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高速逆流色谱法分离制备茯苓皮中茯苓酸a和茯苓酸B

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食品科学 2020年第16期41卷 179-184页

作者：殷梦舟刘莹张莉佳王益黄文华中农业大学食品科学技术学院湖北武汉430070

以茯苓皮为原料,采用高速逆流色谱法分离制备茯苓酸a和茯苓酸B。利用正丁醇-水两相溶剂提取茯苓皮总三萜,正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(3∶6∶4∶2,V/V)为两相溶剂系统,在主机正转、转速800 r/min、分离流速3 mL/min条件下进行高速逆流色谱... 详细信息

以茯苓皮为原料,采用高速逆流色谱法分离制备茯苓酸a和茯苓酸B。利用正丁醇-水两相溶剂提取茯苓皮总三萜,正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(3∶6∶4∶2,V/V)为两相溶剂系统,在主机正转、转速800 r/min、分离流速3 mL/min条件下进行高速逆流色谱分离纯化,得到4个峰。通过高效液相色谱对收集的4个峰分别进行纯度检测,将纯度较高的峰III和峰IV进行质谱和核磁共振结构鉴定,峰III为茯苓酸B,峰IV为茯苓酸a,其纯度分别为90%、92%。研究结果提供了一种从茯苓皮中分离制备茯苓酸a和茯苓酸B的有效方法,该法分离效率高,操作简单,对茯苓皮在食品和医药领域的应用具有重要意义。

关键词：茯苓皮高速逆流色谱茯苓酸a 茯苓酸B

RP-HPLC法测定中药茯苓皮中茯苓酸a和3-表去氢土莫酸的含量

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药学进展 2009年第6期33卷 271-273页

作者：夏烨杨春华刘静涵濮社班中国药科大学生药学教研室江苏南京210038 中国药科大学分析测试中心江苏南京210009 中国药科大学教育部药物质量与安全预警重点实验室江苏南京210009 中国药科大学天然药物化学教研室江苏南京210009

目的:建立一种可用于评价茯苓皮药材质量的含量测定方法。方法:采用Dikma Dimonsal C18色谱柱(250mm×4·6mm,5μm),以0·1%甲酸水溶液和乙腈为流动相,流速:1·0mL·min-1,检测波长:243nm,柱温:25℃,用梯度洗脱法同时测定茯苓皮药材中... 详细信息

目的:建立一种可用于评价茯苓皮药材质量的含量测定方法。方法:采用Dikma Dimonsal C18色谱柱(250mm×4·6mm,5μm),以0·1%甲酸水溶液和乙腈为流动相,流速:1·0mL·min-1,检测波长:243nm,柱温:25℃,用梯度洗脱法同时测定茯苓皮药材中茯苓酸a和3-表去氢土莫酸的含量。结果:测得茯苓酸a和3-表去氢土莫酸的线性范围分别为0·073～0·292g·L-1(r=0·9997)和0·027～0·135g·L-1(r=0·9999);加样回收率分别为102·63%和98·88%。结论:该法能快速、准确地测定茯苓皮中两个活性成分的含量,为茯苓皮的质量控制提供了一个较好的检测方法。

关键词：茯苓皮茯苓酸a 3-表去氢土莫酸反相高效液相色谱

高速逆流色谱快速分离茯苓皮中的高纯度茯苓酸a

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大连医科大学学报 2009年第2期31卷 227-230页

作者：王艳汤新强大连医科大学附属第一医院药剂科辽宁大连116011

[目的]建立利用高速逆流色谱法高效、快速分离茯苓皮中茯苓酸a的新方法。[方法]茯苓皮的乙醇提取物经大孔吸附树脂柱初分后,直接进行高速逆流色谱分离,所用两相溶剂体系为正己烷-乙酸乙酯-正丁醇-水(1∶1∶1.2∶0.8,v/v),流速1.5 mL/min... 详细信息

[目的]建立利用高速逆流色谱法高效、快速分离茯苓皮中茯苓酸a的新方法。[方法]茯苓皮的乙醇提取物经大孔吸附树脂柱初分后,直接进行高速逆流色谱分离,所用两相溶剂体系为正己烷-乙酸乙酯-正丁醇-水(1∶1∶1.2∶0.8,v/v),流速1.5 mL/min,转速800 r/min,检测波长254 nm,所得产物的纯度经HPLC检测,结构经红外光谱(IR),紫外光谱(UV),质谱(MS)和核磁共振谱(NMR)鉴定。[结果]从200 mg茯苓皮粗提物中可得到76 mg纯度高于98%的茯苓酸a,分离时间短于5 h。[结论]该方法简便、快速,适合于茯苓皮中高纯度茯苓酸a的分离制备。

关键词： HSCCC 茯苓皮茯苓酸a HPLC

液相色谱-质谱联用法测定茯苓酸a在大鼠体内的药物代谢动力学

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液相色谱-质谱联用法测定茯苓酸A在大鼠体内的药物代谢动力学

基于微生物组和代谢组学研究茯苓改善慢性肾脏病及其作用机制

第九届全国药物和化学异物代谢学术会议

作者：尹连红许丽娜刘月涛彭金咏大连医科大学药学院药物分析教研室

目的:建立一种高效、专一的大鼠血浆中茯苓酸a的液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)定量分析方法,对不同剂量茯苓酸a在大鼠灌胃及静脉注射给药后进行药代动力学研究。方法:大鼠分别静脉注射茯苓酸a 2.5,5和10 mg/kg,灌胃25,50和100 mg/kg进行... 详细信息

目的:建立一种高效、专一的大鼠血浆中茯苓酸a的液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)定量分析方法,对不同剂量茯苓酸a在大鼠灌胃及静脉注射给药后进行药代动力学研究。方法:大鼠分别静脉注射茯苓酸a 2.5,5和10 mg/kg,灌胃25,50和100 mg/kg进行药代动力学研究。采用甲醇沉淀蛋白进行大鼠血浆样品的预处理,以甘草次酸为内标,分别测定不同时间点茯苓酸a在大鼠体内的血药浓度。色谱柱为DIONEXAcclaim 120 C120 A(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-水(90:10,v/v),流速为0.8 mL/min。采用电喷雾离子化(ESI)方式,多反应监测模式,检测离子为负离子,分别以m/z 497.3→m/z 423.3和m/z 469.1→m/z 228.9对茯苓酸a和内标进行检测。结果:血浆中的内源性物质对茯苓酸a及内标的测定无干扰,茯苓酸a最低检测限为5ng/mL,在5～2000 ng/mL范围内线性关系良好(r=0.9947)。方法的准确度范围为92.5%～108.3%,批内和批间精密度均小于12%,样品的提取回收率大于76.2%。结论:建立了大鼠血浆中茯苓酸a的含量测定方法,本法快速、准确、专属性强,适用于茯苓酸a在大鼠体内的药物动力学研究。

关键词：茯苓酸a 液相色谱-质谱联用药代动力学

来源： cnki会议评论

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基于微生物组和代谢组学研究茯苓改善慢性肾脏病及其作用机制

作者：杨长娥西北大学

学位级别：硕士

慢性肾脏病(Chronic kidney disease,CKD)是对人类健康造成巨大威胁的慢性疾病之一,已成为人们十分关注的公共卫生问题。中药茯苓(Poria cocos)具有利水渗湿、健脾宁心等功效,现在临床上广泛用于治疗CKD。研究表明,肠道菌群失调加重肾损... 详细信息

慢性肾脏病(Chronic kidney disease,CKD)是对人类健康造成巨大威胁的慢性疾病之一,已成为人们十分关注的公共卫生问题。中药茯苓(Poria cocos)具有利水渗湿、健脾宁心等功效,现在临床上广泛用于治疗CKD。研究表明,肠道菌群失调加重肾损伤,肠道菌群作为肠源性尿毒素的主要来源在CKD的发展过程中发挥着重要的作用,肠道菌群产生的代谢产物通过破坏肠道上皮屏障进入血液循环,产生局部或全身炎症。因此,本研究探讨茯苓对肠道菌群失调和代谢产物紊乱干预作用。目的:基于16S r RNA基因测序和非靶向代谢组学技术,鉴定5/6肾切除(5/6Nephrectomy,NX)诱导CKD大鼠模型中存在显著差异的肠道菌群和血清代谢产物,探讨CKD大鼠肠道菌群与血清代谢产物之间的关系。研究茯苓乙醇提取物(Ethanol extract of poria cocos,PC)及其主要成分茯苓酸a(Poricoic acid A,PAA)对鉴定的菌群相关代谢产物、肠道上皮屏障、炎症与氧化应激等影响,本研究为揭示茯苓抗肾纤维化提供理论参考和科学依据,为茯苓临床治疗CKD提供科学参考。方法:1.CKD大鼠中肠道菌群结构和组成的改变。采用NX诱导的CKD大鼠模型,收集各组大鼠24小时尿液、血液和结肠内容物,测定各组大鼠的血压、尿蛋白和血清肌酐等生理生化指标。对结肠内容物样本进行16S r RNA测序得到肠道微生物组的数据。基于多样性分析、物种组成分析、相关性分析等分析方法研究CKD大鼠肠道菌群的改变。通过PICRUSt代谢功能预测分析研究CKD大鼠改变的肠道菌群潜在的功能影响。2.CKD大鼠中微生物组学和血清代谢组学关联性分析。基于超高效液相色谱-高清质谱联用(UPLC-HDMS)技术,鉴定CKD大鼠血清中的差异代谢产物。通过相关性分析探讨与肠道菌群失调相关的差异代谢产物与收缩压(Systolic blood pressure,SBP)和肌酐清除率(Creatinine clearance,CCr)之间的关系,并锁定相关代谢通路。3.PAA和PC干预对CKD大鼠的改善作用。使用PAA和PC对CKD大鼠进行干预。通过靶向代谢组学技术对相关代谢通路的代谢产物进行分析,研究PAA和PC对相关代谢通路的代谢产物紊乱的影响。采用Western blot对各组大鼠结肠组织中ZO1、Occludin等紧密连接蛋白的表达,和肾脏组织中调节促炎症的IκBα/NF-κB信号通路和抗炎的Keap1/Nrf2信号通路相关蛋白的表达进行检测。通过组织病理学分析(PAS、Masson’s trichrome和免疫组织化学染色),探究PAA和PC对各组大鼠肾脏损伤和α-SMA、Vimentin和Collagen I促纤维化因子在肾脏组织中表达的影响。结果:1.NX导致大鼠结肠内菌群改变。与假手术组相比,NX大鼠中Allobaculum、Blautia、Pseudomonas和Clostridium＿IV等13个属水平菌存在显著差异。基于Cytoscape软件分析表明这13个属水平菌与SBP、CCr、血清肌酐等生理生化指标的改变存在显著的相关性,且改变的肠道菌群与氨基酸代谢、核苷酸代谢、脂质代谢等33个代谢途径相关。2.NX导致大鼠血清代谢产物水平发生改变。通过UPLC-HDMS技术,鉴定出甘氨酸、精胺、亚精胺等291个差异代谢产物。这些代谢产物主要参与脂肪酸代谢、氨基酸代谢、多聚胺代谢、嘌呤代谢等。3.NX大鼠肠道菌群失调与血清代谢产物紊乱存在相关性。甘氨酸、精胺、亚精胺等36个代谢产物与Allobaculum、Blautia、Pseudomonas和Clostridium＿IV等13个属水平的差异菌显著相关。16个代谢产物与SBP显著相关,其中甘氨酸、马尿酸、苯丙氨酸等10个代谢产物与甘氨酸代谢相关。15个代谢产物与CCr显著相关,其中腐胺、精胺、亚精胺等7个代谢产物为多聚胺代谢产物。基于SBP、CCr和血清肌酐等9个生理生化指标、13个属水平菌、7个甘氨酸代谢产物和6个多聚胺代谢产物的相关性网络分析表明,NX大鼠中甘氨酸代谢和肠道菌群失调与SBP存在一定的相关性;多聚胺代谢和肠道菌群失调与CCr存在一定的相关性。4.PAA和PC对NX大鼠中失调菌群相关的代谢产物紊乱具有改善作用。PAA和PC干预改善NX大鼠血清中甘氨酸代谢和多聚胺代谢异常、减轻肠道屏障的破坏,调节促炎症的IκBα/NF-κB信号通路和抗炎的Keap1/Nrf2信号通路而抑制炎症与氧化应激。组织病理学分析表明,PAA和PC干预对NX诱导的肾间质炎性细胞浸润、肾小管萎缩/扩张和促纤维化因子的上调具有显著的抑制作用。且相较于PC,PAA具有更强的抗肾间质纤维化效应。结论:本研究表明NX导致大鼠结肠中菌群失调和血清中甘氨酸和多聚胺代谢产物紊乱,且失调的肠道菌群与甘氨酸和多聚胺代谢产物相关。PAA和PC

关键词：慢性肾脏病茯苓茯苓酸a 肠道菌群代谢组学高血压肌酐清除率氧化应激与炎症