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现代食品科技 2019年第12期35卷 54-60页

作者：王静孟姝李芳江苏医药职业学院药学院

探究苦参多糖对人肺癌细胞株增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响。选取人肺癌A549细胞株,经过培养后分为空白组、药物对照组以及低、中、高浓度组,检测各组细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力,并对凋亡相关蛋白Bcl-2、PI3K、Akt表达进行测... 详细信息

探究苦参多糖对人肺癌细胞株增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响。选取人肺癌A549细胞株,经过培养后分为空白组、药物对照组以及低、中、高浓度组,检测各组细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力,并对凋亡相关蛋白Bcl-2、PI3K、Akt表达进行测定。研究结果显示,72h时高浓度组细胞增殖率为18.65%,凋亡率为79.55%,均优于其他各对照组。高浓度组细胞侵袭数、迁移数均低于其他各组(p苦参多糖干预下,肺癌细胞增殖率下降,凋亡率上升,侵袭、迁移能力受到明显的抑制,凋亡相关蛋白Bcl-2、PI3K、Akt表达受到明显的调控,且其能力呈现明显的浓度依赖性,说明苦参多糖能够抑制肺癌细胞增殖、侵袭、迁移,促进肺癌细胞凋亡,为肺癌的临床治疗提供一定的理论依据。

关键词：苦参多糖肺癌细胞凋亡

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苦参多糖对大鼠牙髓干细胞增殖和成骨分化作用的研究

苦参多糖对大鼠牙髓干细胞增殖和成骨分化作用的研究

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作者：姚文霞新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:研究苦参多糖(SFRP)对牙髓干细胞(DPSCs)增殖、迁移及成骨分化的影响。方法:从大鼠牙冠组织中分离牙髓干细胞,用流式细胞术鉴定其表面生物标志物。用不同剂量的SFRP在不同时间点处理DPSCs,并用细胞计数试剂盒8(CCK-8)评估细胞活力... 详细信息

目的:研究苦参多糖(SFRP)对牙髓干细胞(DPSCs)增殖、迁移及成骨分化的影响。方法:从大鼠牙冠组织中分离牙髓干细胞,用流式细胞术鉴定其表面生物标志物。用不同剂量的SFRP在不同时间点处理DPSCs,并用细胞计数试剂盒8(CCK-8)评估细胞活力。Transwell和划痕实验检测细胞迁移能力。茜素红染色和碱性磷酸酶染色检测不同浓度SFRP对细胞的成骨分化能力。实时定量PCR(q RT-PCR)和Western Blotting检测Runt相关转录因子2(RUNX2),β-连环蛋白(β-catenin),骨钙素(osteocalcin),I型胶原蛋白(Collagen I)的表达。结果:分离的牙髓干细胞表面CD90高表达,CD45低表达。CCK8显示:高浓度的SFRP抑制了DPSCs的增殖(P<0.01),其中10mg/ml的SFRP抑制作用最为显著;Transwells实验显示:低浓度SFRP(0.2 mg/m L)促进了牙髓干细胞的迁移,而高浓度的SFRP(1mg/ml和10 mg/m L)抑制了牙髓干细胞的迁移能力(P<0.01);划痕实验显示:干预24h和48h,低浓度SFRP(0.2 mg/m L)促进了牙髓干细胞的迁移(p<0.01),而高浓度的SFRP(10 mg/m L)抑制了牙髓干细胞的迁移能力(P<0.01);茜素红染色显示:干预21d,低浓度SFRP(0.2mg/m L)形成的矿化结节最多,形成的数量也是最多,但随着浓度的增加,矿化结节变少,数量也相应的减少;碱性磷酸酶活性显示:干预21d,低浓度SFRP(0.2 mg/m L)明显增加DPSCs的碱性磷酸酶活性,随着浓度的增加,高浓度的SFRP(1mg/ml和10 mg/m L)抑制碱性磷酸酶活性。q RT-PCR显示:21d,低中浓度SFRP(0.2 mg/m L和1mg/ml)实验组RUNX2,β-catenin,osteocalcin,Collagen I的蛋白水平增加,高浓度的SFRP(10 mg/m L)CollageⅠ与对照组相比差异有统计学意义,RUNX2,β-catenin,osteocalcin目的蛋白在高浓度条件下差异无统计学意义;Western Blot显示:低中浓度SFRP(0.2 mg/m L和1mg/ml)实验组的RUNX2,β-catenin,osteocalcin,Collagen I蛋白水平增加(P<0.05),高浓度的SFRP(10 mg/m L)下调相关蛋白水平(P<0.01)。结论:低浓度(0.2 mg/m L)SFRP可明显促进DPSCs的迁移和成骨分化,并上调成骨基因RUNX2,β-catenin,osteocalcin,Collagen I的表达。

关键词：苦参多糖大鼠牙髓干细胞增殖迁移成骨分化

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苦参生物碱的分离纯化及其性能研究

苦参生物碱的分离纯化及其性能研究

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作者：穆甲骏河南工业大学

学位级别：硕士

目前研究者已从苦参中分离出了上百种化学成分,其中多种化学成分具有很强的生理活性,苦参生理活性成分以生物碱和黄酮为主,近几年从苦参中也分离出了活性多糖成分。苦参生物碱凭借其多样的的药理活性在抗菌消炎、治疗乙肝、抗心律失常... 详细信息

目前研究者已从苦参中分离出了上百种化学成分,其中多种化学成分具有很强的生理活性,苦参生理活性成分以生物碱和黄酮为主,近几年从苦参中也分离出了活性多糖成分。苦参生物碱凭借其多样的的药理活性在抗菌消炎、治疗乙肝、抗心律失常、平喘抗过敏、防治虫害等各个方面发挥着重要作用,其中,苦参生物碱已经用于临床治疗慢性乙肝、抗肿瘤和一些妇科疾病。从苦参中提取出生物碱是综合利用苦参生物碱的第一步,目前工业生产多采用溶剂萃取法,但是流行的方法和技术存在着诸多问题,如能耗大不环保、提取成本高,提取率较低等缺陷,造成了苦参的资源浪费。本研究根据苦参生物碱的理化性质,对乙醇回流、半仿生法、超声波、微波、氨水乙醇这5种有望大规模生产的提取方法进行了系统的、详细的的研究,采用酸性染料比色法测定苦参总生物碱含量,通过单因素和正交试验设计研究了5种提取方法提取苦参总生物碱的最佳提取条件,并对结果分别进行了数据统计分析处理。5种提取方法的最优提取工艺如下,乙醇回流法:80℃、乙醇浓度60%、料液比1:7、提取3次、每次3小时;半仿生法:酸水pH=3、碱水pH=8.5、提取时间4小时(1:1)、料液比1:14、共2次;超声辅助提取法:乙醇浓度60%、提取时间40min、超声频率600W、料液比1:8、提取3次;微波辅助提取法:乙醇浓度60%、微波功率900W、提取时间10min、料液比1:10、提取2次;氨水乙醇法:乙醇浓度50%、氨水浓度0.4%、提取温度60℃、提取时间2.5小时、料液比1:10、提取2次。在最佳提取条件下,比较了5种方法的提取时间、溶剂消耗量等因素的差异,发现微波和超声提取耗时短、溶剂用量少、效率值较高;半仿生法溶媒为水和少量盐酸和氢氧化钠,成本低廉,提取出的浸膏品质好、活性成分复杂,适合中药活性成分的综合利用;氨水乙醇法为新的苦参总生物碱提取方法,提取率较高,可达78.1%,较目前普遍使用的乙醇回流法的提取率提高了15%,其操作简单,溶剂用量、消耗时间、能耗上低于传统乙醇回流提取,且不需要大型微波、超声设备支持,适合用此法进行大规模生产。在研究苦参总生物碱过程中从苦参中分离出了苦参多糖,此种多糖研究较少,研究者初步证明苦参多糖具有抗肿瘤、调节免疫等生理活性。本研究采用水提醇沉法提取苦参多糖,采用苯酚硫酸法测定多糖含量,并通过单因素与正交试验考察了提取温度、提取时间、提取次数和料液比对苦参多糖得率的影响,确定了苦参多糖的最佳提取工艺:提取温度100℃、提取时间2h、提取次数3次、料液比1:20,多糖得率可达到8.97%。本研究采用HPLC测定氧化苦参碱的含量,对氧化苦参碱的热稳定性和油水分配系数进行了研究,发现氧化苦参碱具有很好的热稳定性,高温水浴对其影响很小,在100℃的温度下也能保持很好的稳定,4h内分解率不超过0.84%。氧化苦参碱在酸性缓冲溶液中的油水分配系数很小,pH为2是油水分配系数仅为0.01,说明在水相中的溶解量很高,但随着pH值的升高,油水分配系数明显增加,在正辛醇中的溶解量逐渐增加,说明氧化苦参碱在碱性条件下更易溶于氯仿、乙醇等非极性溶剂,本研究为半仿生法和氨水乙醇法提取苦参总生物碱提供依据。

关键词：苦参生物碱苦参多糖提取方法工艺优化热稳定性油水分配系数

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