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黄曲霉寡聚-1，6-葡萄糖苷酶基因的克隆及其在工业酿酒酵母CICC1346中的表达

食品与发酵工业 2016年第8期42卷 44-50页

作者：康小龙吕晓静黄清媚熊春江林蒋海肖文娟刘泽寰暨南大学生命科学技术学院生命与健康工程研究院分子生物研究中心广东广州510632

通过重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension,SOE-PCR)扩增黄曲霉寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因和酿酒酵母α-信号肽序列,定向重组到整合型表达载体pδRCMB中,并在CICC1346中实现分泌表达;然后通过同源建模、利用分子模拟软件Discov... 详细信息

通过重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension,SOE-PCR)扩增黄曲霉寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因和酿酒酵母α-信号肽序列,定向重组到整合型表达载体pδRCMB中,并在CICC1346中实现分泌表达;然后通过同源建模、利用分子模拟软件Discovery Studio 4.1分析其蛋白结构,以对硝基苯-α-D-葡萄糖吡喃苷(pNPG)为底物,建立并确定酶活反应条件,并进行纯化、酶学性质分析;将密码子优化后序列在CICC1346中实现分泌表达,利用淀粉进行共发酵实验。结果显示:重组酶突变后相对野生型蛋白结构无影响。SDS-PAGE分析重组重组酶大小约为70 kDa;优化后最高酶活达到0.69 U/m L,重组酶最适pH为6.5,在pH4.5.0~7.0维持90%以上的酶活;最适温度为40℃,在30~40℃维持接近100%的酶活;受Cu^(2+)和Mn^(2+)严格抑制;寡聚-1,6-葡萄糖苷酶与α-淀粉酶及糖化酶协同利用淀粉产乙醇,提高淀粉水解效率。这是首次报道黄曲霉的寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因在酿酒酵母整合型分泌表达。

关键词：酿酒酵母黄曲霉重叠延伸PCR(splicing by overlap extension,SOE—PCR) 同源建模寡聚-1,6-葡萄糖苷酶淀粉

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血清α-L-岩藻糖苷酶在肝细胞癌诊断中的意义

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癌症 1992年第2期11卷 100-103页

作者：张世民吴孟超陈汉崔贞福屠振兴第二军医大学肝胆外科研究所上海200433

用微量分光光度法对正常人、肝细胞癌(HCC)、良性肝病和其它疾病患者血清α—L-岩藻糖苷酶(SAFU)的活性进行了测定。结果表明,HCC患者SAFU活性(765.10±289.00nmol/ml·h) 明显高于正常人(409.33±83.95nmol/ml·h),67.80％的HCC患者SAF... 详细信息

用微量分光光度法对正常人、肝细胞癌(HCC)、良性肝病和其它疾病患者血清α—L-岩藻糖苷酶(SAFU)的活性进行了测定。结果表明,HCC患者SAFU活性(765.10±289.00nmol/ml·h) 明显高于正常人(409.33±83.95nmol/ml·h),67.80％的HCC患者SAFU活性高于正常值上限,而且与血清甲胎蛋白(AFP)无关。虽然相当一部分肝炎和肝硬化患者SAFU也增高,但这些病人往往伴有明显的肝功能异常。提示:SAFU活性可作为HCC的又一诊断指标。

关键词：细胞癌岩藻糖苷酶血清肝肿瘤

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