检索结果-南通市图书馆

油菜防卫素和草酸氧化酶基因的克隆与诱导表达水平研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国油料作物学报 2004年第3期26卷 43-49页

作者：刘胜毅 B.D.L.Fitt 刘仁虎 N.Evans 董彩华黄永菊中国农业科学院油料作物研究所农业部油料作物重点开放实验室湖北武汉430062 Plant Pathogen Interactions Division Rothamsted Research

基于拟南芥、甘蓝及油菜等的植物防卫素(PDF)相关基因序列和已克隆的油菜草酸氧化酶(OXO)基因序列设计PCR引物,对甘蓝型油菜基因组DNA进行扩增,获得了序列大小分别为470bp和629bp的PDF1.2和OXO。生物信息学分析表明,该PDF1.2和GenBank... 详细信息

基于拟南芥、甘蓝及油菜等的植物防卫素(PDF)相关基因序列和已克隆的油菜草酸氧化酶(OXO)基因序列设计PCR引物,对甘蓝型油菜基因组DNA进行扩增,获得了序列大小分别为470bp和629bp的PDF1.2和OXO。生物信息学分析表明,该PDF1.2和GenBank中的相关基因同源性在42%～71%,OXO和GenBank中的相关基因同源性在70%以上。在油菜苗期,油菜黑胫病病原接种后基因PDF1.2表达量增加3倍以上,基因OXO也有不同程度的增强表达;诱导剂acibenzolar-s-methyl诱导基因OXO增强表达,但不能诱导PDF1.2增强表达。诱导的系统表达(非处理叶)高于局部表达(处理叶)。这是首次报道油菜PDF1.2克隆和诱导表达结果。

关键词：油菜防卫素基因草酸氧化酶基因克隆真菌侵染基因表达水平

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

农杆菌介导草酸氧化酶基因转入油菜

江苏农业科学 2008年第6期36卷 73-75页

作者：何晓兰刘桂华吴敬音薛启汉倪万潮江苏省农业科学院农业生物技术研究所江苏南京210014

以甘蓝型油菜带柄子叶为转化受体材料,运用农杆菌介导法进行草酸氧化酶(oxalate oxidase,germin)基因的转化,卡那霉素抗性筛选和PCR测定结果表明,其中3株germin1、germin2及germin6呈阳性。T1代卡那霉素抗性筛选显示,germin1呈现3∶1典... 详细信息

以甘蓝型油菜带柄子叶为转化受体材料,运用农杆菌介导法进行草酸氧化酶(oxalate oxidase,germin)基因的转化,卡那霉素抗性筛选和PCR测定结果表明,其中3株germin1、germin2及germin6呈阳性。T1代卡那霉素抗性筛选显示,germin1呈现3∶1典型的孟德尔单基因显性遗传,且在T2代获得纯合株系。T1代盛花期茎秆菌核病活体接种结果证实,转基因植株后代菌核病抗性得到明显提高。证实germin基因已转入油菜植株中并得到有效表达。

关键词：甘蓝型油菜草酸氧化酶基因农杆菌介导法菌核病接种

节瓜遗传转化体系建立及草酸氧化酶基因OsOxO1的转化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

节瓜遗传转化体系建立及草酸氧化酶基因OsOxO1的转化

作者：李亚平山西农业大学

学位级别：硕士

节瓜（Benincasa hispida Cogn. var. chieh-qua How）的遗传背景较为狭窄,这一特点制约了其利用传统育种方法进行新品种选育和性状改良工作的快速发展,使得现有抵抗病害以及适应自然逆境的品种较少,不能满足日益苛刻的种植需求。如何... 详细信息

节瓜（Benincasa hispida Cogn. var. chieh-qua How）的遗传背景较为狭窄,这一特点制约了其利用传统育种方法进行新品种选育和性状改良工作的快速发展,使得现有抵抗病害以及适应自然逆境的品种较少,不能满足日益苛刻的种植需求。如何加快节瓜抗病品种选育的工作已经成为研究的重点,而植物转基因技术在育种上的应用为作物种质资源创新,选育抗性新品种提供了一个有效的基因操纵平台,探索适合节瓜的高效转基因途径成为重要的研究内容。本试验以节瓜优良自交系‘A39’为材料,OsOxO1基因为目的基因采用多种农杆菌介导的转化方法初步摸索了适合节瓜的高效遗传转化途径,主要结果如下： 1、利用节瓜的半种作为外植体探索其离体再生体系条件并进行优化,进行农杆菌介导的遗传转化试验。研究确定了试验中筛选抗生素卡那霉素的最佳浓度,抑菌抗生素头孢霉素的抑菌浓度分别为45mg/L.400mg/L;农杆菌介导的半种法转化法一共获得9株卡那霉素抗性植株,通过PCR鉴定其中5株为阳性植株,转化率为0.125%。 2、以节瓜优良自交系为材料,优化了原位转化体系。试验通过探究不同转化处理方法对节瓜转化受体生长发育的影响,建立了初步的转化操作体系。试验结果表明,划种法利用OD600为0.4的农杆菌浸泡节瓜种子转化效果以12h最佳,得到一株阳性植株,转化率为0.2%;生长点转化法同样利用OD600为0.4的农杆菌对幼苗顶端生长点进行不同方式的转化处理,其中注射法没有检测到转化植株,而浸染法检测到3株转化植株,转化率为0.69%。 3、采用草酸氧化酶活性检测、草酸耐受性检测以及PCR和Southern blot检测对目的基因在节瓜基因组中的整合方式进行初步分析,PCR和Southern blot结果表明阳性植株中部分有特异性目的条带的存在,且一般是以低拷贝形式存在,仅划种法得到的转化植株为单拷贝形式存在,酶活性检测及耐受性检测表明转化植株体内检测到草酸氧化酶活性且拥有了一定的草酸耐受性,这些结果初步说明OxO基因已成功转化并整合到节瓜基因组中。

关键词：节瓜转化体系草酸氧化酶基因农杆菌介导法

农杆菌介导法将草酸氧化酶基因导入烟草和双低油菜的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

农杆菌介导法将草酸氧化酶基因导入烟草和双低油菜的研究

作者：柯绍英四川农业大学

学位级别：硕士

油菜菌核病(Sclerotinia sclerotiorum)是一种世界范围的真菌性病害。在中国，油菜菌核病居油菜三大病害之首，严重影响了我国的油菜生产。近年来，随着基因工程技术的发展以及油菜转化体系的建立，许多学者通过基因工程的手段研究油菜... 详细信息

油菜菌核病(Sclerotinia sclerotiorum)是一种世界范围的真菌性病害。在中国，油菜菌核病居油菜三大病害之首，严重影响了我国的油菜生产。近年来，随着基因工程技术的发展以及油菜转化体系的建立，许多学者通过基因工程的手段研究油菜的抗病性。核盘菌能侵染400多种植物。根据它致病的关键因子去寻求控制策略是最根本的途径。由于它产生高度致病因子一草酸，因此引入编码草酸降解酶的基因来获得对分泌草酸病原真菌的抗性是一个极具前途的方法。为研究草酸氧化酶基因(Oxalate oxidase gene，OxO)对植物抗病的作用及获得抗菌核病油菜植株，本研究以烟草(Nicotiana tabacum)和双低甘蓝型油菜(Double-low Brassica napus)为试材，将来自于小麦的草酸氧化酶基因进行了农杆菌介导转化，主要工作及结果如下： 1．适宜农杆菌转化体系的建立以烟草常规品种和甘蓝型双低油菜品种为材料，选用烟草叶片，油菜子叶柄作为转化受体，建立了适宜的农杆菌转化体系。通过对各种影响因素的分析，最终确定烟草转化再生系统中最适培养基为： Ⅰ．分化培养基：MS+4 mg／L6-BA+0.2mg／LNAA，pH5.8 Ⅱ．筛选培养基：分化培养基+100mg／LKm(卡那霉素)+500 mg／LCb(羧苄青霉素)，pH 5.8 Ⅲ．生根培养基：1／2MS+2mg／LIBA+100mg／LKm+300mg／LCb(羧苄青霉素)，pH 5.8 油菜转化再生系统中最适培养基为 Ⅰ．预培养基：MS+1mg／L 2，4-D+0.2mg／L6-BA Ⅱ．分化培养基：MS+2.5mg／L6-BA+0.1mg／LNAA，pH 5.8 Ⅲ．筛选培养基：分化培养基+10-15 mg／LKm+500 mg／LCb+6 mg／LAgNO，pH 5.8 Ⅳ．生根培养基：1／2 MS+2 mg／L IBA+20 mg／LKm+300 mg／LCb，pH 5.8 2．卡那霉素抗性苗的获得首先用处于对数分裂中期OD为0.3～0.4左右时的带有草酸氧化酶基因的农杆菌菌液侵染材料，再通过与农杆菌的共培养，最后用卡那霉素筛选，得到烟草卡那霉素抗性苗11株，油菜卡那霉素抗性苗12株。 3．抗性苗的PCR检测利用特异引物对抗性苗进行PCR检测，11株烟草卡那霉素抗性苗中的9株，12株油菜卡那霉素抗性苗中的7株表现阳性，扩增出与阳性对照一致的470bp草酸氧化酶基因片段。 4．抗性测定对所获得的烟草和油菜转基因植株进行了离体叶片接种鉴定和用不同浓度草酸处理两种方法进行抗性鉴定，与对照植株相比转草酸氧化酶基因植株明显提高了对核盘菌的抗性和对草酸的耐受性。实验证实草酸氧化酶可提高植株对分泌草酸真菌的抗性。由于草酸处理与油菜受到菌核病菌侵染时的表现高度一致，所以草酸氧化酶基因的引入和表达可以明显提高油菜对菌核病的抗性。

关键词：菌核病烟草甘蓝型双低油菜草酸氧化酶基因农杆菌

葡萄糖氧化酶基因和草酸氧化酶基因在甘蓝型油菜中的表达研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

葡萄糖氧化酶基因和草酸氧化酶基因在甘蓝型油菜中的表达研究

作者：董祥柏中国农业科学院

学位级别：硕士

核盘菌[Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary]是一种广谱性病原真菌，能危害75科400多种植物。在我国，***在大豆、油菜、向日葵和十字花科蔬菜上引起严重的菌核病，造成巨大的经济损失。研究表明，草酸毒素在***致病过程中起关键作... 详细信息

核盘菌[Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary]是一种广谱性病原真菌，能危害75科400多种植物。在我国，***在大豆、油菜、向日葵和十字花科蔬菜上引起严重的菌核病，造成巨大的经济损失。研究表明，草酸毒素在***致病过程中起关键作用。遗憾的是，人们至今尚未发现对***免疫的或有效的天然抗源。葡萄糖氧化酶(glucose oxidase, GO)在有氧条件下催化β-D葡萄糖生成葡萄糖酸，并以O为电子受体结合质子形成HO。草酸氧化酶(oxalate oxidase, OXO)能够把毒素草酸降解为CO和HO。葡萄糖酸作为代谢的中间产物可通过糖醛酸途径或磷酸戊糖途径进一步被利用。CO是植物光合作用的原料，可被植物再固定。HO是活性氧类的一种，具有直接的抑菌活性，又可作为信号分子诱发植物的过敏反应、系统获得性抗性等防卫反应，增强植物的抗病性。因此，通过基因工程的手段，把GO基因和OXO基因导入寄主植物，来增强寄主植物广谱抗病性或提高寄主植物对***抗性，培育抗病品种或种质，在生产上具有重要的意义。本研究以来源于小麦的germin基因和来源于Aspergillus niger的GO基因为外源基因，以pBI121为基础，构建OXO单基因和GO／OXO双基因两个植物表达载体，并利用本课题组保存的GO基因植物表达载体，以子叶柄为外植体，采用农杆菌介导的遗传转化方法，对甘蓝型油菜进行转化;获得了转OXO基因和GO基因的单、双价转基因工程油菜，其中，转OXO基因油菜12株，转GO基因油菜9株，转GO／OXO双基因油菜6株。通过加代扩繁，目前已获得了T代转基因油菜株系。 PCR检测和Southern杂交证明，GO基因和OXO基因已整合到转基因油菜的基因组中。 ELISA检测表明，GO在转GO基因油菜中得以表达，A最低0.124，最高0.673，相差5倍以上，这表明GO基因在转基因油菜得到表达，但不同转基因株系之间表达水平可能有很大差异。对转OXO基因油菜进行了OXO酶活性(以OD表示)分析表明，非转基因油菜OD值在0.13以下，转OXO基因植株的酶活性在0.17以上，比非转基因油菜高30.7％，最大0.4512，是非转基因油菜的4.23倍。用超氧钛法测定了转GO基因油菜中HO含量。每克转GO基因油菜叶片HO含量大多在220μ M以上，比非转基因油菜高46.9％，最高含量为656μ M，是非转基因油菜HO含量4.37倍。采用离体叶接种法对转GO基因油菜T代G803株系进行菌核病抗性鉴定。方差分析表明，转基因油菜和非转基因油菜抗病性差异显著，在转GO基因油菜上菌丝侵染迟，扩展慢，对***的抗性明显提高。对转OXO基因油菜和转OXO／GO双价基因油菜菌核病抗性鉴定尚未完成。

关键词：草酸氧化酶基因葡萄糖氧化酶基因农杆菌介导的遗传转化甘蓝型油菜菌核病

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

大豆候选草酸氧化酶基因片段克隆与表达分析

中国农学通报 2013年第24期29卷 157-161页

作者：董志敏王丽刘佳厉志衣志刚王曙明吉林省农业科学院大豆研究所长春130124 吉林省农业科学院经济植物所吉林公主岭136105

为克隆大豆草酸氧化酶基因并初步鉴定其功能,根据双子叶植物的草酸氧化酶基因,设计简并引物,同源克隆大豆该基因片段,实时定量PCR分析基因表达情况。序列分析发现,基因片段大小504bp,无内含子,编码168个氨基酸;Blastx同源比对发现,与大... 详细信息

为克隆大豆草酸氧化酶基因并初步鉴定其功能,根据双子叶植物的草酸氧化酶基因,设计简并引物,同源克隆大豆该基因片段,实时定量PCR分析基因表达情况。序列分析发现,基因片段大小504bp,无内含子,编码168个氨基酸;Blastx同源比对发现,与大豆的germin基因和苜蓿、花生的草酸氧化酶基因高度同源;草酸诱导大豆耐病和感病种质叶片基因表达分析表明,基因的表达与草酸诱导有关,而且在耐菌核病种质与感菌核病种质间,表达量和表达时间差异明显。推断该基因片段可能是一具有草酸氧化酶活性的大豆germin基因片段。

关键词：大豆草酸氧化酶基因同源克隆表达分析

农杆菌介导草酸氧化酶（OXO）基因转化向日葵的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

农杆菌介导草酸氧化酶（OXO）基因转化向日葵的研究

作者：沙日娜内蒙古农业大学

学位级别：硕士

向日葵籽实含油量高,具有较高的经济价值,是我区重要的经济作物。但向日葵菌核病危害对向日葵生产威胁日益严重,至今未找到菌核病抗源。根据菌核病致病的关键因子—草酸,引入编码草酸降解酶的基因来获得对分泌草酸病原真菌的抗性是一个... 详细信息

向日葵籽实含油量高,具有较高的经济价值,是我区重要的经济作物。但向日葵菌核病危害对向日葵生产威胁日益严重,至今未找到菌核病抗源。根据菌核病致病的关键因子—草酸,引入编码草酸降解酶的基因来获得对分泌草酸病原真菌的抗性是一个极具前途的方法。本实验通过研究建立向日葵高效的遗传转化系统,将来自于小麦的草酸氧化酶(Oxalate Oxidase, OXO)基因通过农杆菌介导转化星火花葵,取得以下结果: 向日葵茎尖转化再生系统中适宜培养基为: I.分化培养基:MS + 0.5mg/L 6-BA + 0.25 mg/L IAA + 0.1mg/LGA,pH 5.8 II.共培养培养基:分化培养基+100μmol/LAS,pH 5.8 III.筛选培养基:分化培养基+ 50mg/L Kan + 500mg/L Cef,pH 5.8 Ⅳ.生根培养基:1/2 MS + 25mg/L Kan + 300mg/L Cef + 0.5mg/L NAA,pH 5.8 用OD600为0.3～0.4左右时的农杆菌侵染茎尖9 min～10min,进行农杆菌介导OXO的遗传转化。通过与农杆菌共培养3d后,经卡那霉素筛选,得到向日葵卡那霉素抗性苗14株,最后经PCR检测阳性为2株,转化率为0.4%。

关键词：向日葵再生系统农杆菌介导转化草酸氧化酶基因菌核病

油菜对菌核病抗(耐)病性鉴定与抗病育种研究进展

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

湖北农业科学 2003年第3期42卷 38-43页

作者：张志元官春云长沙大学应用化学与环境科学系湖南长沙410003 湖南农业大学油菜研究所湖南长沙410128

综述了 2 0多年来油菜抗菌核病的鉴定方法和抗病育种的新进展。主要包括油菜抗 (耐 )菌核病鉴定方法的分类和最近几年已克隆的植物抗病基因及转几丁质酶基因、β - 1,3葡聚糖酶基因、草酸氧化酶基因在油菜抗 (耐 )菌核病育种中的研究进展。

关键词：油菜菌核病抗病性抗病育种抗病基因几丁质酶基因 β—1,3葡聚糖酶基因草酸氧化酶基因

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

以器官和发育特异性抗病双基因转化油菜

分子植物育种 2003年第3期1卷 303-312页

作者：徐光硕饶勇强孟金陵华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室武汉430070

菌核病是我国油菜主产区的主要病害 ,系由核盘菌 (Sclerotiniasclerotiorum)的子囊孢子在晚春直接侵染开花植株衰老的叶片 ,或先侵染飘落在衰老叶片上的花瓣后再产生菌丝侵入叶片和植株本体。几丁质是核盘菌菌丝体细胞壁的主要组成成分 ... 详细信息

菌核病是我国油菜主产区的主要病害 ,系由核盘菌 (Sclerotiniasclerotiorum)的子囊孢子在晚春直接侵染开花植株衰老的叶片 ,或先侵染飘落在衰老叶片上的花瓣后再产生菌丝侵入叶片和植株本体。几丁质是核盘菌菌丝体细胞壁的主要组成成分 ,几丁质酶破坏真菌菌丝尖端新合成的几丁质而抑制病菌的生长。草酸是核盘菌侵染寄主植物后分泌的毒素 ,草酸氧化酶能够分解草酸 ,缓解核盘菌在油菜体内的毒性。我们将几丁质酶基因和草酸氧化酶基因与拟南芥衰老叶片启动子PSAG12 嵌合在一起构建成表达载体 ,使两外源抗病基因仅在转基因油菜的衰老叶片中表达 ,在发挥抗病作用的同时最大限度地节约了植物的能量消耗。本实验采用inplanta的转化方法 ,转化效率在 0 1%左右 ,每个转基因植株的插入位点为 1- 3个拷贝。对T1代转基因植株的RT PCR分析表明 ,两个外源抗病基因在衰老叶片中的表达强于幼嫩叶片。转基因植株叶片尤其是衰老叶片对核盘菌的抗性及对草酸毒素的耐性均得到了增强。从转基因植株上飘落的花瓣也表现出对核盘菌抗性的提高。抗病双基因在叶片和花瓣发育的特定时期表达不仅提高了油菜对核盘菌侵染的针对性 ,还可能减轻转基因植株的能源消耗和生理扰乱。对转基因植株后代的农艺学和生理学研究正在进行之中。

关键词：油菜菌核病核盘菌几丁质酶基因草酸氧化酶基因转基因植株抗病基因衰老叶片特异性启动子