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茶树内生草螺菌WT00C的基因组学研究

茶树内生草螺菌WT00C的基因组学研究

作者：程伟湖北大学

学位级别：硕士

草螺菌WT00C(Herbaspirillum sp.WT00C)是我们实验室从茶树中分离出的一种内生细菌。前期实验表明,它能产氨、合成生长素吲哚乙酸和嗜铁素,能够有效地经过伤口感染进入并定殖茶树体内。喷洒和浇灌都不能够感染植物且不能在水稻、小麦、... 详细信息

草螺菌WT00C(Herbaspirillum sp.WT00C)是我们实验室从茶树中分离出的一种内生细菌。前期实验表明,它能产氨、合成生长素吲哚乙酸和嗜铁素,能够有效地经过伤口感染进入并定殖茶树体内。喷洒和浇灌都不能够感染植物且不能在水稻、小麦、油菜和白菜等农作物中定殖。大田实验发现,浸泡扦插条或喷洒修剪的大田茶树,草螺菌WT00C能促进茶树扦插枝生根和发芽,促进大田茶树新生侧芽生长,嫩芽生物量增加达8 kg/亩。虽然草螺菌WT00C与两种固氮内生草螺菌(织片草螺菌Herbaspirillum seropedicae和红苍白草螺菌Herbaspirillum rubrisubalbican)一样具有植物促生作用,但草螺菌WT00C不能固氮且宿主也不同。为了弄清楚草螺菌WT00C的促生作用以及它的宿主特异性,本研究试图利用分子生物学和生物信息学方法,解析草螺菌WT00C基因组DNA序列并加以注释。草螺菌WT00C基因组的大小为6,079,821 bp,包含5537个基因,基因平均长度为955 bp。分析基因组注释结果及代谢情况发现,,草螺菌WT00C有四个末端氧化酶,有负责糖类转运的ABC糖转运系统和一个PTS转运系统,表明它具有代谢多种糖的潜力。草螺菌WT00C的糖代谢过程并不是传统的糖酵解,而是通过戊糖磷酸途径和ED途径。氨基酸代谢方面,草螺菌WT00C能合成和分解除L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-赖氨酸和L-组氨酸之外的多种氨基酸,L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-赖氨酸和L-组氨酸可能是通过转氨酶的转氨作用合成的。脂肪酸合成方面,草螺菌WT00C具有完整的合成多种脂肪酸的代谢途径,而且能够合成人体必需的α-亚麻酸。同时,它还能代谢部分含苯化合物,如3-氟苯、4-氟苯和4-氯酚和硫代甲酰胺等。虽然不能固氮,但草螺菌WT00C拥有多个途径产氨,也能将外源摄取的硝酸盐还原为氨。它还具有尿素循环途径合成尿素,与氨基酸代谢产氨一起为生物体提供氮源。草螺菌WT00C能合成嗜铁素,其合成嗜铁素的关键酶非核糖体肽合成酶的氨基酸序列与织片草螺菌的肽合成酶序列具有97%相似度,而且预测的嗜铁素分子结构也一致。草螺菌WT00C拥有一个与抗逆性和生长素作用调节相关的ACC脱氨酶基因。生化试验表明,草螺菌WT00C显示强的ACC脱氨酶活性(1.19μmoL mgh)。草螺菌WT00C的基因组中还含有编码谷胱甘肽、葡聚糖酶、过氧化物酶、海藻糖合成酶以及离子泵等相关的基因,同时还编码合成亚精胺、叶酸、维生素B12和B6的酶系,这些代谢产物可参与植物生理调节。草螺菌WT00C拥有多个蛋白分泌系统如T1SS、T3SS、T4SS、T4SSpili和T6SS,其中T4SS分泌系统仅在草螺菌WT00C中发现,其他已报道的草螺菌基因组中尚未发现编码T4SS的基因族。基因组测序和注释的结果为我们深入了解茶树内生草螺菌WT00C的促生作用机理以及后续在农业生产上的应用奠定了良好的基础。

关键词：草螺菌内生细菌茶树基因组

细菌ACC脱氨酶基因表达载体的构建及转化和草螺菌泛基因组学及ACC脱氨酶基因的分析

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细菌ACC脱氨酶基因表达载体的构建及转化和草螺菌泛基因组学及ACC...

作者：叶舒婷浙江大学

学位级别：硕士

1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)是植物合成乙烯的直接前体。ACC脱氨酶催化分解ACC生成α-酮丁酸和氨。有ACC脱氨酶的微生物能分解植物产生的ACC,降低植物在逆境下产生胁迫乙烯的水平,从而缓解植物在逆境下遭受的生长抑制,减轻病原菌导致的病... 详细信息

1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)是植物合成乙烯的直接前体。ACC脱氨酶催化分解ACC生成α-酮丁酸和氨。有ACC脱氨酶的微生物能分解植物产生的ACC,降低植物在逆境下产生胁迫乙烯的水平,从而缓解植物在逆境下遭受的生长抑制,减轻病原菌导致的病症。本研究克隆了7个细菌的ACC脱氨酶结构基因(acdS),构建了acdS的原核表达载体,对草螺菌属(Herbaspirillum)细菌的泛基因组和ACC脱氨酶基因进行了分析。本研究从ACC脱氨酶活性不同的伯克氏菌属(Burkholderia)、(?)单胞菌属(Pseudomonas)、草螺菌属和中慢生根瘤菌属(Mesorhizobium)细菌中克隆了acdS,构建了7个acdS表达载体pBBRacdS并转化农杆菌C58Cl。(?)得的农杆菌工程菌中,acdS来源于Burkholderia和Herbaspirillum的工程菌表现出ACC脱氨酶活性,且活性高低与相应来源菌株的活性有一定相关性;而acdS来源于Mesorhizobium和Pseudomonas的工程菌没有ACC脱氨酶活性,可能是农杆菌中不具备来源菌株中acdS的表达调控机制。本研究通过高通量测序获得了5个致病Herbaspirillum菌株Os34、Os38、Os44. Os45和Os49的基因组草图序列,与促植物生长菌株H. seropedicae SmRl的基因组相比有一定差异。用GGDC(Genome-to-Genome Distance Calculator)分析发现这5个Os菌株不属于H. seropedicae种。用PGAP (Pan-Genomes Analysis Pipeline)对5个Os菌株和Herbasp irilum属的SmR1、GW103、CF444、YR522、P6-12的基因组进行泛基因组学分析发现Herbaspirillum属菌株具有开放型的泛基因组;随着基因组数目的增加,核心基因数目趋于稳定。 ACC脱氨酶基因是Herbaspirillum属细菌的核心基因。对Hlerbaspirillum属菌株ACC脱氨酶氨基酸序列的系统发育分析显示5个Os菌株、SmRl、GW103和YR522菌株的ACC脱氨酶氨基酸序列的系统发育地位与它们的分类地位不符,与其他细菌ACC脱氨酶的亲缘关系很远;用Sigi-HMM和IVOM预测没有发现5个Os菌株和SmR1的ACC脱氨酶基因簇在基因组岛内,不支持它们的ACC脱氨酶基因是通过水平转移获得的,有可能是ACC脱氨酶同源蛋白的基因在进化中发生突变而导致编码特殊的ACC脱氨酶。本研究构建的组成型表达acdS的农杆菌工程菌可能通过降低植物产生乙烯的水平而减弱植物的防卫反应,增强侵染植物的能力,延缓外植体衰老,提高农杆菌介导的植物转化效率。acdS表达载体pBBRacdS还可以导入到其他植物促生细菌,用于帮助植物抗逆,也可以导入到根瘤菌中,提高根瘤菌的结瘤能力研究发现5个Herbaspirillum Os菌株的ACC脱氨酶表现出不同寻常的特性,值得进一步研究它们的结构和功能及表达调控机制。这些Herbaspirillum致病Os菌株可能属于一个新种,进一步的比较基因组学分析将找到它们和不致病菌株SmR1在基因组上的差异,在基因组水平揭示Os菌株致病和SmR1不致病的遗传机制。

关键词： ACC脱氢酶农杆菌草螺菌泛基因组基因水平转移

两株草螺菌（Herbaspirillum sp.P5-11和P5-19）对三种植物在煤矸石上生长的影响

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两株草螺菌（Herbaspirillum sp.P5-11和P5-19）对三种植物在煤矸...

作者：王宁安徽大学

学位级别：硕士

矿业开采过程中产生的煤矸石占用了大量的土地资源,其恶劣的理化性质还威胁了植物的生长、微生物的生存,由此导致了严重的环境问题。植物-微生物联合修复技术在减轻环境胁迫、增强植物抗性、改善矿区景观等方面发挥重要作用,在环境修复... 详细信息

矿业开采过程中产生的煤矸石占用了大量的土地资源,其恶劣的理化性质还威胁了植物的生长、微生物的生存,由此导致了严重的环境问题。植物-微生物联合修复技术在减轻环境胁迫、增强植物抗性、改善矿区景观等方面发挥重要作用,在环境修复中被广泛的研究与应用。本研究选用白茅(Imperata cylindrica)根际分离得到的2株菌作为植物根际促生菌,研究了2株菌的植物生长促生特性;选用纯土、煤矸石掺土10%、煤矸石掺土20%、煤矸石覆土5cm、煤矸石覆土10cm为植物生长基质,以香根草(Vetiveria zizanioides)、白羊草(Bothriochloa ischaemum)、马棘(Indigofera pseudotinctoria)3种植物为接菌对象,将2株菌接种于5种基质中的3种植物中,研究了2株菌接种2个月后对3种植物的生长促生能力和抗逆能力的影响,选择出了最适植物;研究了2株菌接种1年后对香根草的促生作用,对基质的改良作用和对香根草根际微生物的影响,选择出了最优的植物-微生物-基质组合联合修复矿区生态环境,研究结果如下:对铜尾矿中分离得到的2株菌进行16S r RNA基因序列鉴定和扫描电子显微镜观察,菌株P5-11和P5-19均为草螺菌(Herbaspirillum),菌体呈微曲杆状,大小均为(0.2-0.3)μm×(0.8-1.2)μm;对菌株的促生特性进行测定,2株菌均具有固氮、溶磷、产吲哚乙酸和产铁载体的特性,其中,P5-11和P5-19的固氮量最大分别为109.78±3.68mg/L和107.04±3.72mg/L。P5-19的溶磷量约为前者的1.4倍,但两株菌溶磷能力均较弱。P5-19的IAA合成量约为P5-11的2倍,P5-11和P5-19产铁载体最大分别为7.65±0.26μM和8.60±0.47μM。将2株草螺菌接种于5种植物生长基质上的3种植物根部,测定植物的生长状况和抗逆能力,结果表明,除马棘不适于在煤矸石上生存外,香根草和白羊草均可在煤矸石基质上生存生长;短期种植条件下,接种P5-19对植物的作用效果更好;2株草螺菌对香根草的生长促生作用更好,对香根草抗逆生理的影响也更显著,对香根草体内重金属浓度的影响相对较弱,但香根草对重金属的耐受力与白羊草相比较好。故香根草与草螺菌结合更适于煤矸石矿区生态修复。香根草接种种植1年后,由于早期草螺菌的接种改善了植物根际微生物区系,草螺菌对香根草体内的氮、磷、抗氧化酶活性仍具有积极作用。基质的改良方式影响香根草对重金属的富集,在煤矸石掺土基质中香根草地上部重金属富集,在煤矸石覆土基质中,地上部和地下部重金属浓度达到平衡。基于香根草的生长状况和基质的改良状况,在掺土10%基质上的香根草与P5-11结合和在掺土20%基质上的香根草与P5-19结合较适于煤矸石矿区的生态修复。对种植1年的香根草根际和根表的细菌进行高通量测序,结果表明,在煤矸石掺土处理中香根草根部细菌多样性和菌群丰度较高,特有物种较多。在煤矸石基质上,改良方式和接菌处理共同影响着香根草根部细菌群落的组成,其中2株草螺菌对掺土基质中香根草根际的菌属组成影响较大,对掺土10%基质中香根草根表的群落结构影响最大。综上所述,在煤矸石掺土10%改良基质中的香根草根部接种P5-11为煤矸石生态修复中最优组合。研究初步证明2株草螺菌可以为促生菌肥的研制提供优良菌种,本文为草螺菌-绿肥牧草联合修复煤矸石矿区生态提供了参考价值,而对于将其应用到大范围的野外煤矸石山修复中还需找到合适的菌株载体以维持菌株活性并保证菌株与植物高效共生。

关键词：草螺菌促生特性煤矸石生态修复根际微生物

茶树内生草螺菌WT00C的硒酸盐还原和茶叶硒富集的研究

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茶树内生草螺菌WT00C的硒酸盐还原和茶叶硒富集的研究

作者：徐萧湖北大学

学位级别：硕士

茶树内生草螺菌WTOOC(Herbaspirillum sp.WT00C)是本实验室从野生茶树中分离获得一株茶树特异性内生革兰氏阴性细菌。它的微生物学性质、生理生化性质、分类鉴定以及茶树促生作用都进行过较深入的研究,其基因组也已解序。基因组分析发... 详细信息

茶树内生草螺菌WTOOC(Herbaspirillum sp.WT00C)是本实验室从野生茶树中分离获得一株茶树特异性内生革兰氏阴性细菌。它的微生物学性质、生理生化性质、分类鉴定以及茶树促生作用都进行过较深入的研究,其基因组也已解序。基因组分析发现该内生菌拥有完整的硒代谢途径。为了证实茶树内生草螺菌WT00C的硒酸盐还原能力和探索是否可利用该细菌促进茶叶富硒,本项目就草螺菌WT00C的硒酸盐还原、硒还原的最佳条件、还原硒产物的性质以及改善茶树硒富集等方面展开研究。经过三年的努力,获得如下主要结论:1.茶树内生草螺菌WT00C具有较强的硒酸盐耐受性。当草螺菌WT00C在含硒酸钠的LB培养基中培养时,细菌生长表现抑制现象且抑制作用随着硒酸盐浓度的升高而增强。当培养基中的硒酸盐浓度达到200 mM时,12小时培养期间内细菌生长受到严重抑制,但12小时后细菌细胞恢复生长并且在48小时时接近不含硒酸盐对照组的细菌生长水平。活菌检测发现12小时培养期间内的细菌仍然存活,表现出较强的硒酸盐耐受性。通过条件优化发现,在温度为37℃和转速为200rpm条件下,草螺菌WT00C还原硒酸钠最佳。2.茶树内生草螺菌WT00C能有效地将硒酸盐还原生成红色的元素硒。当草螺菌WT00C与硒酸盐共培养,它能有效地将硒酸盐还原生成红色的元素硒,并将固体平板上的细菌菌落或液体培养基变成红色。透射电子显微镜(TEM)和扫描电子显微镜(SEM)揭示细菌代谢产生了硒纳米颗粒(SeNPs)。分布在细胞表面的硒纳米颗粒虽然大小不一(草螺菌WT00C确实将硒酸盐(Se6+)还原成元素硒(Se0)。通过蔗糖密度梯度离心,分离纯化出高纯度的红色纳米球。生化分析表明,除了元素硒外硒纳米球还含有细菌的蛋白质,但没有还原糖和脂类物质。在相同条件下分别将细菌细胞质和细胞壁组分与硒酸盐共培养,发现细菌细胞质组分比细胞壁组分硒酸盐还原活性高。这些实验结果提示,硒酸盐还原反应主要发生在草螺菌WT00C的细胞质内,形成的细小硒纳米颗粒穿过细胞壁分泌至胞外。硒纳米颗粒聚集形成硒纳米球后,经过彼此融合形成较大的纳米球,最后在特定条件下结晶形成硒纳米花。3.茶树内生草螺菌WT00C能有效促进茶叶硒富集。由于内生细菌具有较强的硒酸盐还原能力,我们推测它可能促进茶叶的硒富集。为了验证这一假设,我们采用注射和浸泡扦插苗两种方式将细菌接种到茶苗中。将苗移栽至含有0-3.5 mg/kg的硒酸盐土壤后,在自然条件下生长并在不同时间内采样检测硒含量。结果发现该内生细菌显著增强茶叶的硒富集。在注射接种中,三个实验组随着培养时间的增加,根、茎和叶中硒含量都有所增加,表明茶树本身能够富集一定量的硒。不过,实验组茶树和对照组根和茎中硒的分布并没有明显的差异,但是与各自对照组相比三个实验组在不同时间段采集的茶叶中则显示显着的硒富集。例如在0.622、1.5和3.5 mg/kg的硒酸盐土壤中培养的茶树,注射接种150日后三个实验组茶叶中硒含量分别为1.182、11.224和36.236 mg/kg,而三个对照组茶叶中硒含量分别为0.454、4.060和15.154 mg/kg。与注射接种法相同,以浸泡方式接种的茶树150日后三个实验组茶叶中硒含量分别为4.586、18.394和38.704 mg/kg,而三个对照组茶叶中硒含量则分别为1.967、7.110和15.228 mg/kg。每个实验组硒含量都是相应对照组的2倍。统计学分析表明实验组与对照组之间的P值草螺菌WT00C确实具有较强的硒酸盐还原能力而且发现了它能有效地促进茶叶硒富集。同时,首次发现硒纳米球通过融合方式逐渐增大体积。此外,利用浸泡扦插杆接种细菌生产寄宿内生草螺菌WT00C的茶苗技术相对简便易行,适合茶场大面积使用。利用茶树内生草螺菌WT00C促进茶叶硒富集的研究不仅为茶农生产富硒茶叶提供了新的策略而且提供了技术支撑。

关键词：硒还原草螺菌硒纳米颗粒茶树硒富集

高浓度硒酸盐对茶树内生草螺菌WT00C的生长和硒化合物代谢的影响

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高浓度硒酸盐对茶树内生草螺菌WT00C的生长和硒化合物代谢的影响

作者：陈昌梅湖北大学

学位级别：硕士

茶树内生草螺菌WT00C(Herbaspirillum sp.WT00C)是本实验室从景观茶树中分离得到的一种具有促生作用和硒代谢功能的革兰氏阴性细菌。实验室已对该茶树内生草螺菌的生理生化特性、微生物学性质、分类地位、基因组学以及感染定殖等方面进... 详细信息

茶树内生草螺菌WT00C(Herbaspirillum sp.WT00C)是本实验室从景观茶树中分离得到的一种具有促生作用和硒代谢功能的革兰氏阴性细菌。实验室已对该茶树内生草螺菌的生理生化特性、微生物学性质、分类地位、基因组学以及感染定殖等方面进行了深入的研究。前期研究发现,茶树内生草螺菌WT00C能在高浓度硒酸盐(50-500 m M)中生长并能有效地将硒酸盐还原成元素硒(Se),但是其机理尚不清楚。为了探究高浓度硒酸盐对茶树内生草螺菌WT00C的生长和硒化合物代谢的影响,本课题利用了微生物学、蛋白组学、半定量RT-PCR等方法对其进行了研究。经过研究,取得如下成果:1.茶树内生草螺菌WT00C在含有200 m M硒酸钠的LB培养基中培养结果显示:该菌在经过一个12小时的生长抑制期后开始恢复生长并在培养30小时后达到稳定期。将在200 m M硒酸钠的LB培养基中培养28小时的茶树内生草螺菌细胞再次接入含有200 m M硒酸盐的培养基中培养,其生长抑制期缩短至6小时;而将相同的细胞接种至不含硒酸盐的培养基中培养,生长曲线与原始细菌相同。2.利用扫描电镜对细菌形态进行观察后发现,在含有200m M硒酸钠的LB培养基中培养的茶树内生草螺菌WT00C细胞逐渐变成粗棒状,其直径变为原始细菌的2倍。将这种粗棒状的茶树内生草螺菌WT00C转接至普通LB培养基中培养多代(4个24小时重复)后,扫描电镜观测显示其形态与原始细菌相比无明显差异。由此可知,高浓度硒酸盐不仅会影响茶树内生草螺菌WT00C的生理代谢过程而且会影响细菌细胞的形态结构,但这种影响应该是一种生理反应而非遗传变异。3.通过分析不同培养时期培养基内硒酸盐和亚硒酸盐含量发现,在高浓度硒酸盐中培养茶树内生草螺菌WT00C的过程中,20小时内培养基中的硒酸盐和亚硒酸盐浓度并未显著降低至MIC值。这说明茶树内生草螺菌WT00C恢复生长不是由硒酸盐浓度显著降低造成,而是细菌自身建立起一套有效的抗氧化机制导致的。4.蛋白质组学分析发现:(1)在茶树内生草螺菌WT00C生长抑制期,高浓度硒酸盐会引起细胞内形成较高的氧化压力,高氧化压力使得细菌与DNA复制与修复、糖代谢、脂代谢等生命活动相关的蛋白表达量下调,最终导致细菌无法进行正常的生命活动,进而表现为一段较长的生长抑制期;(2)在高氧化压力的环境下,细菌细胞并未死亡,而是在12小时后恢复生长。造成这一现象的原因可能是茶树内生草螺菌WT00C通过增加NADPH等还原剂的量减缓了生长环境中的氧化压力。(3)在细菌生长恢复期,一些表达下调的蛋白逐渐恢复至正常水平(如DNA多聚酶III和RNA解旋酶),同时生产NADPH/NADH的酶、硫氧还蛋白还原酶(Trx R)以及谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)表达持续上调以保持细菌的抗氧化作用;(4)由于培养基中高浓度的硒酸钠仍造成较大的氧化压力,使得细菌细胞壁、细胞外膜和细胞离子通道结构不完整,从而引发细菌变形;(5)当粗棒状的细胞被转接至含有200 m M硒酸钠的培养基中培养后,其生长抑制期缩短至6小时,造成这一现象的原因可能是经过前一次高氧化压剌激后NADPH/NADH浓度增高,这使得细菌抗氧化作用更强。且由于脂质A-双糖合酶[EC:2.***.1.182]的持续上调使得细胞壁结构获得部分修复。5.半定量RT-PCR检测硒酸盐对与硒化合物代谢途经相关的39个基因转录的影响,结果显示与谷胱甘肽(GSH)代谢途经相关的5个基因中gs、gsr、gcs下调,gpx、gst上调,而两个与硒蛋白合成相关的基因sel A和trx B显著上调。这一结果提示随着硒酸盐浓度的提高,细菌细胞中谷胱甘肽的合成效率会降低,但硒蛋白合成的速度则会加快。6.茶树内生草螺菌WT00C在含不同浓度硒酸盐的培养基中培养后检测细菌蛋白的硒含量。结果显示在0—50 m M硒酸钠条件下,细菌蛋白中的硒含量呈非线性增加。这个结果不仅验证了茶树内生草螺菌WT00C的确能依据硒蛋白合成途径有效地合成硒蛋白而且证明了硒酸盐的确会增强细菌硒蛋白的合成。通过本课题的研究,发现高浓度硒酸盐不仅影响茶树内生草螺菌WT00C的生理生化代谢过程而且影响细菌形态结构。在由高浓度硒酸盐引起的高氧化压条件下,茶树内生草螺菌WT00C通过自身的抗氧化机制恢复生长,同时利用硒酸盐合成硒蛋白或将其还原形成元素硒(Se)。研究验证了茶树内生草螺菌WT00C硒蛋白合成途径的真实存在以及真实拥有合成硒蛋白的能力。这些实验结果为后续利用茶树内生草螺菌WT00C生产元素硒(Se)和硒蛋白、开发硒蛋白产品提供了理论依据和技术支持。

关键词：草螺菌硒酸盐细菌生长抑制细菌形态硒化合物代谢蛋白质组学

草螺菌Herbaspirillum sp. WT00F的生理生化性质和促生作用研究

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湖北大学学报（自然科学版） 2017年第3期39卷 291-298,304页

作者：刘伟林占桂婷王婷程伟尤恒李珂徐萧丁坤明饶辉福张君岱程长松李亚东李洋吴文华王行国湖北大学生命科学学院湖北武汉430062 湖北咸宁市农业科学院湖北咸宁437100

草螺菌(Herbaspirillum)WT00F是本实验室分离获得的一株茶树内生细菌.使用微生物学方法,测试了草螺菌WT00F对22种糖醇类、21种有机酸类和13种氨基酸的碳源利用、8种常见抗生素的敏感性、温度、pH、盐浓度的影响以及33种酶的活性.草螺菌W... 详细信息

草螺菌(Herbaspirillum)WT00F是本实验室分离获得的一株茶树内生细菌.使用微生物学方法,测试了草螺菌WT00F对22种糖醇类、21种有机酸类和13种氨基酸的碳源利用、8种常见抗生素的敏感性、温度、pH、盐浓度的影响以及33种酶的活性.草螺菌WT00F能利用其中16种糖醇类、17种有机酸类和5种氨基酸作碳源,并能利用14种糖醇类物质产酸.在NaCl浓度≤1%或pH 5.0 8.0的条件下,细菌生长良好,适宜的生长温度为34 37℃.在测试的33种酶中,草螺菌WT00F显示11种酶的活性.草螺菌WT00F对8种常见抗生素敏感,仅对≤5μg/mL浓度的壮观霉素表现抗性.同时,对草螺菌WT00F的促生作用进行了研究.虽然它没有固氮酶活性,但草螺菌WT00F浸泡茶树扦插杆可剌激扦插杆生根和扦插苗新芽生长;喷洒修剪茶树枝后,明显促进修剪枝侧芽生长.无论浸泡还是喷洒,接种过草螺菌WT00F的茶树都生长旺盛,未出现任何植物病症.草螺菌WT00F不仅可用于茶树的扦插繁殖而且可应用于茶园茶树的栽培生产以减少肥料使用和提高茶叶产量,不失为一种有潜力的绿色植物促生剂.

关键词：草螺菌生理生化特性茶树无性繁殖生物促生剂

茶树草螺菌WT00C-Se发酵制备红色纳米单质硒

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湖北大学学报（自然科学版） 2020年第2期42卷 150-157页

作者：田金宝雷佳周佳卉倪雪晨陈昌梅王行国湖北大学生命科学学院湖北武汉430062

茶树草螺菌是从野外茶树中分离的一种革兰氏阴性内生细菌.茶树内生草螺菌WT00C在含200 mmol/L硒酸钠的LB培养基内37℃培养28 h后,收获、保存细菌并重新命名为茶树草螺菌WT00C-Se.将茶树草螺菌WT00C-Se重新接种至含200 mmol/L硒酸钠的LB... 详细信息

茶树草螺菌是从野外茶树中分离的一种革兰氏阴性内生细菌.茶树内生草螺菌WT00C在含200 mmol/L硒酸钠的LB培养基内37℃培养28 h后,收获、保存细菌并重新命名为茶树草螺菌WT00C-Se.将茶树草螺菌WT00C-Se重新接种至含200 mmol/L硒酸钠的LB培养基中培养,其生长抑制期和生长期缩短6 h,仅为原来茶树内生草螺菌WT00C菌株的一半.摇瓶培养和电镜观察都表明茶树草螺菌WT00C-Se仍拥有还原硒酸盐、生成红色纳米单质硒(Se 0)的能力.根据茶树草螺菌WT00C-Se的特性,进行红色纳米单质硒产率条件优化后发现:首先用含75 mmol/L硒酸钠的培养基活化茶树草螺菌WT00C-Se,然后按1∶100比例接种200 mmol/L硒酸钠LB培养基,并在37℃、200 r/min、pH 7.0条件下培养,红色纳米单质硒产率较高且耗时短.依照优化条件,使用发酵罐发酵30 h,每升培养物可制备出560 mg纯净的红色单质硒.该研究结果不仅为利用微生物生产红色单质硒提供了一种全新的思路,而且为今后产业化提供了强有力的技术支撑.

关键词：草螺菌红色纳米单质硒硒酸盐还原

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质谱仪鉴定血流感染草螺菌1例及文献复习

东南国防医药 2017年第2期19卷 193-195页

作者：贾明利杨婧赵斌辽宁省盘锦市中心医院检验科盘锦124010 沈阳军区总医院感染控制科沈阳110840 南京军区南京总医院医务部南京210002

目的报道1例社区感染草螺菌误鉴定及相关文献复习内容,为临床解决同类问题提供指导。方法采用常规细菌鉴定仪器VITEK 2鉴定卡及药敏试验卡、质谱分析仪对1例社区感染患者分离菌株进行鉴定,并对已报道该菌株感染相关病例文献进行复习总... 详细信息

目的报道1例社区感染草螺菌误鉴定及相关文献复习内容,为临床解决同类问题提供指导。方法采用常规细菌鉴定仪器VITEK 2鉴定卡及药敏试验卡、质谱分析仪对1例社区感染患者分离菌株进行鉴定,并对已报道该菌株感染相关病例文献进行复习总结。结果细菌鉴定仪器VITEK 2鉴定该菌株结果为洋葱伯克霍尔德菌,质谱仪鉴定为草螺菌属;复习文献结果发现,多篇文献报道临床上草螺菌常常被误鉴定为洋葱伯克霍尔德菌,该菌可以造成医院内感染,也可造成社区感染,主要感染对象为免疫功能受损的肿瘤患者、肺纤维囊性病患者及部分老年患者。结论草螺菌中的某些菌种是重要的机会致病菌,可引起免疫力低下或老年人医院内感染和社区感染。尽快改进临床常用细菌鉴系统或者推广质谱仪在微生物鉴定上的应用是准确诊断草螺菌感染的有效途径。

关键词：血流感染草螺菌质谱仪

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急性淋巴细胞白血病患者血液中草螺菌的鉴定

现代检验医学杂志 2010年第4期25卷 52-54页

作者：翟文琴虞健人俞小丽吴朝阳陈建国镇江市丹徒区人民医院江苏镇江212028 江苏大学附属人民医院江苏镇江212002

目的分离鉴定源于急性淋巴细胞白血病（ALL）患者血液中的未知细菌.方法采用常规及VITEK32微生物GNI鉴定卡鉴定细菌,K-B法进行药敏试验,PCR法扩增细菌的16S rRNA基因,通过测序并与GenBank中相关序列进行比对.结果常规生化反应和微生... 详细信息

目的分离鉴定源于急性淋巴细胞白血病（ALL）患者血液中的未知细菌.方法采用常规及VITEK32微生物GNI鉴定卡鉴定细菌,K-B法进行药敏试验,PCR法扩增细菌的16S rRNA基因,通过测序并与GenBank中相关序列进行比对.结果常规生化反应和微生物自动化鉴定系统不能鉴定.16S rRNA PCR扩增产物经测序与GenBank中序列比对,发现与草螺菌属有99%同源性.结论来源于ALL患者血液中的未知细菌是草螺菌.

关键词：急性淋巴细胞白血病草螺菌 16S rRNA