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苦地丁的抗炎药效物质基础组分及作用机制研究

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中国中药杂志 2020年第11期45卷 2586-2594页

作者：李木子张浩崔国倩项艳朱粉霞南京中医药大学附属中西医结合医院江苏南京210028 江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药口服释药系统重点研究室江苏南京210028

苦地丁常用于治疗多种炎症,为确定其抗炎药效物质基础,该文利用自动纯化系统对苦地丁提取物进行分离制备,制备了黄酮组分和生物碱组分,并对所制备的组分进行了质谱鉴定;进一步检测组分对LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型的影响。首先,用LPS... 详细信息

苦地丁常用于治疗多种炎症,为确定其抗炎药效物质基础,该文利用自动纯化系统对苦地丁提取物进行分离制备,制备了黄酮组分和生物碱组分,并对所制备的组分进行了质谱鉴定;进一步检测组分对LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型的影响。首先,用LPS处理小鼠巨噬细胞(RAW264.7),观察其细胞存活率与LPS浓度的关系;然后检测不同给药浓度的黄酮组分和生物碱组分对细胞存活率的影响,确定最大给药浓度。其次,分别加入质量浓度为2.5,5,10,20μg·mL^-1生物碱组分和黄酮组分,观察不同浓度生物碱组分和黄酮组分对LPS导致的RAW264.7小鼠巨噬细胞炎症的影响及其作用机制。Griess试剂法检测细胞上清液NO含量;ELISA法检测细胞上清液炎症因子(TNF-α,IL-1β,IL-6)的表达;Western blot法检测细胞内核因子κB(NF-κB)IκBα磷酸化(p-IκBα)、p65磷酸化(p-p65)以及TLR4和TLR2的蛋白表达。结果显示,生物碱组分在2.5~20μg·mL^-1呈剂量依赖地对NO,TNF-α,IL-1β,IL-6有显著抑制作用。在炎症上游通路,生物碱组分对TLR4表达水平的抑制作用强于TLR2,在炎症下游NF-κB通路,2.5~20μg·mL-1生物碱组分呈剂量依赖方式显著抑制IκBα及p65磷酸化。由此可知,生物碱组分是苦地丁抗炎药效组分,其抗炎作用机制可能为,通过抑制炎症信号在以TLR4为主的TLRs/NF-κB信号通路的传导,干扰炎性基因的激活抑制其过量表达,下调炎性因子的分泌水平达到炎症抑制作用。

关键词：苦地丁炎症生物碱黄酮 RAW264.7细胞

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苦地丁化学成分与药理作用的研究进展

中药材 2022年第7期45卷 1780-1786页

作者：高畅马永越倪斌郭春钰魏桂林赣南医学院第一附属医院药学部河南农业大学文法学院

苦地丁Corydalis bungeana Turcz.是一味传统蒙药，其化学成分主要包括生物碱类、黄酮类、氨基酸类等。现代药理学实验证明苦地丁具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等作用。临床上苦地丁常用于感冒、上呼吸道感染、支气管炎、扁桃体炎、肾炎等... 详细信息

苦地丁Corydalis bungeana Turcz.是一味传统蒙药，其化学成分主要包括生物碱类、黄酮类、氨基酸类等。现代药理学实验证明苦地丁具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等作用。临床上苦地丁常用于感冒、上呼吸道感染、支气管炎、扁桃体炎、肾炎等的治疗，被多版中国药典收载。近年来，苦地丁中的化学成分不断被发现，药理作用研究也逐渐深入。该文对苦地丁化学成分与药理作用研究进展进行综述，为进一步研究开发其药用价值提供依据。

关键词：苦地丁化学成分药理作用研究进展

基于肠道菌群和代谢组学探讨苦地丁减肥降脂作用机制

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中国中药杂志 2022年第11期47卷 3049-3058页

作者：付明海于红珍包特日格乐巴根那内蒙古民族大学国家药监局中药(蒙药)质量控制重点实验室内蒙古民族大学蒙医药学院

通过肠道菌群和代谢组学分析探讨苦地丁Corydalis bungeana(CB)对肥胖大鼠的减肥降脂作用机制。高脂高糖(high-fat high-sugar diet, HFHS)饮食喂养大鼠10周建立肥胖模型，60只大鼠随机分为正常组、模型组、CB低剂量组(0.18 g·kg)、CB... 详细信息

通过肠道菌群和代谢组学分析探讨苦地丁Corydalis bungeana(CB)对肥胖大鼠的减肥降脂作用机制。高脂高糖(high-fat high-sugar diet, HFHS)饮食喂养大鼠10周建立肥胖模型，60只大鼠随机分为正常组、模型组、CB低剂量组(0.18 g·kg)、CB中剂量组(0.9 g·kg)、CB高剂量组(1.8 g·kg)和奥利司他组(0.03 g·kg)。每周观察记录大鼠体质量和食物摄入量；连续给药6周后处死大鼠取胃肠组织检测胃排空和小肠推进。ELISA法检测血清指标，取肝脏和肾周脂肪进行HE染色。收集大鼠粪便和血清进行16S rDNA测序和代谢组学检测，Spearman法分析差异菌群与差异代谢物之间相关性。结果显示，与肥胖模型鼠比较，CB组显著降低大鼠体质量、食物摄入量以及血清中的胆囊收缩素(CCK)、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)水平，显著延缓胃排空，减少肝脏和肾周脂肪体积。模型组中Lachnospiraceae、Sutterellaceae显著下降，高剂量CB干预后有效上调了该菌落丰度；Prevotellaceae在HFHS诱导下显著上升，CB干预后可以明显下调其丰度。此外，glutaric acid、glyceric acid、hippuric acid、malic acid、glyceric acid、oxoglutaric acid、fumaric acid/succinic acid、oxoglutaric acid/isocitric acid、D-glucuronic acid、cholic acid为各组间主要差异代谢物，并与差异菌Sutterellaceae和Prevotellaceae呈高度相关性，参与调控三羧酸循环和葡萄糖、氨基酸、脂质代谢过程。该研究证明CB能有效改善体质量和血脂水平，减少脂肪体积，良性调控肠道菌群结构和血清代谢产物，达到减肥和降脂作用。

关键词：苦地丁肥胖肠道菌群代谢组学

苦地丁中紫堇灵和乙酰紫堇灵在急性肺损伤大鼠体内的药代动力学研究

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南京中医药大学学报 2020年第6期36卷 863-868页

作者：陈燕穆雪梅蔡慧敏邵华郑啸东南大学附属中大医院江苏南京210009 南京中医药大学药学院江苏南京210023 中国药科大学药学院江苏南京210009

目的研究苦地丁中主要活性成分紫堇灵和乙酰紫堇灵在急性肺损伤大鼠体内的药代动力学研究。方法建立同时测定大鼠血浆中紫堇灵和乙酰紫堇灵的LC-MS/MS分析方法,血浆样品采用乙腈沉淀蛋白,在C18色谱柱下进行梯度洗脱。离子源为电喷雾离子... 详细信息

目的研究苦地丁中主要活性成分紫堇灵和乙酰紫堇灵在急性肺损伤大鼠体内的药代动力学研究。方法建立同时测定大鼠血浆中紫堇灵和乙酰紫堇灵的LC-MS/MS分析方法,血浆样品采用乙腈沉淀蛋白,在C18色谱柱下进行梯度洗脱。离子源为电喷雾离子源,采用多反应离子检测。同时对其专属性、线性及范围、准确度、精密度、稳定性、基质效应进行考察。采用滴鼻LPS诱导急性肺损伤大鼠模型,灌胃428 mg/kg苦地丁提取物后,测定大鼠血浆中紫堇灵和乙酰紫堇灵的血药浓度,采用DAS3.0计算其药代动力参数。结果紫堇灵和乙酰紫堇灵在0.25~100.0 ng/mL和0.40~160.0 ng/mL之间有较好的线性(R2>0.995);同时批间及批内精密度和准确度、基质效应、回收率以及不同条件下的稳定性均符合要求。与正常组相比,急性肺损伤大鼠体内的紫堇灵暴露水平显著增加(AUC,P苦地丁提取物中紫堇灵和乙酰紫堇灵体内药代动力学研究,同时紫堇灵在急性肺损伤大鼠体内暴露水平显著增加,清除显著减弱。

关键词：苦地丁 LC-MS/MS 药代动力学急性肺损伤

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苦地丁的化学成分研究

华西药学杂志 2019年第3期34卷 218-224页

作者：李木子张浩朱粉霞南京中医药大学附属中西医结合医院江苏南京210028 江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药口服释药系统重点研究室江苏南京210028

目的研究苦地丁乙醇提取物中的化学成分。方法利用萃取和硅胶柱层析分离和纯化苦地丁乙醇提取物,对分离得到的化合物进行理化性质表征和波谱结构鉴定。结果从苦地丁乙醇提取物中分离得到7个化合物,分别鉴定为:二氢血根碱(Ⅰ)、乙酰紫堇... 详细信息

目的研究苦地丁乙醇提取物中的化学成分。方法利用萃取和硅胶柱层析分离和纯化苦地丁乙醇提取物,对分离得到的化合物进行理化性质表征和波谱结构鉴定。结果从苦地丁乙醇提取物中分离得到7个化合物,分别鉴定为:二氢血根碱(Ⅰ)、乙酰紫堇灵(Ⅱ)、血根碱(Ⅲ)、紫堇灵(Ⅳ)、原阿片碱(Ⅴ)、延胡索乙素(Ⅵ)、1,2,3,4,4α,9β-hexahydro-5-(4-methoxy-1,4-dioxobutyl)-2,2,8-trimethyl.

关键词：苦地丁化学成分分离鉴定生物碱指纹图谱二氢血根碱乙酰紫堇灵血根碱紫堇灵原阿片碱延胡索乙素

基于RNA-seq和网络药理学的苦地丁及其活性成分抗LPS诱导的炎性肺损伤机制研究

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基于RNA-seq和网络药理学的苦地丁及其活性成分抗LPS诱导的炎性肺...

作者：项艳南京中医药大学

学位级别：硕士

苦地丁（Corydalis bungeana Turcz.）系罂粟科草本植物地丁草的干燥带根全草,性寒,味苦,具有消炎散结,清热解毒等功效。临床上主要被用于治疗呼吸道感染。目前,有关苦地丁的药效作用机制和物质基础筛选方法研究仍相对薄弱。本研究采用... 详细信息

苦地丁（Corydalis bungeana Turcz.）系罂粟科草本植物地丁草的干燥带根全草,性寒,味苦,具有消炎散结,清热解毒等功效。临床上主要被用于治疗呼吸道感染。目前,有关苦地丁的药效作用机制和物质基础筛选方法研究仍相对薄弱。本研究采用LPS诱导的小鼠炎性肺损伤炎症模型,阐述其作用机制及药效物质基础,符合临床用药规律。借助RNA-seq、HPLC-QTOF-MS技术、网络药理学结合分子对接技术,揭示苦地丁及其活性成分抗炎性肺损伤作用机制及其药效物质基础,为临床用药提供实验依据。研究内容和主要结论如下:1、以LPS诱导的小鼠炎性肺损伤为实验模型,采用ELISA法测定小鼠血清和肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-18的分泌水平;进而考察了小鼠肺组织HE染色和MPO表达水平,结果表明苦地丁对LPS导致的炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-18表达水平升高具有显著地回调作用,对小鼠炎性肺损伤具有一定的保护作用。2、为深入探讨苦地丁抗LPS诱导小鼠炎性肺损伤的作用机制,本部分采用RNA-seq技术,并借助KEGG、GO和GSEA富集分析技术处理转录本。结果表明苦地丁主要通过激活 NOD-like receptor signaling pathway、TNF signaling pathway、Toll-like receptor signaling pathway发挥抗LPS诱导小鼠炎性肺损伤的作用,我们进一步采用RT-qPCR检测各组肺组织中显著性变化基因的mRNA表达水平。结果显示,总体趋势与RNA-seq一致。3、为探讨苦地丁抗LPS诱导炎性肺损伤的活性成分,本研究以入血成分构建网络药理学模型初步筛选活性成分。借助HPLC-QTOF-MS技术,鉴定了 LPS诱导的小鼠炎性肺损伤模型中苦地丁的入血成分,发现18个原型成分入血。为筛选抗炎活性成分,以18个入血成分为研究对象,构建网络药理学。结果显示,抗炎活性排名靠前的五个是:乙酰紫堇灵、N-反式-阿魏酰酪胺、地丁紫堇碱、紫堇灵、紫堇块茎碱;且苦地丁抗炎靶点与肺组织具有较强的器官相关性,此结果与本研究所选择的模型相吻合。4、为进一步揭示苦地丁抗LPS诱导炎性肺损伤的活性成分,在网络药理学筛选的基础上,我们以分子对接筛选活性成分。一般认为,进入靶器官的成分很有可能是药效成分,因此我们以HPLC-QTOF-MS鉴定了苦地丁入肺成分,取其与网络药理学的结果交集,确定四个化合物乙酰紫堇灵、N-反式-阿魏酰酪胺、紫堇灵、地丁紫堇碱可能是苦地丁发挥抗炎性肺损伤的主要活性物质。继而利用分子对接技术,分别将这四个成分与RNA-seq分析得到的10个差异基因进行对接。结果显示乙酰紫堇灵分子对接模型较为稳定,与10个靶蛋白相互作用能力均较强,综合指标较好,故而我们推测乙酰紫堇灵可能是苦地丁发挥抗炎性肺损伤作用最强的活性物质。5、为验证乙酰紫堇灵抗LPS诱导炎性肺损伤的作用,我们通过测定小鼠血清及肺泡灌洗液中IL-6、IL-1β和IL-18炎症因子水平和小鼠肺组织中MPO含量,以及观察肺组织病理损伤,发现乙酰紫堇灵对LPS诱导的小鼠炎性肺损伤具有明显的保护作用。进一步使用RNA-Seq技术对各组小鼠肺组织进行分析。结果显示,乙酰紫堇灵主要通过作用于NOD-like receptor signaling pathway、IL-17 signaling pathway 和 Toll-like receptor signaling pathway上发挥作用。激发信号通路间的级联反应,对LPS诱导的小鼠炎性肺损伤起到保护作用。我们进一步采用RT-qPCR检测各组肺组织中显著性变化基因的mRNA表达水平。结果显示,总体趋势与转录组测序一致。6、为探究乙酰紫堇灵在小鼠肺组织中的生物转化模式,我们运用HPLC-QTOF-MS技术鉴定给药组小鼠血清及肺组织中原型成分及其转化产物。结果显示,我们在小鼠血清中共鉴定到7个转化产物（AC1-AC7）,在肺组织中共鉴定到4个转化产物（AC2、AC4、AC5、AC7）。进一步使用分子对接技术,建立了肺组织中的4个转化产物与差异蛋白对接模型。结果显示乙酰紫堇灵以原型在机体内发挥抗炎性肺损伤效应。本研究建立了一个较为系统的研究路线,即从提取物药效作用机制-活性成分预测-活性成分验证,深入系统地阐明苦地丁抗LPS诱导的小鼠炎性肺损伤作用机制及药效物质基础,为中药药效物质筛选、机制研究和药物开发提供了实验参考。

关键词：苦地丁乙酰紫堇灵 LPS诱导肺损伤 RNA-seq 网络药理学分子对接

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苦地丁药材超高效液相色谱指纹图谱研究

中药材 2015年第8期38卷 1630-1633页

作者：杜迎翔翟小婷朱粉霞王慧中国药科大学分析化学教研室江苏南京210009 江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药口服释药系统重点研究室江苏南京210028

目的:建立苦地丁药材的超高效液相色谱指纹图谱。方法:采用UPLC-PDA技术,测定10批不同产地的苦地丁药材。Phenomenex Luna C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-0.02%三乙胺溶液梯度洗脱,流速0.3m L/min,柱温30℃,检测波长289 nm。结果:建... 详细信息

目的:建立苦地丁药材的超高效液相色谱指纹图谱。方法:采用UPLC-PDA技术,测定10批不同产地的苦地丁药材。Phenomenex Luna C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-0.02%三乙胺溶液梯度洗脱,流速0.3m L/min,柱温30℃,检测波长289 nm。结果:建立了10批不同产地的苦地丁药材的超高效液相色谱指纹图谱及其对照图谱。确定了13个共有峰,指认了其中的3个峰,各指纹图谱相似度大于0.80;聚类分析将不同产地药材分为3类;主成分分析得到3个主成分,累计方差贡献率达到89.607%,并判别出苦地丁药材中的2个主要化学成分。结论:该方法实现了苦地丁药材指纹图谱的快速、高效测定,为全面控制其质量提供了依据。

关键词：苦地丁生物碱 UPLC指纹图谱

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苦地丁品质评价研究

苦地丁品质评价研究

作者：王圆圆南京中医药大学

学位级别：硕士

苦地丁为罂粟科植物地丁草Corydalis Turcz.的干燥全草,具有清热解毒、散结消肿的功效,用于时疫感冒、咽喉肿痛、疔疮肿痛等。地丁草对气候和土壤条件要求不严,在全国多数地区均可种植。苦地丁中有生物碱类、黄酮类、氨基酸类等成分,然... 详细信息

苦地丁为罂粟科植物地丁草Corydalis Turcz.的干燥全草,具有清热解毒、散结消肿的功效,用于时疫感冒、咽喉肿痛、疔疮肿痛等。地丁草对气候和土壤条件要求不严,在全国多数地区均可种植。苦地丁中有生物碱类、黄酮类、氨基酸类等成分,然而,产地、采收期、加工方式、野生型和栽培型等对苦地丁中的成分具有一定影响,从而导致苦地丁品质各异。本课题采用HPLC-QTRAP-MS/MS技术同时测定苦地丁中18种化学成分的含量,采用UV-VIS技术对总生物碱、总黄酮、总多糖及蛋白质进行含量测定;比较不同产地、不同采收期、不同加工方式、野生型与栽培型的苦地丁药材的含量差异;采用HPLC-Triple TOF MS/MS和GC-MS技术对苦地丁化学成分进行定性分析,结合多元统计分析方法筛选出不同产地、不同采收期、不同加工方式、野生与栽培苦地丁药材差异性化学成分,并找出其量的变化规律,为品质综合评价和全面控制提供数据参考。课题研究内容主要包括以下几个方面:(1)苦地丁化学成分定量分析采用UV-VIS技术对总生物碱、总黄酮、总多糖、蛋白质含量测定,采用HPLC-QTRAP-MS/MS技术对苦地丁中18种化学成分进行含量测定,通过含量结果综合评价,品质较高的苦地丁药材产自河北省。不同采收期的苦地丁样品中总生物碱、总黄酮、总多糖、蛋白质含量呈现一定的动态变化,四月中下旬至五月初的苦地丁中总生物碱、总黄酮、总多糖、蛋白质总含量较高;不同采收期的苦地丁药材中18种成分的含量差异较大,较难直观比较综合质量,故采用灰色关联度分析法进行分析,结果显示河北省安国市的苦地丁药材较适宜的采收时间为四月中下旬至五月初,这也与传统采收时间相符合。不同的加工方式对苦地丁中化学成分具有一定的影响,其中微波60℃干燥的苦地丁中总生物碱、总黄酮含量较高,晒干的苦地丁中总多糖、蛋白质含量较高;而不同加工方式的苦地丁中18种化学成分含量结合干燥时间、能耗结果显示晒干法、鼓风50℃、微波50℃干燥法较适宜。野生型与栽培型的苦地丁药材成分含量差异明显,根据含量结果综合来看野生型药材品质高于栽培型。(2)苦地丁化学成分差异性分析采用HPLC-Triple TOF MS/MS技术结合多元统计分析方法对苦地丁中非挥发性化学成分进行差异性分析;采用GC-MS/MS技术结合多元统计分析方法对脂溶性化学成分进行差异性分析。通过高分辨质谱获得的精确分子量、碎片离子峰、色谱保留时间与数据库、参考文献结合进行差异性化学成分鉴别;通过PCA及OPLS-DA找出不同产地、野生与栽培型的苦地丁中的差异化学成分及其变化规律,其中不同产地的苦地丁药材中共鉴定出9个差异化学成分和5个脂溶性差异成分;野生型与栽培型苦地丁共鉴定出10个差异化学成分和16个脂溶性差异化学成分;不同采收期的苦地丁中共鉴定出39个脂溶性差异成分;不同加工方式的苦地丁共鉴定了 37个差异化学成分、38个脂溶性差异成分。

关键词：苦地丁化学成分含量分析差异化学成分品质评价

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苦地丁化学成分研究(英文)

天然产物研究与开发 2013年第12期25卷 1665-1668,1689页

作者：肖扬杨春娟钟明亮蒋学春刘高峰哈尔滨医科大学药学院哈尔滨150081 中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所北京100193 哈尔滨医科大学附属第二医院药学部哈尔滨150086

对罂粟科紫堇属植物苦地丁(Corydalis bungeana Turcz.)进行化学成分研究,从其95%乙醇提取物中共分离得到10个化合物。经理化和波谱分析分别鉴定为紫堇灵(1),乙酰紫堇灵(2),原阿片碱(3),8-oxocorynoline(4),neoechinulin A(5),7'-(3',4'-dihydroxyphenyl)-N-[(4-methoxyphenyl)ethyl]propenamide(6),山柰酚(7),氮-反式-对-香豆酰基酪胺(8),槲皮素(9),天师酸(10)。其中化合物5,6,8,10为首次从紫堇属植物中分离得到,化合物4,7和9是首次从该植物中分离得到。

关键词：苦地丁生物碱黄酮脂肪酸