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荧光蛋白开启健康奥秘之门

科学之友 2011年第9期 40-41页

作者：杨先碧河南省周口市委

最近,韩国研究人员培育出一只小猎犬。这条狗看上去与一般的小狗没有两样,那么科学家为什么花那么大的心思去培育呢？把这条狗放在黑暗中,就可以看出它的与众不同之处：它的爪子居然在黑暗中能发出绿光。

关键词：荧光蛋白健康项目负责人研究人员科学家培育猎犬狗

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荧光蛋白可协助破译斑马鱼“想法”

黑龙江科技信息 2013年第6期 I0017-I0018页

中国科技网讯据《新科学家》杂志网站近日报道，斑马鱼发现了它的午餐，它的大脑在想什么？现在，我们第一次能确切看到它的想法，而这要感谢一种研究单个神经元的新方式，可使研究人员追踪活体动物的大脑活动模式。相关研究报告发表在... 详细信息

中国科技网讯据《新科学家》杂志网站近日报道，斑马鱼发现了它的午餐，它的大脑在想什么？现在，我们第一次能确切看到它的想法，而这要感谢一种研究单个神经元的新方式，可使研究人员追踪活体动物的大脑活动模式。相关研究报告发表在《当代生物学》杂志上。

关键词：斑马鱼荧光蛋白破译《新科学家》中国科技网活动模式活体动物研究人员

CRISPR-Cas9基因编辑技术对细胞内源蛋白进行荧光标记的实验操作

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遗传 2023年第2期45卷 165-175页

作者：吴仲胜高誉杜勇涛党颂何康敏中国科学院遗传与发育生物学研究所分子发育生物学国家重点实验室北京100101 中国科学院大学北京100049

CRISPR-Cas9是目前广泛应用的基因编辑技术,可对目的基因进行高效精准编辑,快速实现目的基因的敲除或敲入。Cas9蛋白在sgRNA引导下对靶序列进行剪切并造成DNA双链断裂,在与剪切位点两端同源的DNA模板序列存在时,可通过同源重组修复方式... 详细信息

CRISPR-Cas9是目前广泛应用的基因编辑技术,可对目的基因进行高效精准编辑,快速实现目的基因的敲除或敲入。Cas9蛋白在sgRNA引导下对靶序列进行剪切并造成DNA双链断裂,在与剪切位点两端同源的DNA模板序列存在时,可通过同源重组修复方式引入外源序列,实现荧光蛋白或其他标签在基因组上的精准敲入,进而实现对内源蛋白进行荧光标签的融合标记。通过基因编辑技术对内源目的蛋白进行标记,可避免由于过表达造成蛋白质定位、动力学或功能等的潜在影响,可显著提升细胞成像实验的稳定性和可重复性。本文重点介绍了利用CRISPR-Cas9基因编辑系统对目的蛋白进行荧光蛋白或自标记蛋白标签标记的方法与操作流程,为构建内源蛋白荧光标记的哺乳动物细胞系提供参考。

关键词： CRISPR-Cas9基因编辑活细胞内源蛋白荧光蛋白自标记蛋白标签

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基于荧光蛋白的防晒剂研制

浙江师范大学学报（自然科学版） 2021年第1期44卷 75-83页

作者：王慧慧石蒙蒙周宏飞刘杰孙梅好浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004

为分析湛蓝色荧光蛋白(marine fluorescent protein,MFP)作为蛋白防晒剂的可行性,通过PCR定点突变、原核表达和亲和层析纯化获得MFP,并通过UVB紫外线照射大肠杆菌存活实验初步分析了MFP吸收紫外线的能力,采用噻唑蓝法(thiazolyl blue te... 详细信息

为分析湛蓝色荧光蛋白(marine fluorescent protein,MFP)作为蛋白防晒剂的可行性,通过PCR定点突变、原核表达和亲和层析纯化获得MFP,并通过UVB紫外线照射大肠杆菌存活实验初步分析了MFP吸收紫外线的能力,采用噻唑蓝法(thiazolyl blue tetrazolium bromide assay,MTT法)分析了MFP对细胞的毒理性.结果表明:MFP将250~400 nm波长的紫外线吸收后释放的荧光波长大于400 nm,吸收峰波长为280 nm(εmax280为3.27×10^4 L·mol^-1·cm^-1)和365 nm(εmax365为1.54×10^4 L·mol^-1·cm^-1);在大肠杆菌内表达MFP可提高菌株抗紫外线的能力;c MFP蛋白类防晒剂的开发奠定了一定的理论基础.

关键词：荧光蛋白防晒剂蛋白纯化光谱分析细胞毒理性分析

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体外双分子荧光蛋白检测化学交联剂的研究

化学与生物工程 2021年第8期38卷 55-63页

作者：王菲滕霄曹雪松聊城大学生命科学学院山东聊城252000

化学交联剂可用于研究蛋白质相互作用。分别以戊二醛和甲醛为交联剂,以Ni NTA Beads为固体介质,利用红色荧光蛋白(mCherry)和高可溶性绿色荧光蛋白(soluble GFP,sGFP)进行交联反应,通过激光共聚焦显微镜观察检测固体介质上双荧光强弱来... 详细信息

化学交联剂可用于研究蛋白质相互作用。分别以戊二醛和甲醛为交联剂,以Ni NTA Beads为固体介质,利用红色荧光蛋白(mCherry)和高可溶性绿色荧光蛋白(soluble GFP,sGFP)进行交联反应,通过激光共聚焦显微镜观察检测固体介质上双荧光强弱来判断交联效果并对交联效率进行评估,开发了一种快速、简便、高通量的体外初步筛选化学交联剂的荧光直观化检测新方法。结果表明:以戊二醛为交联剂时,最佳交联浓度为1.0%,交联效果显著,交联效率为95.6%;以甲醛为交联剂时,最佳交联浓度为1.5%,交联效果明显,交联效率为90.9%。通过激光共聚焦显微镜观察及交联效率评估,可以直观地检测到戊二醛、甲醛均使等比例mCherry和sGFP发生交联反应,与传统检测技术SDS-PAGE法的检测结果一致;并且对于戊二醛、甲醛作为交联剂的微量非等比例双分子荧光蛋白的交联反应,同样可以直观地检测到交联效果。该研究为体外检测荧光蛋白质交联反应中的化学交联剂的研究提供了一个简便、高效的直观化技术手段,同时也为体外初步大量快速筛选蛋白质交联反应化学交联剂提供了技术可能性。

关键词：荧光蛋白化学交联剂荧光检测交联效率

基于FRET荧光蛋白探针的活体定量分子影像方法探究

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北京生物医学工程 2016年第6期35卷 566-570页

作者：王颖奇唐吉刘晴白净刘晓冬清华大学医学院生物医学工程系北京100084 清华大学生命科学学院北京100084

目的荧光共振能量转移(fluorescent resonance energy transfer,FRET)探针由于自身仍存在诸多局限,其在活体成像领域尚未得到广泛应用。本文旨在解决FRET探针在活体定量分子影像应用中所存在的瓶颈问题,即如何利用FRET探针精准计算目标... 详细信息

目的荧光共振能量转移(fluorescent resonance energy transfer,FRET)探针由于自身仍存在诸多局限,其在活体成像领域尚未得到广泛应用。本文旨在解决FRET探针在活体定量分子影像应用中所存在的瓶颈问题,即如何利用FRET探针精准计算目标物浓度,以及如何基于FRET探针实现三维成像。方法基于探针和目标物结合时的化学反应平衡关系,提出一种新型分析方法,以精确定量待测物[钙调素(calmodulin,Ca M)]的浓度。同时对于FRET探针的活体分子成像,结合荧光透射成像(3DFMT)方法,建立了可进行三维时空动态FRET检测的平台系统,对FRET探针的测量结果(即待测物浓度)进行实时定量的三维重建。结果准确地定量了待测物Ca M浓度,并得到了高质量的3D-FRET分布影像。结论提出FRET探针在活体成像应用领域两个关键问题的解决方案,为基因编码FRET探针向活体分子影像领域的推广奠定了重要的技术基础。

关键词：荧光共振能量转移基因编码FRET探针荧光蛋白荧光断层成像钙调素

荧光蛋白化学修饰在生物化学应用技术中的设想

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化工管理 2018年第3期 90-91页

作者：陈醒豪江西省修水英才中学江西修水332400

荧光蛋白的原理和研究进展对现代生命科学具有划时代的意义。至今,荧光蛋白已在生命科学领域被广泛利用,极大地推进荧光蛋白标记技术在观察生命生物学过程中的应用。同时,随着各种荧光蛋白研究的深入与发展,荧光蛋白工程技术不断取得新... 详细信息

荧光蛋白的原理和研究进展对现代生命科学具有划时代的意义。至今,荧光蛋白已在生命科学领域被广泛利用,极大地推进荧光蛋白标记技术在观察生命生物学过程中的应用。同时,随着各种荧光蛋白研究的深入与发展,荧光蛋白工程技术不断取得新的突破,其中,基因工程改造和蛋白质化学修饰荧光蛋白成为研究热点。本文以蛋白质化学修饰为例,探讨蛋白质化学修饰在荧光蛋白工程中原理、方法和设想,旨在提升荧光蛋白的应用价值。

关键词：荧光蛋白蛋白化学修饰生物化学技术应用

基于荧光蛋白FRET特性DasR与效应小分子的相互作用

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石河子大学学报(自然科学版) 2017年第4期35卷 397-401页

作者：魏文平叶邦策华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室石河子大学化学和化学工程学院

本研究利用黄色荧光蛋白(YFP)和青色荧光蛋白(CFP)构建含有DasR蛋白的双荧光蛋白融合蛋白,以效应小分子与DasR作用前后导致的双荧光蛋白FRET效应变化为指标考察DasR与效应小分子的相互作用。研究结果表明:效应小分子与DasR的相互作用可... 详细信息

本研究利用黄色荧光蛋白(YFP)和青色荧光蛋白(CFP)构建含有DasR蛋白的双荧光蛋白融合蛋白,以效应小分子与DasR作用前后导致的双荧光蛋白FRET效应变化为指标考察DasR与效应小分子的相互作用。研究结果表明:效应小分子与DasR的相互作用可以通过荧光蛋白FRET特性有效的呈现;该荧光蛋白系统能够反映出单独的DasR小分子结合结构域与效应物质的相互作用。本研究方法为研究调控蛋白与效应小分子相互作用、调控蛋白效应分子的高通量筛选等方面提供了理论借鉴与方法学参考。

关键词：荧光蛋白 FRET DasR 相互作用

基于荧光蛋白模型抗原的活体免疫应答光学成像研究

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