楤木大庆地区的引种及药效成分分析

长白楤木大庆地区的引种及药效成分分析

作者：宁德利黑龙江八一农垦大学

学位级别：硕士

长白楤木(Aralia Continentalis kitag)为多年生草本植物,既做中药用,又可做菜食用,极为珍贵。野生资源破坏严重,人工引种栽培长白楤木意义重大。同时对长白楤木药效成分的分析,为药材的质量评价提供科学依据。 1长白楤木的种子具有休... 详细信息

长白楤木(Aralia Continentalis kitag)为多年生草本植物,既做中药用,又可做菜食用,极为珍贵。野生资源破坏严重,人工引种栽培长白楤木意义重大。同时对长白楤木药效成分的分析,为药材的质量评价提供科学依据。 1长白楤木的种子具有休眠特性,正常情况下几乎不发芽。变温处理比恒温处理有利于长白楤木种子萌发,但没有经过GA处理变温后的发芽率高。IAA、2,4-D两种激素处理对长白楤木种子发芽有促进作用,明显比常规变温处理的缩短了种子的发芽时间。 2长白楤木引种至大庆地区经过一年时间的适应后物候表现基本正常,经过了极端最低气温-39.2℃,第二年植株正常开化结果,证明长白楤木引种工作获得成功。 3田间管理时注意遮荫和多浇水,移栽田要及时除草和松土,雨季注意排水,秋季进行培土,冬季可安全越冬。在大庆种植的长白楤木没有出现曾经报道过的病害,可能是预防措施得当或者是由于大庆地区干旱没有引发病害。嫩芽产量高的最佳密度为12株/m。 4利用分光光度法测定长白楤木各个部位都有药效成分的存在。总黄酮在叶中含量较高,以五年生为最高,就植株而言,则三年生的总体含量为高;皂苷主要集中在根部,随年份增长而不断增加含量,五年生植株达到19.939 mg/g;多糖含量主要在根部,三年生根为最多。

关键词：长白楤木种子休眠引种栽培药效成分含量测定

有限成分论和多成分论的辨析——中药药效成分争论的焦点

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医学与哲学 2005年第11X期26卷 64-65页

作者：吴虹魏伟安徽医科大学

辩证地分析了关于中药药效成分争论的焦点问题———有限成分论和多成分论,以及产生的根源,讨论了中药药效成分研究的方法和思路,并倡导实事求是的科研精神。

关键词：中药药效成分有限成分论多成分论辨析科研精神

升麻葛根汤不同提取方法药效成分化学动态变化研究

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升麻葛根汤不同提取方法药效成分化学动态变化研究

作者：赵雪黑龙江中医药大学

学位级别：硕士

中医传统的用药形式为中药汤剂,中药饮片在煎煮的过程中其有效成分的结构及其含量随着煎煮条件的变化均有可能发生改变。实验研究证明,不同药味配伍有时对某一化学成分的溶解度有影响,复方群药合煎液与单味分煎合并液所含的化学成分往... 详细信息

中医传统的用药形式为中药汤剂,中药饮片在煎煮的过程中其有效成分的结构及其含量随着煎煮条件的变化均有可能发生改变。实验研究证明,不同药味配伍有时对某一化学成分的溶解度有影响,复方群药合煎液与单味分煎合并液所含的化学成分往往有差异,药效也不完全相同。研究中药方剂有关单煎、合煎化学成分及其含量的变化,可为中药配方颗粒应用的可行性提供理论依据和指导意义。对研究中药治病机理,中药配伍机制及药效物质基础都具有重要的意义和作用。本实验以升麻葛根汤为研究对象,通过对其合煎液与单煎合并液中化学成分及含量变化的比较分析,研究中药复方汤剂不同制法对其有效成分溶出量的影响。升麻葛根汤源于《阎氏小儿方论》,又名平血饮,由升麻10g、葛根15g、芍药10g、甘草10g四味药组成。该方辛凉解肌,透疹解毒。主治麻疹初起,疹发不出,身热头痛,咳嗽等。虽然麻疹现代发病比较少见,但本方仍被广泛用于内、外、五官等多科疾病,如流行性感冒、荨麻疹、带状疱疹、单纯性疱疹、水痘、病毒性肠炎、急性肠炎、细菌性痢疾、肺炎、病毒性肝炎、鼻窦炎、中耳炎、痤疮等细菌或病毒等感染及发热性疾病的治疗。现代临床研究表明该方有治疗诸多疑难杂,屡见奇效,并在乙型肝炎及丙肝方面疗效显著本实验首先采用高效液相色谱法,建立了升麻葛根汤的HPLC指纹图谱;其次通过阴性、阳性对照液与全方煎煮液指纹图谱的比较研究,对全方22个色谱峰进行了归属分析,反映了该方的药效物质基础。又对全方合煎液,分煎液HPLC指纹图谱分析,结果显示升麻葛根汤不同方法提取溶液中化学成分未见明显变化。最后对不同方法提取液中四个主要指标成分进行含量测定,并通过SPSS16.0软件对其进行方差分析。结果显示,分煎液中异阿魏酸,葛根素,芍药苷和甘草酸的含量比合煎液增高,其中葛根素,芍药苷和甘草酸的含量与合煎液比较有极显著性差异(P成分含量的高低。升麻葛根汤合煎与分煎时化学成分含量有差异,这也可能导致它们在药效上会有差异因此研究升麻葛根汤不同制法对其有效成分溶出量的影响,为升麻葛根汤的工艺优化以及开发新的临床适应症提供了理论基础,为中药配方颗粒在临床应用的科学性、合理性提供重要依据。

关键词：升麻葛根汤药效成分 HPLC 指纹图谱

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木豆种质资源遗传多样性分析及药效成分评价

木豆种质资源遗传多样性分析及药效成分评价

作者：李拴林海南大学

学位级别：硕士

木豆[Cajanus cajan(L.)Millsp.]是重要的热带作物之一,具有很高的药用价值。本文在前人开展木豆种质资源遗传多样性和药用资源研究基础上,以国内外69份木豆种质资源为材料,利用形态标记和SSR标记对其进行遗传多样性分析,初步筛选出优... 详细信息

木豆[Cajanus cajan(L.)Millsp.]是重要的热带作物之一,具有很高的药用价值。本文在前人开展木豆种质资源遗传多样性和药用资源研究基础上,以国内外69份木豆种质资源为材料,利用形态标记和SSR标记对其进行遗传多样性分析,初步筛选出优异种质,并对其耐盐影响进行初步探究,通过总黄酮含量和主要药效成分测定对木豆药用价值进行评价,以期为药用新品种选育和应用提供基础。主要研究结果如下:1.形态多样性分析通过对69份木豆种质资源的10个质量性状和14个数量性状进行测定分析,结果表明:不同木豆种质资源之间形态性状差异显著,10个质量性状的遗传多样性指数较高,为0.546～1.000;14个数量性状变异系数为7.75%～23.39%。相关性分析表明,除授粉类型与其它质量性状都无相关性外,其余9个质量性状都与别的性状显著相关,抗虫性与生长习性、叶形、茎色和种子色斑均显著相关。单荚粒数与花期、单枝花序数、果荚长度、果荚宽度和粒长极显著正相关,与叶宽和粒宽显著负相关。据6个重要性状进行聚类分析,69份木豆种质资源可划分为中粒晚熟型、大粒中早熟型、小粒中早熟型3大类。2.SSR分子标记遗传多样性分析利用筛选出的42个多态性SSR标记对69份木豆种质进行遗传多样性分析,总共检测出118个等位位点,每个标记2～5个等位位点,平均每个标记2.8个。69份木豆种质资源间的遗传相似系数值大多分布在0.550～0.650之间,占检测总数的59.36%;通过聚类分析,在相似系数为0.578处将69份木豆资源分为4大类群。3.优异种质耐盐初步评价挑选5份不同来源的木豆,通过观测不同浓度Na Cl溶液对其种子萌发特性和幼苗生长状况发现,Na Cl胁迫能够显著抑制种子萌发及幼苗生长,在种子萌发期和幼苗期,5份木豆耐盐能力强弱次序并不完全一致,MD1和GX1为耐盐种质,YN6为盐敏感种质。萌发期和幼苗期,5份木豆Na Cl胁迫临界浓度分别为0.377～0.748%和0.275～0.510%。4.药效成分评价分别采用超声波法和超高效液相色谱-三重串联四极杆质谱法(UHPLC-QQQ-MS/MS)对69份木豆种质资源的总黄酮含量和木豆芪酸及6种黄酮成分含量进行测定,结果表明:69份不同木豆种质间总黄酮含量差异显著,变异范围为1.18%～10.98%。不同木豆种质间各药效成分含量差异显著,各药效成分之间具有显著相关性,柚皮素与槲皮素、牡荆苷、染料木素和木犀草素均呈极显著正相关(P药效成分进行聚类分析可将69份木豆种质资源分为4类。通过隶属函数法对69份木豆种质资源的药用价值进行综合评价,筛选出药用价值最高和最低各5份木豆资源。

关键词：木豆种质资源遗传多样性盐胁迫药效成分优异种质

益智仁盐炙后石油醚部位药效成分分离与药效验证

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益智仁盐炙后石油醚部位药效成分分离与药效验证

作者：龚晓猛成都中医药大学

学位级别：硕士

中药益智仁为姜科山姜属植物益智Alpinia oxyphylla Miq.经过干燥的成熟果实。通过对益智仁的“缩尿”作用研究,结果表明益智仁盐炙后“缩尿”作用明显增强,并明确了发挥药效作用的化学成分是盐炙益智仁石油醚部位,同时建立药效部位的... 详细信息

中药益智仁为姜科山姜属植物益智Alpinia oxyphylla Miq.经过干燥的成熟果实。通过对益智仁的“缩尿”作用研究,结果表明益智仁盐炙后“缩尿”作用明显增强,并明确了发挥药效作用的化学成分是盐炙益智仁石油醚部位,同时建立药效部位的指纹图谱,为进一步研究益智仁“缩尿”作用的机理奠定了基础。益智仁主要含有挥发油,也是发挥药效作用的物质基础。益智仁盐炙后“缩尿”作用的药效物质基础没有明确,本实验针对益智仁盐炙前后缩尿药效作用的变化,采用系统溶剂法筛选药效作用的主要部位,发现石油醚部位是缩尿药效作用的主要部位,进行化学成分的分离与鉴定,并验证化学成分的缩尿药效作用。通过比较益智仁盐炙前后肠吸收的差异,发现盐炙后吸收量高于生品益智仁。目的:针对益智仁盐炙的特征药效组分——石油醚部位,并进一步建立石油醚部位的HPLC化学成分指纹图谱,关联化学成分与健康豚鼠离体膀胱逼尿肌生理抑制作用,研究盐炙益智仁“缩尿”作用的药效成分及“缩尿”作用的机理。本课题以益智仁盐炙前后引起的药效改变的主要活性成分为研究重心,采用“建立谱效关系——定位活性成分——单味活性成分的变化”等综合研究思路和模式,反映益智仁单味药炮制前后主要活性成分在盐炙前后的动态变化、转化机制,促进中医药理论的发展。方法:建立盐炙益智仁石油醚部位的特征指纹图谱,并结合药效学,深入研究盐炙益智仁发挥“缩尿”作用的物质基础。采用现代化学成分研究方法,对盐炙益智仁石油醚部位的化学成分进行分离及结构鉴定,并在化学指纹图谱指认分离的单一化学成分对应的特征峰。结合药理学与药效学研究方法,采用豚鼠离体膀胱逼尿肌进行药效学验证实验,分析肌条收缩的平均张力和抑制率。结果:建立了分离效果好,特征峰明显的益智仁盐炙的石油醚部位(药效部位)特征化学成分指纹图谱。化学成分指纹图谱特征峰(按特征共有峰编号)代表的药效作用贡献大小顺序:为20号>9号>11号>17号>16号>13号>15号>24号>18号>23号>14号>32号>34号>22号>25号>19号>31号>27号>21号>29号>28号>30号,明盐炙益智仁“缩尿”作用是多个化学成分协同发挥药效作用的结果。盐炙益智仁石油醚部位成分分离并鉴定出9个化合物(11-hydroxy-valenc-1(10)-en-2-one、圆柚酮、teucrenone、7-epi-teucrenone B、12-Hydroxynootkatone、杨芽黄素、β-谷甾醇、胡萝卜苷、棕榈酸),通过药效学验证7-epi-teucrenone B(7-表-香科酮)与温肾缩尿密切相关。结论:所构建的盐炙益智仁石油醚部位HPLC指纹图谱重复性好,稳定性高,方法简单,可为盐炙益智仁的缩尿药效评价提供参考;利用灰关联分析方法,表明盐炙益智仁的石油醚部位的化学成分指纹图谱与药效“缩尿”作用有明显的对应关系,并通过药效学与药理学验证,表明盐炙益智仁石油醚部位分离得到的7-epi-teucrenone B可能是通过拮抗磷酸组胺的H受体释放从而抑制豚鼠膀胱逼尿肌收缩张力。说明盐炙益智仁石油醚部位中的7-epi-teucrenone B可能为盐炙益智仁缩尿主要有效成分。

关键词：盐炙益智仁指纹图谱谱效关系药效成分膀胱逼尿肌缩尿