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基于热休克蛋白90靶点的苦参碱衍生物c4对非小细胞肺癌细胞迁移、侵袭及凋亡的影响

中国实验方剂学杂志 2022年第23期28卷 71-78页

作者：曾攀科王立升广西大学医学院南宁530004

目的:研究基于热休克蛋白90靶点的苦参碱衍生物c4对非小细胞肺癌细胞迁移、侵袭及凋亡的影响。方法:采用分子对接和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测苦参碱衍生物c4(0、1、2、4、8μmol·L^(-1))对热休克蛋白90(Hsp90)的调控作用;采用... 详细信息

目的:研究基于热休克蛋白90靶点的苦参碱衍生物c4对非小细胞肺癌细胞迁移、侵袭及凋亡的影响。方法:采用分子对接和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测苦参碱衍生物c4(0、1、2、4、8μmol·L^(-1))对热休克蛋白90(Hsp90)的调控作用;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测衍生物c4(0、0.25、0.5、1、2、4、8、16μmol·L^(-1))对非小细胞肺癌A549细胞活力的影响;采用克隆形成实验检测衍生物c4(0、2、4、8μmol·L^(-1))对A549细胞增殖能力的影响;采用细胞划痕实验检测衍生物c4(0、2、4、8μmol·L^(-1))对A549细胞迁移能力的影响;采用Transwell实验检测衍生物c4(0、2、4、8μmol·L^(-1))对A549细胞侵袭能力的影响;采用流式细胞术检测衍生物c4(0、2、4、8μmol·L^(-1))对A549细胞凋亡能力的影响;采用Western blot检测衍生物c4(0、1、2、4、8μmol·L^(-1))对A549细胞蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、表皮生长因子受体(EGFR)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、p-PI3K、胱天蛋白酶-9(caspase-9)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X基因(Bax)、B细胞淋巴瘤2相关的细胞死亡激动剂(Bad)蛋白表达量的影响。结果:衍生物c4能有效地与Hsp90蛋白通过水介导的氢键网络与天冬氨酸-51(ASN-51)、甘氨酸-135(GLY-135)、苯丙氨酸-138(PHE-138)的残基相互作用,和PHE-138苯环之间的π-π堆积相互作用有助于增强其亲和力,与空白组比较,衍生物c4可以明显的下调A549细胞内Hsp90蛋白表达(P衍生物c4可以明显降低细胞活力(P衍生物c4对A549细胞的半数抑制浓度(Ic50)分别为(12.32±0.14)、(7.79±0.16)、(3.26±0.09)μmol·L^(-1);与空白组比较,衍生物c4(2、4、8μmol·L^(-1))使A549细胞克隆形成能力明显下降(P衍生物c4可以明显抑制A549细胞的迁移、侵袭能力(P衍生物c4可以显著诱导A549细胞发生凋亡反应(P衍生物c4可以明显增加caspase-9、Bax、Bad蛋白表达量(Pcl-2蛋白表达量发生不同程度降低(P衍生物c4发挥抗肿瘤的作用是通过抑制细胞活力、增殖能力、迁移和侵袭能力,并且促进细胞的凋亡反应,其发挥作用的机制可能是通过抑制Hsp90/PI3K/Akt信号通路来实现的。

关键词：苦参碱苦参碱衍生物c4 非小细胞肺癌热休克蛋白90(Hsp90) 磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路

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