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中国粮油学报 2024年第4期39卷 119-130页

作者：周柳莎胡香莲俞瑜媛徐海星施永清浙江工商大学食品与生物工程学院杭州310018

制备一种荞麦糖肽(buckwheat glycopeptide,BG)缓释脂质体,提高荞麦糖肽的生物利用度。本研究首先对制备所得的BG进行稳定性分析,随后利用反向蒸发法制备荞麦糖肽脂质体(buckwheat glycopeptide liposomes,BGL),经响应面实验对包埋工艺... 详细信息

制备一种荞麦糖肽(buckwheat glycopeptide,BG)缓释脂质体,提高荞麦糖肽的生物利用度。本研究首先对制备所得的BG进行稳定性分析,随后利用反向蒸发法制备荞麦糖肽脂质体(buckwheat glycopeptide liposomes,BGL),经响应面实验对包埋工艺进行优化,并探究其稳定性、体外缓释特性、α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase,AGase)抑制活性和抗氧化活性。结果表明:温度(20~80℃)对BG的活性影响较小,碱性条件下BG易失活。从5种磷脂中筛选出蛋黄卵磷脂制备BGL,响应面优化工艺条件为磷脂与胆固醇质量比为4.2∶1.0,脂药比为7.5∶1.0,水相体积为1 mL,此条件下,BGL包埋率为72.64%。BGL对高温(100℃)环境不耐受,在短时间(1 h)内具有广谱pH(2~10)稳定性,反复冻融5次对其渗漏率无显著影响(P>0.05)。BGL在体外模拟胃、肠体系中表现出良好的缓释特性,24 h累计释放速率分别为(84.50±2.30)%和(60.17±1.42)%。

关键词：荞麦糖肽脂质体稳定性体外缓释生物活性

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荞麦糖肽的制备、生物活性分析及其稳态化研究

荞麦糖肽的制备、生物活性分析及其稳态化研究

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作者：周柳莎浙江工商大学

学位级别：硕士

糖肽具有广泛生物活性的同时还能在分子生物学上发挥重要作用,然而,由于糖肽中寡糖和多肽结合复杂,人工合成具有较高的难度,且该物质普遍存在于动、植物体内,因此,从天然生物体内提取功能性糖肽成为重要途径。近年来,国内外学者对糖肽... 详细信息

糖肽具有广泛生物活性的同时还能在分子生物学上发挥重要作用,然而,由于糖肽中寡糖和多肽结合复杂,人工合成具有较高的难度,且该物质普遍存在于动、植物体内,因此,从天然生物体内提取功能性糖肽成为重要途径。近年来,国内外学者对糖肽的探究主要集中于糖肽的合成和富集,对天然糖肽的获取及功能活性研究相对匮乏,糖肽类物质的研究仍具有较大的发展空间和探索价值。荞麦中富含优质营养元素,且从荞麦中提取获得的多肽、多酚、多糖等具有抗氧化、抗炎、提高免疫能力的作用,但是对荞麦中糖肽的开发利用鲜有报道。基于上述背景,本研究首先利用了微生物发酵法和分离纯化技术,以α-葡萄糖苷酶（AGase）抑制作用为目标制备出具有降血糖活性的荞麦糖肽（BG）,并对BG进行结构表征和酶抑制动力学研究;随后,通过DPPH·、ABTS·、·OH清除能力和还原能力评价BG的化学抗氧化能力,并建立RAW264.7细胞氧化应激模型,探究BG的在细胞水平上的抗氧化作用;最后,为提高BG的生物利用率,对其进行稳态化研究,利用反向蒸发法制备荞麦糖肽脂质体（BGL）,经响应面试验对包埋工艺进行优化,并探究其稳定性、体外缓释特性和生物活性。主要结论如下:1.从6个菌株中筛选出植物乳杆菌和嗜热链球菌作为发酵菌株制备高AGase抑制活性的粗荞麦糖肽。经响应面优化确定最终发酵条件为:接种量2%,p H7.5,料液比1:14.8,发酵时间2.8 d,AGase抑制率为70.83%。2.利用Sephadex G-25分离粗荞麦糖肽发酵液得到三个主要分离峰I1、I2和I3,三种组分得率分别为38.24%、5.82%和14.96%,对AGase的IC50分别为14.71±0.33、1.72±0.02和8.54±0.37 mg/m L。I2进一步用RP-HPLC分离,制备得到纯度为94.17%的BG,其最终得率为1.27%,对AGase的IC50为0.62±0.04 mg/m L。3.由Tricine-SDS-PAGE电泳测定BG分子量为5.8 k Da。红外光谱分析BG具有酰胺Ⅰ带特征峰,其多肽二级结构为:β-折叠占70.51%、α-螺旋占18.95%,β-转角占10.54%。经β-消除反应分析BG中连接的糖肽键类型为O-糖肽键。通过氨基酸检测分析,BG中氨基酸含量占总质量的29.75%,疏水性氨基酸占总氨基酸含量的62.91%,其中Ile占比最高,为总氨基酸含量的24.68%。通过流变学特征分析,BG具有剪切变稀的特点,是非牛顿流体。DSC结果显示BG的热变性温度为106.38℃,熔融焓值为92.76 J/g,热稳定性较好。BG对AGase的抑制作用为非竞争性和反竞争性的混合型抑制作用。4.在所有分离组分中,BG的抗氧化能力最强,对DPPH·、ABTS·、·OH清除能力和还原力的VCEAC分别为12.12±0.27、153.82±5.04、901.95±39.30和109.23±1.18μg/mg。在RAW 264.7巨噬细胞氧化应激模型中,BG浓度达到200μg/m L时,与模型组相比,对所有抗氧化指标均产生显著性（P0.05）。24 h内BGL在模拟胃、肠道中的累计释放率分别为84.50±2.30%和60.17±1.42%,具有明显的胃肠道缓释性质。脂质体包埋体系的建立有利于提高BG的稳定性,并对其AGase抑制和抗氧化活性表现出良好的保护作用,为荞麦糖肽脂质体开发应用提供理论依据。

关键词：荞麦糖肽分离纯化结构表征生物活性脂质体

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