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荧光蚕丝合成技术的研究探讨

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江苏丝绸 2024年第4期53卷 4-6,9页

作者：倪烨燕张玲陈忠立范爱佳马泽岩苏州经贸职业技术学院纺织服装与艺术传媒学院江苏苏州215000 鑫缘茧丝绸集团有限公司江苏南通226600

荧光蚕丝由于其优异的荧光特性和物理性能,可用于生物成像、智能服装等领域。本文总结了制备荧光蚕丝的两类方法,并对每种改性方法进行技术探讨,为光学功能化蚕丝领域的研究提供参考。

关键词：荧光蚕丝天然改性后处理

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转基因家蚕/细胞表达hGM-CSF和绿色荧光蚕丝的制备

转基因家蚕/细胞表达hGM-CSF和绿色荧光蚕丝的制备

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作者：陈慧梅苏州大学

学位级别：硕士

人粒-巨噬细胞集落刺激因子(human granulocyte-macrophage colony stimulating factor ,hGM-CSF)是一造血刺激因子,能够刺激T细胞和巨噬细胞增殖、成熟和分化,提高机体免疫力,具有十分重要的临床应用价值,在国际生物技术制药市场上也... 详细信息

人粒-巨噬细胞集落刺激因子(human granulocyte-macrophage colony stimulating factor ,hGM-CSF)是一造血刺激因子,能够刺激T细胞和巨噬细胞增殖、成熟和分化,提高机体免疫力,具有十分重要的临床应用价值,在国际生物技术制药市场上也占有重要的位置。家蚕(Bombyx mori)属于鳞翅目蚕蛾科,能大规模饲养,遗传背景比较清楚,其丝腺具有强大合成和分泌丝蛋白的能力。为探讨在家蚕丝腺特异性表达hGM-CSF的可能性,以家蚕丝素轻链基因(fib-L)组序列为左(约1.2kb)、右(约0.5kb)同源臂,用丝素重链基因(fib-H)启动子控制hGM-CSF基因,家蚕肌动蛋白A3启动子控制GFP报告基因,构建了轻链基因打靶载体pSK-FibL-L-A3GFP-PH-GMCSF-LPA-FibL-R;通过精子介导法将该载体导入初产卵,首先在G0代通过绿色荧光筛选荧光蚕,由PCR和DNA杂交结果证实所筛选出的荧光蚕为转基因家蚕;western blot检测结果显示,在G3代后部丝腺组织中可检测到分子量为22 kDa的hGM-CSF特异性条带;ELISA分析结果显示,hGM-CSF在转基因后部丝腺组织的表达水平为2 700 pg/g冻干粉。表明通过基因打靶可以将外源基因导入希望的家蚕基因组位点,并实现表达。缺失丝素轻链基因的第6外显子第30核苷酸下游区域不影响家蚕的吐丝结茧。为了能通过遗传分子来改造家蚕丝,本研究构建轻链基因打靶载体pSK-FibL-L-GFP-FibL-R,以丝素蛋白轻链基因组终止密码TAA上游1.2 kb和TAA下游0.5 kb左右的片段为同源臂,将绿色荧光蛋白(GFP)基因的DNA序列克隆进二同源臂之间,使GFP基因的读码框与丝素蛋白轻链基因的读码框一致,转基因载体通过精子介导法将该载体导入初产卵,并结合分子生物学检测,获得了能吐绿色荧光丝的基因打靶蚕。有关结果为分子设计改变蚕丝的性状奠定了基础。另外,我们建立了非转座子载体介导的持续表达外源基因的转化家蚕BmN细胞系,我们将家蚕核型多角体病毒极早期基因(ie-1)启动子控制的人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)基因的表达盒克隆进pIZT/V5-His获重组pIZT-IE-hGM-CSF,该载体转染家蚕BmN细胞后,通过博莱霉素(zeocin)筛选获得了稳定转化细胞系IE-hGM-CSF。转基因细胞基因组经PCR鉴定,成功检测到ie-hGM-CSF,western blot分析结果显示转化细胞表达的重组hGM-CSF的为22 kDa,ELISA检测结果显示hGM-CSF在转化细胞系里的表达水平大约为2 814.7 pg/106个细胞。

关键词：家蚕基因打靶 hGM-CSF 荧光蚕丝转化细胞

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