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SCAR标记对水稻苯达松敏感致死基因的辅助选育

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中国水稻科学 2003年第2期17卷 113-117页

作者：向太和杨剑波杨前进朱启升李莉黄大年浙江大学生命科学学院浙江杭州310012 安徽省农业科学院水稻研究所农业部水稻遗传育种重点开放实验室安徽合肥230031 安徽省农业科学院绿色食品工程研究所安徽合肥230031 中国水稻研究所浙江杭州310006

利用与苯达松敏感致死基因 (ben )紧密连锁的 SCAR标记 ,对田间以农林 8号 m为 ben基因供体转育的后代进行了 PCR检测。利用该标记不仅能鉴别出转育的材料是否含有 ben基因 ,而且能区别它是含 ben基因的纯合体还是杂合体 ,从而有效地指... 详细信息

利用与苯达松敏感致死基因 (ben )紧密连锁的 SCAR标记 ,对田间以农林 8号 m为 ben基因供体转育的后代进行了 PCR检测。利用该标记不仅能鉴别出转育的材料是否含有 ben基因 ,而且能区别它是含 ben基因的纯合体还是杂合体 ,从而有效地指导田间选育。

关键词：水稻苯达松敏感致死基因分子标记辅助选育育种

水稻苯达松敏感致死基因的SCAR标记及其辅助育种

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水稻苯达松敏感致死基因的SCAR标记及其辅助育种

作者：彭凌南昌大学

学位级别：硕士

籼稻(Oryza sative L.)品种8077S是一种具有隐性苯达松敏感致死基因(bel)的水稻两用不育系,其自交种苗能被除草剂苯达松杀死。将这种隐性单基因转育其它水稻光温敏雄性不育系应用于两系杂交稻制作,可以通过直接喷雾一定浓度的苯达松溶... 详细信息

籼稻(Oryza sative L.)品种8077S是一种具有隐性苯达松敏感致死基因(bel)的水稻两用不育系,其自交种苗能被除草剂苯达松杀死。将这种隐性单基因转育其它水稻光温敏雄性不育系应用于两系杂交稻制作,可以通过直接喷雾一定浓度的苯达松溶液简便有效地杀死两系杂交稻秧苗中可能混入的母本自交苗,从而避免两系杂交稻因水稻光温敏雄性不育系的育性波动所造成的风险。隐性苯达松敏感致死基因在常规育种中表现低频率,而且要经过轮流进行多代的回交和自交,才能选育出含bel基因的新品种。利用分子标记辅助育种,在短世代内能显著减少连锁累赘,从而提高育种效率。因此,本研究致力寻找与bel基因紧密连锁的分子标记,并以此分子标记辅助育种。具体结果如下: 1.用五种方法提取了水稻基因组DNA,并进行了RAPD-PCR分析,结果表明这五种方法提出的DNA质量都能获得稳定而理想的PCR扩增效果。 2.通过预备试验,优化了水稻RAPD反应组份和反应程序,建立了适于水稻RAPD反应条件。采用随机引物S20、S316对8077S×丰35的F代进行了RAPD分析,得到两个标记片段S20-420和S316-600。 3.将RAPD扩增产生的多态性片段进行克隆、测序,根据测序结果合成了两对特异性的SCAR引物,新合成的SCAR引物包含原有的RAPD引物序列。SC01引物在敏感单株中扩增出一条423bp带,抗感单株没有扩增产物;SC02引物在敏感单株中扩增出一条606bp带,抗感单株(纯合)扩增出一条约630bp带,抗感单株(杂合)扩增出这两条带。与RAPD标记相比,SCAR标记扩增出的条带清晰可辨,结果更可靠。 4.以8077S为母本分别与3个水稻品种明恢63、丰35、R318-5杂交,并以相应的水稻品种为轮回亲本进行回交,从F代开始用获得的引物SC02选择有bel基因的单株,并继续回交。结果证明用SCAR标记进行标记辅助选择更简便、快捷,可大大缩短恢复系的育种年限,加快育种进程。 5.利用水稻单粒干种子作材料,进行了DNA提取方法研究,并利用引物SC01对杂交种子纯度进行了的初步鉴定。

关键词：水稻苯达松敏感致死基因 RAPD标记 SCAR标记标记辅助选择

水稻苯达松敏感致死基因的RAPD标记的克隆及测序

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韶关学院学报 2005年第12期26卷 78-81页

作者：彭凌朱必凤刘主刘盈盈韶关学院英东生物工程学院广东韶关512005 南昌大学生命科学学院江西南昌330047

用3S Spin DNA Agarose Gel Purification Kit试剂盒将与水稻苯达松敏感致死基因相连锁的RAPD遗传标记S20-420和S316-600回收纯化,连接于pGEM-T载体并克隆测序,得到了S20-420和S316-600的全序列,其长度分别为423 bp6、06 bp.将两端序列... 详细信息

用3S Spin DNA Agarose Gel Purification Kit试剂盒将与水稻苯达松敏感致死基因相连锁的RAPD遗传标记S20-420和S316-600回收纯化,连接于pGEM-T载体并克隆测序,得到了S20-420和S316-600的全序列,其长度分别为423 bp6、06 bp.将两端序列设计特异PCR扩增引物可用于检测水稻苯达松敏感致死基因和标记辅助育种.

关键词：水稻苯达松敏感致死基因 RAPD 克隆测序

对除草剂敏感致死水稻bel基因的RAPD和SCAR分子标记

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作物学报 2006年第4期32卷 618-624页

作者：朱必凤朱友林吴成钢廖朝晖黎书伟刘主彭凌郭克婷刘安玲韶关大学英东生物工程学院南昌大学生命科学学院江西南昌330047 中国科学院微生物研究所北京100080 韶关市农业科学研究所广东韶关512005

以8077s与抗感的籼稻品种丰35亲本及杂交后自交所得的F2群体为材料,采用群分法(Bulked SegregantAnalysis,BSA),从210个10mer随机引物,找到2个水稻苯达松敏感池和抗感池之间表现多态性的特异引物———S20和S316,分别产生的标记片段为S2... 详细信息

以8077s与抗感的籼稻品种丰35亲本及杂交后自交所得的F2群体为材料,采用群分法(Bulked SegregantAnalysis,BSA),从210个10mer随机引物,找到2个水稻苯达松敏感池和抗感池之间表现多态性的特异引物———S20和S316,分别产生的标记片段为S20-440和S316-590。它们与bel基因的连锁距离分别为12.13 cM和7.97 cM。对RAPD扩增标记的片段进行克隆、测序,根据测序结果合成两对特异性的SCAR引物,包含原有的RAPD序列。SC01引物在敏感单株中扩增出1条423 bp带;SC02引物在敏感单株中扩增出1条606 bp带,它们的SCAR标记与bel基因的连锁距离为10.66 cM和7.04 cM。应用SCAR标记对水稻恢复系进行了辅助选育。

关键词：水稻苯达松敏感致死基因 RAPD标记群分法

花粉离体培养基的优化和苯达松除草剂对敏感型水稻恢复系‘Mc526’花粉活力的影响

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植物生理学通讯 2007年第6期43卷 1072-1076页

作者：王云生谢震陆徐忠宋丰顺李莉杨剑波安徽农业大学生命科学学院安徽省农业科学院水稻研究所合肥230031

建立了适合水稻花粉离体萌发的液体培养基配方,并用花粉萌发和碘.碘化钾(I_2-KI)染色测定法检测了喷施苯达松后含敏感致死基因的水稻恢复系‘Mc526’的花粉生活力。结果表明,苯达松处理前期(施后1～4d),‘Mc526’花粉活力与未作处理的接... 详细信息

建立了适合水稻花粉离体萌发的液体培养基配方,并用花粉萌发和碘.碘化钾(I_2-KI)染色测定法检测了喷施苯达松后含敏感致死基因的水稻恢复系‘Mc526’的花粉生活力。结果表明,苯达松处理前期(施后1～4d),‘Mc526’花粉活力与未作处理的接近;处理后期(施后5～8d)略低于未作处理的,但差异不显著。苯达松对母本结实率影响不显著。

关键词：水稻恢复系苯达松敏感致死基因花粉活力液体培养基

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杂交水稻机械化制种技术研究及组合选育进展

安徽农业科学 2011年第9期39卷 5055-5056,5059页

作者：汪婉琳朱启升王士梅杨前进张德文安徽省农业科学院水稻研究所安徽合肥230031

[目的]介绍一种新的杂交水稻机械化制种技术——利用苯达松敏感致死基因培育能进行机械化制种的杂交组合技术。[方法]系统阐述对敏感恢复系苯达松致死剂量筛选、父母本种子重量的比例及已育成的组合应用等几个方面。[结果]利用苯达松敏... 详细信息

[目的]介绍一种新的杂交水稻机械化制种技术——利用苯达松敏感致死基因培育能进行机械化制种的杂交组合技术。[方法]系统阐述对敏感恢复系苯达松致死剂量筛选、父母本种子重量的比例及已育成的组合应用等几个方面。[结果]利用苯达松敏感致死基因进行机械化制种的方法在可操作性、节约成本、制种产量、组合优势等方面均有优势。[结论]利用苯达松敏感致死基因培育可进行机械化制种的杂交组合是机械化制种新的研究方向。

关键词：杂交水稻机械化制种技术苯达松敏感致死基因

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水稻农林8号、农林8号m cDNA文库的构建和BSL基因的筛选

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水稻农林8号、农林8号m cDNA文库的构建和BSL基因的筛选

作者：王永杰安徽农业大学

学位级别：硕士

水稻农林8号m是农林8号通过CO γ射线辐射诱变获得的一个突变体。遗传分析表明：该突变性状表现为隐性单基因的遗传，在苗期能被0.05％以上的苯达松全部杀死，而其它常规品种则表现为对苯达松的抗性。而且，苯达松敏感致死基因对水稻的... 详细信息

水稻农林8号m是农林8号通过CO γ射线辐射诱变获得的一个突变体。遗传分析表明：该突变性状表现为隐性单基因的遗传，在苗期能被0.05％以上的苯达松全部杀死，而其它常规品种则表现为对苯达松的抗性。而且，苯达松敏感致死基因对水稻的农艺性状和杂交优势没有不良的影响。将苯达松敏感致死基因转化到不育系或恢复系中，可以用于保证和提高水稻杂种纯度，革新水稻的制种方法。将约5万粒农林8号m干种子，平均分成12等分，分别用γ射线(0，200，225，250，275，300Gy六个剂量)和离子注入(0，2000，2300，2600，2900，3200六个单位剂量，每个单位剂量约2.6×10N／cm)进行诱变处理，处理后的农林8号m发苗至苗二叶期，用0.05％苯达松水培筛选抗性苗，未能获得使农林8号m突变基因功能恢复抗性苗，推测该突变可能不是点突变导致的。农林8号和农林8号m种子萌发15天左右至苗二叶期。以稻苗为材料，抽提总RNAs，分离mRNAs。分别构建农林8号和农林8号m cDNA文库。初级文库的库容量分别为1.2×10，1.4×10。随机挑取28个噬菌斑，用T、T作引物，通过PCR检测，获得插入片断大小从400bp～3kb，平均约1kb。通过x-gal／IPTG蓝白斑鉴定，连接效率99％以上。上述所有皆符合cDNA文库建的总体要求。参照农林8号和农林8号m RAPD分子标记的结果，设计特异引物，通过PCR获得制备探针的DNA模板。用地高辛标记模板制作探针与农林8号cDNA文库中约30万个克隆子进行Southern原位杂交。获得了一些有杂交信号的噬菌斑，并对目的片断进行克隆和序列分析。

关键词：农林8号和农林8号m 苯达松苯达松敏感致死基因回复突变 cDNA文库构建核酸杂交