检索结果-南通市图书馆

作者：刘一勇四川大学

学位级别：硕士

本文对苦参凝集素(Sophora flavescens Lectin，SFL)的研究分为三个部分，第一部分为SFL的分离纯化及部分性质研究;第二部分为对SFL的结构与生物学活性的研究;第三部分为SFL的蛋白毒性的初步研究。苦参根浸出液经硫酸铵沉淀，得SFL粗... 详细信息

本文对苦参凝集素(Sophora flavescens Lectin，SFL)的研究分为三个部分，第一部分为SFL的分离纯化及部分性质研究;第二部分为对SFL的结构与生物学活性的研究;第三部分为SFL的蛋白毒性的初步研究。苦参根浸出液经硫酸铵沉淀，得SFL粗晶。再经DEAE-Sepharose离子交换层析和Sephacryl S-200 HR凝胶过滤纯化，可获得SFL纯品。经SDS-PAGE检测为单一蛋白染色带，Sephadex G-100凝胶过滤测得其分子量为32kD，SDS-PAGE测得其亚基分子量也为32kD，证明SFL分子只有一个亚基，SFL含有3.5％的中性糖，用比色法测得每分子SFL含有3个色氨酸残基，经等电聚焦测得其等电点为5.56。当SFL浓度为0.97μg／mL时就能凝集兔红细胞，无血型专一性，糖抑制实验表明，甘露糖为SFL的专一性抑制糖。 SFL的远紫外圆二色性谱(CD谱)显示217 nm处的单一负峰，此时SFL分子中含有15.8％a-螺旋，48.3％β-折叠和35.9％无规卷曲，研究了不同温度、pH和不同脲浓度对SFL的CD谱和凝集兔红细胞活性的影响，结果表明在pH4.0或温度80℃以上或脲浓度2mol／L以上时，SFL完全失去凝血活性或仅有微弱活性，此时CD谱发生很大的变化，二级结构遭到严重破坏，对SFL的荧光光谱进行了研究，结果表明Trp残基对SFL的荧光强度贡献最大。经N-溴代丁二酰亚胺(NBS)修饰显示其中2个Trp残基位于分子表面，当这2个Trp残基被修饰后，SFL的凝血活性完全丧失，糖保护试验表明SFL专一性抑制糖Man能够保护SFL，阻断NBS对SFL的修饰作用，说明色氨酸为SFL凝血活性所必需并参与了其糖结合部位的组成．SFL随着NBS 的逐渐修饰，其内源荧光光谱发生相应变化，结果表明分子表面的2 个Trn残基处于分子的疏水袋中，而另一个Trn残基则埋藏于分子内＿部·荧光淬灭研究表明丙烯酚胺能淬灭87％色氨酸残基的荧光·琉基～修饰实验表明经对氯汞苯甲酸仔CMB）和 N－乙基）l＠丁烯二酚亚胺州EM）修饰后，SFL的凝血活性不发生改变．用NEM作修饰剂测定了SFL的可反应疏基数和总疏基数，结果显示SFL分子中不含琉基，即该蛋白质分子不含半眺氨酸残基．通过帆八双向对角线洲S干AGE，发现 SFL 不含h硫键，进一步印证了SFL中不含半眯氨酸残基的结论．SFL分子中的酪氨酸残基分别经 N－乙酚咪哩（N）和对硝基苯磺酚氟（NB SF）修饰后，其凝血活性不发生改变，说明Tyr残基与SFL的凝血活性无关．用MTT法测定了SFL对HeLa细胞的抑制率，结果表明SFL对HeLa 细胞的生长有显著的抑制作用，随着所加 SFL浓度的增大，细胞抑制率增大．分别采用 Hoechst33342和 PI双染、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞光度术（FCM）的方法，研究了 SFL对 HeLa细胞凋亡的影响，结果证实SFL可诱导HeLa细胞发生凋亡，但是诱导HeLa细胞凋亡的能力不是很强，对浓度与作用时间有明显的依赖关系．当作用60 小时以后，开始出现大量坏死细胞．可见，SFL对HeLa细胞的作用不仅是诱导其发生凋亡，同时也可直接杀灭HeLa细胞．本文对SFL的分离纯化、理化性质、结构与生物学活性进行了研究，对SFL的细胞毒性作了初步的探索，为深入研究SFL的分子结构与生物学活性的关系及其对肿瘤细胞毒性作用的机理打下了基础．

关键词：苦参凝集素圆二色性荧光光谱化学修饰 MTT比色法细胞凋亡

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苦参凝集素的分离纯化及部分性质研究

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Acta Botanica Sinica 2000年第8期42卷 828-833页

作者：邓俊林曾仲奎鄢波黄兴奇重庆师范学院生物系重庆400047 四川大学生物系成都610064 云南省农业科学院生物技术研究所昆明650223

从苦参 (SophoraflavescensAit.)根浸出液经硫酸铵分级 ,得苦参凝集素 (SFL)粗品 ,再经DEAE_Sepharose、SephadexG_1 5 0和HPLC层析 ,获得具有强凝集活性的SFL样品 ,用PAGE和SDS_PAGE检测均为单一蛋白染色带。SDS_PAGE显示SFL分子仅有... 详细信息

从苦参 (SophoraflavescensAit.)根浸出液经硫酸铵分级 ,得苦参凝集素 (SFL)粗品 ,再经DEAE_Sepharose、SephadexG_1 5 0和HPLC层析 ,获得具有强凝集活性的SFL样品 ,用PAGE和SDS_PAGE检测均为单一蛋白染色带。SDS_PAGE显示SFL分子仅有一条肽链 ,SephadexG_1 0 0和SDS_PAGE测得其分子量均为 32kD。当SFL浓度为 0 .97μg/mL时能凝集兔红细胞 ,无血型专一性 ,其凝血活性可被甘露糖和果糖抑制 ,麦芽糖和葡萄糖有弱的抑制作用 ,凝集素分子含有 2 .89%的中性糖 ;当SFL量为 6 2 μg时 ,对棉花枯萎病菌 (FusariumvasinfectumAtk .)、小麦赤霉病菌(Gibberllasaubinetii (Mont.)Sacc .)和水稻稻瘟病菌 (PiriculariaoryzaeCav)菌丝体的生长发育有明显地抑制作用。用Edman法在蛋白测序仪上测出SFL的N端肽链 30个氨基酸的排列顺序为 :T/A/VDXLXFTFSDFDP NGEDLLFQGDAHVTSNN。

关键词：苦参凝集素抑菌作用 N端肽链性质

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苦参凝集素的色氨酸残基修饰与荧光光谱研究

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四川大学学报（自然科学版） 2001年第5期38卷 738-743页

作者：刘一勇周红汪新艳孙敬儒鲍锦库四川大学生命科学学院成都610064

苦参凝集素 (SFL)经等电聚焦测得其等电点为 5 5 6 .用比色法测得每分子SFL含有 3个色氨酸残基 .经N 溴代丁二酰亚胺 (NBS)修饰表明其中 2个Trp残基位于分子表面 ,当这 2个Trp残基被修饰后 ,SFL的凝血活性完全丧失 ,糖保护试验表明SFL... 详细信息

苦参凝集素 (SFL)经等电聚焦测得其等电点为 5 5 6 .用比色法测得每分子SFL含有 3个色氨酸残基 .经N 溴代丁二酰亚胺 (NBS)修饰表明其中 2个Trp残基位于分子表面 ,当这 2个Trp残基被修饰后 ,SFL的凝血活性完全丧失 ,糖保护试验表明SFL专一性抑制糖Man能够保护SFL ,阻断NBS对SFL的修饰作用 ,说明色氨酸不仅是SFL凝血活性所必需的 ,而且还参与其糖结合部位的组成 .SFL随着NBS的逐渐修饰 ,其内源荧光光谱亦相应发生变化 ,结果表明分子表面的 2个Trp残基可能位于分子的疏水袋中 ,而另一个Trp残基则埋藏于分子内部 .荧光淬灭研究表明 ,丙烯酰胺能淬灭

关键词：苦参凝集素色氨酸残基化学修饰荧光光谱荧光淬灭糖结合蛋白

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