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碱性成纤维细胞生长因子荧光真核表达载体构建及对过氧化氢诱导血管内皮细胞凋亡的影响

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中国组织工程研究与临床康复 2011年第24期15卷 4427-4431页

作者：徐彬林桂先武晓英毛建文广东药学院生命科学与生物制药学院广东省广州市510006 广东药学院基础学院广东省广州市510006

背景:已证实外源性碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)可抑制血管内皮细胞凋亡。目的:构建表达bFGF的荧光真核表达载体,探讨其对过氧化氢(H2O2)诱导的血管内皮细胞凋亡和凋亡相关蛋白的影响。方法:通过基因... 详细信息

背景:已证实外源性碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)可抑制血管内皮细胞凋亡。目的:构建表达bFGF的荧光真核表达载体,探讨其对过氧化氢(H2O2)诱导的血管内皮细胞凋亡和凋亡相关蛋白的影响。方法:通过基因亚克隆构建荧光真核表达载体pcDNA3.1-bFGF-GFP,利用脂质体介导将bFGF基因导入人脐静脉内皮细胞内,通过荧光观察和RT-PCR检测基因的表达。实验分为3组,对照组(转染pcDNA3.1)、过氧化氢组(转染pcDNA3.1+H2O2)和bFGF转染+过氧化氢组(转染pcDNA3.1-bFGF-GFP+H2O2),流式细胞术测定细胞凋亡率,Western blot检测caspase-3 P17活性亚单位和Bax蛋白表达。结果与结论:成功构建荧光真核表达载体pcDNA3.1-bFGF-GFP,该载体转染人脐静脉内皮细胞后,bFGF mRNA显著增加,并可观察到绿色荧光。与对照组相比,过氧化氢组细胞凋亡率和caspase-3 P17活性亚单位、Bax蛋白的表达量都明显增加(P表达量则比过氧化氢组显著降低(P表达和caspase-3活性有关。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子荧光真核表达载体血管内皮细胞凋亡过氧化氢 Bax蛋白

胰高糖素样肽-1基因荧光真核表达载体的构建及鉴定

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免疫学杂志 2006年第5期22卷 585-586页

作者：张昌菊余云芳易凤华张谨三峡大学医学院免疫学重点实验室湖北宜昌443002 Division of Cell and Molecular Biology Toronto General Research Institute University of Toronto 三峡机场急救中心湖北宜昌443007

胰高糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1，GLP-1）是近年来人们广泛关注的治疗糖尿病的最有前景的侯选药物。pEYFP-N1是一系列绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP的衍生蛋白之一，本实验构建了绿色荧光蛋白融合G;[P-1基因的... 详细信息

胰高糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1，GLP-1）是近年来人们广泛关注的治疗糖尿病的最有前景的侯选药物。pEYFP-N1是一系列绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP的衍生蛋白之一，本实验构建了绿色荧光蛋白融合G;[P-1基因的表达载体。该载体为糖尿病的进一步研究奠定了实验基础。

关键词：荧光真核表达载体胰高糖素样肽 1基因绿色荧光蛋白 protein 鉴定 GLP-1 蛋白融合

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bFGF荧光真核表达载体构建及表达

广东医学 2002年第8期23卷 796-798页

作者：张丽君王捷丁焕文郭勇杨传红冼江郑文岭广州军区总医院医学实验科广州510010 华南理工大学食品与生物工程学院广州510640

目的　构建可在哺乳细胞中表达碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor ,bFGF)的荧光真核表达载体 ,以便进一步转染成骨细胞 ,研究bFGF基因转移在骨组织工程学中的应用。方法　应用基因重组技术 ,将已经克隆的bFGF基因从P... 详细信息

目的　构建可在哺乳细胞中表达碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor ,bFGF)的荧光真核表达载体 ,以便进一步转染成骨细胞 ,研究bFGF基因转移在骨组织工程学中的应用。方法　应用基因重组技术 ,将已经克隆的bFGF基因从PBR3 2 2 -bFGF载体上亚克隆到荧光真核表达载体pEGFP -C3 ,构建的重组质粒经脂质体介导转染 3T3细胞 ,3 6h后观察瞬时表达情况。结果　①酶切、PCR和DNA序列鉴定均证实插入片段的正确性。②荧光显微镜下观察GFP的表达情况 ,观察到部分经转染的细胞发出绿色荧光 ;免疫组化检测bFGF的表达分泌情况 ,结果显示部分经转染的细胞呈阳性 (棕色颗粒 )。结论　成功地构建了bFGF荧光真核表达载体pEGFP -C3 -bFGF ,并在 3T3细胞中表达了bFGF。

关键词： bFGF基因荧光真核表达载体基因转染碱性成纤维细胞生长因子骨组织工程基因表达

人肝素酶基因正反义荧光真核表达载体的构建及肺癌细胞转染

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第四军医大学学报 2004年第13期25卷 1215-1217页

作者：牛会军杨仕明范士志蔡永国房殿春罗元辉王东旭第三军医大学西南医院全军消化中心重庆400038 第三军医大学大坪医院心胸外科重庆400042

目的 :构建正义和反义人肝素酶与绿色荧光蛋白真核共表达载体 ,并分别转染人低转移肺癌细胞株 95C及高转移细胞株 95D .方法 :采用基因重组技术 ,用EcoRⅠ从pcD NA3 Hpa质粒上切下约 1 .7kb的人肝素酶全长cDNA片段 ,然后连入pIRES2 EGF... 详细信息

目的 :构建正义和反义人肝素酶与绿色荧光蛋白真核共表达载体 ,并分别转染人低转移肺癌细胞株 95C及高转移细胞株 95D .方法 :采用基因重组技术 ,用EcoRⅠ从pcD NA3 Hpa质粒上切下约 1 .7kb的人肝素酶全长cDNA片段 ,然后连入pIRES2 EGFP质粒的EcoRⅠ酶切位点上 ,经BamHⅠ酶切鉴定出正义和反义表达载体 ,并用脂质体法将肝素酶正义真核表达载体转入人低转移肺癌细胞株 95C、反义真核表达载体转入人高转移肺癌细胞株 95D ,G4 1 8筛选后 ,荧光倒置显微镜检测转染结果 .结果 :经BamHⅠ酶切后 ,正义质粒形成 5 .3+1 .7kb两条DNA片段 ,而反义重组质粒为 6 .5和 0 .5kb两条DNA片段 ,与理论计算值完全一致 ;转染后肺癌细胞倒置荧光显微下呈绿色荧光 .结论 :成功构建了人肝素酶的正、反义真核表达载体 ,并成功转染人低、高转移肺癌细胞株 ,为进一步研究正。

关键词：肝素酶正、反义基因荧光真核表达载体转染

正、反义Heparanase基因荧光真核表达载体的构建及胰腺癌SW1990细胞转染

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昆明医学院学报 2006年第2期27卷 31-34页

作者：杨彦陈陵崔明段体德成都军区昆明总医院普通外科昆明650032 第三军医大学西南医院消化专科中心重庆400038 昆明医学院第一附属医院普通外科昆明650032

目的构建正、反义人肝素酶绿色荧光蛋白真核共表达载体,并转染人胰腺癌SW 1990细胞.方法用EcoR I从pcDNA3-Hpa质粒上切下约1.7 kb的人肝素酶全长cDNA片段,然后连入pIRES2-EGFP质粒的EcoR I酶切位点上,经BamH I酶切鉴定出正义和反义表达... 详细信息

目的构建正、反义人肝素酶绿色荧光蛋白真核共表达载体,并转染人胰腺癌SW 1990细胞.方法用EcoR I从pcDNA3-Hpa质粒上切下约1.7 kb的人肝素酶全长cDNA片段,然后连入pIRES2-EGFP质粒的EcoR I酶切位点上,经BamH I酶切鉴定出正义和反义表达载体,并进一步测序确认.用脂质体法将肝素酶正、反义真核表达载体转染人胰腺癌SW 1990细胞,24 h后荧光倒置显微镜下检测转染结果.结果经BamH I酶切后,正义质粒形成5.3 kb和1.7 kb两条DNA片段,反义重组质粒为6.5 kb和0.5 kb两条DNA片段,与理论计算值一致;测序结果进一步确认了方向的正确性.转染成功的胰腺癌细胞在倒置荧光显微镜下呈绿色荧光.结论成功构建了人肝素酶正、反义真核表达载体,并成功转染人胰腺癌细胞株SW 1990,为进一步研究正、反义肝素酶基因转染对胰腺癌细胞的转移能力的影响奠定基础.

关键词：肝素酶荧光真核表达载体转染

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ClC-3荧光真核表达载体的构建及表达

中国当代医药 2013年第29期20卷 4-5,8页

作者：杨清松张守盼林卓华毛建文徐彬广东药学院生命科学与生物制药学院广州510006 中国科学院大学北京100049 广东药学院基础学院广州510006

目的构建表达ClC-3的荧光真核表达载体,为研究其在肿瘤细胞中的作用提供分子工具。方法将ClC-3的编码序列亚克隆到pEGFP-N1质粒,构建荧光真核表达载体pEGFP-N1/ClC-3,利用脂质体介导将ClC-3基因导入人乳腺癌细胞MCF-7内,通过绿色荧光观... 详细信息

目的构建表达ClC-3的荧光真核表达载体,为研究其在肿瘤细胞中的作用提供分子工具。方法将ClC-3的编码序列亚克隆到pEGFP-N1质粒,构建荧光真核表达载体pEGFP-N1/ClC-3,利用脂质体介导将ClC-3基因导入人乳腺癌细胞MCF-7内,通过绿色荧光观察检测基因的表达。结果成功构建荧光真核表达载体pEGFP-N1/ClC-3,该载体转染MCF-7细胞后,可观察到绿色荧光。结论表达ClC-3的荧光真核表达载体构建成功,并在乳腺癌细胞中得到正确表达,为进一步研究ClC-3在乳腺癌中的作用奠定了基础。

关键词： ClC-3 MCF-7细胞荧光真核表达载体转染

碱性成纤维细胞生长因子真核荧光表达载体的构建

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郑州大学学报（医学版） 2004年第4期39卷 578-581页

作者：许予明马兴荣宋波秦洁唐洲平赵国强张苏明华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科武汉430030 郑州大学第一附属医院神经内科郑州450052 郑州大学基础医学院微生物与免疫学教研室郑州450052

目的 :构建可在真核细胞中表达碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)的真核表达载体 ,为进一步开展bFGF基因治疗缺血性脑血管疾病奠定基础。方法 :①采用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血模型 ,取缺血灶... 详细信息

目的 :构建可在真核细胞中表达碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)的真核表达载体 ,为进一步开展bFGF基因治疗缺血性脑血管疾病奠定基础。方法 :①采用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血模型 ,取缺血灶周围脑组织经逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增bFGF基因 ;②将bFGFDNA克隆到pGEM TEasy质粒 ,经菌落PCR和HindⅢ和EcoRI双酶切鉴定 ;③然后将bFGFDNA亚克隆到pEGFP N3质粒 ;通过抗性基因筛选阳性克隆 ,经菌落PCR、酶切和测序鉴定。结果 :菌落PCR、酶切和DNA序列鉴定均证实插入片段与GenBank报道的bFGF基因序列一致。结论 :经RT

关键词：碱性成纤维细胞生长因子逆转录聚合酶链反应荧光真核表达载体

胶质细胞源性神经营养因子基因真核荧光表达载体的构建

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蚌埠医学院学报 2006年第2期31卷 119-121页

作者：陈传好赵莉单增强王小标蚌埠医学院人体解剖学教研室安徽蚌埠233030

目的:构建可在真核细胞中表达胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotroph ic growth factor,GDNF)的荧光表达载体。方法:采用聚合酶链反应(PCR)扩增GDNF基因,将GDNF DNA克隆到pEGFP-N1质粒,通过抗性基因筛选阳性克隆... 详细信息

目的:构建可在真核细胞中表达胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotroph ic growth factor,GDNF)的荧光表达载体。方法:采用聚合酶链反应(PCR)扩增GDNF基因,将GDNF DNA克隆到pEGFP-N1质粒,通过抗性基因筛选阳性克隆,经酶切和测序鉴定。结果:酶切和DNA序列鉴定均证实插入片段与Genebank报道的GDNF基因序列一致。结论:成功构建了GDNF荧光真核表达载体,为从分子水平开展GDNF转基因相关研究奠定了基础。

关键词：神经营养因子荧光真核表达载体

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皮肤科学基础

中国医学文摘（皮肤科学） 2003年第1期20卷 1-3页