检索结果-南通市图书馆

作者：马昆中国中医科学院

学位级别：硕士

目的：通过检测苦参乌梅汤对HepG2.2.15细胞中核转录因子(NF-κB)、促炎性细胞因子(IL-18、IL-2、IL-6、IFN-γ和TNF-α)、趋化因子(CCL20)以及JAK-STAT信号通路部分信号因子(STAT1、STAT2、ISGF3、OAS和PKR)的mRNA表达水平的影响,探讨... 详细信息

目的：通过检测苦参乌梅汤对HepG2.2.15细胞中核转录因子(NF-κB)、促炎性细胞因子(IL-18、IL-2、IL-6、IFN-γ和TNF-α)、趋化因子(CCL20)以及JAK-STAT信号通路部分信号因子(STAT1、STAT2、ISGF3、OAS和PKR)的mRNA表达水平的影响,探讨其抗HBV的作用机制。方法：1.细胞培养：将冻存的HepG2.2.15细胞混悬液移入离心管,加入5ml的培养液A,轻轻摇均匀,然后置入离心机1000rpm离心5min,去除上层液。然后接种在含有培养液A的培养皿中继续培养,当观察HepG2.2.15细胞融合至85%-90%时,再以0.25%的胰蛋白酶进行消化传代(1：2),每2-3天更换一次培养液A,每周用培养液C对培养的细胞进行一次筛选,以确保HepG2.2.15细胞株的稳定性。2.药品配制与分组：将浓度为1.0×106/L的HepG2.2.15细胞悬液接种于6孔板,分为空白对照组(培养液),阳性对照组(恩替卡韦,0.1mg/mL),苦参乌梅汤低、中、高剂量组(0.156mg/ml、0.625mg/ml、2.50mg/ml)共5个实验组,每组3个复孔,每孔200 μ L,每24h换液1次,96h时收集细胞,-80℃冻存,待测。3.根据互联网生物信息资源辅助设计引物序列,Trizol一步法提取细胞总RNA,利用逆转录酶反转录成cDNA,再以cDNA为模板进行PCR扩增,检测细胞内核转录因子(NF-κB)、促炎性细胞因子(IL-18、IL-2、IL-6、 IFN-γ和TNF-α)、趋化因子(CCL20)以及JAK-STAT信号通路部分信号因子(STAT1、STAT2、ISGF3、OAS和PKR)的mRNA表达水平。结果：1.苦参乌梅汤对HepG2.2.15细胞核转录因子(NF-κB)的mRNA表达水平的影响：与空白对照组比较,苦参乌梅汤不同剂量组(0.156mg/ml、 0.625mg/ml和2.500mg/ml)作用HepG2.2.15细胞96h后,细胞内NF-κB的mRNA表达水平均下调,差异均具有统计学意义(P苦参乌梅汤浓度为2.500mg/ml时,NF-κB的mRNA表达相对值最低,为0.724±0.021。2.苦参乌梅汤对HepG2.2.15细胞促炎性细胞相关因子(IL-18、IL-2、 IL-6、IFN-γ和TNF-α)的mRNA表达水平的影响：与空白对照组比较,苦参乌梅汤不同剂量组(0.156mg/ml、0.625mg/ml和2.500mg/ml)作用HepG2.2.15细胞96h后,细胞内IFN-γ和TNF-α的mRNA表达相对值均降低,当苦参乌梅汤的浓度为2.500mg/ml时,IFN-γ和TNF-α的mRNA表达相对值最低,分别为0.579±0.553和0.713±0.104,但与空白对照组相比均无显著性差异(P>0.05);IL-18的mRNA表达相对值均升高,当苦参乌梅汤的浓度为2.500mg/ml时,IL-18的1-nRNA表达相对值最高,为5.254±0.109,与空白对照组比较有显著性差异(P0.05);IL-6的nRNA表达相对值均降低,当苦参乌梅汤的浓度为2.500mg/ml时,IL-6的mRNA表达相对值最低,为0.711±0.183,与空白对照组相比差异有统计学意义(P苦参乌梅汤对细胞趋化因子(CCL20)表达水平的影响：与空白对照组比较,苦参乌梅汤不同剂量组(0.156mg/ml、0.625mg/ml和2.500mg/ml)作用HepG2.2.15细胞96h后,细胞内CCL20的mRNA表达相对值低剂量组和高剂量组均降低,而中剂量组升高,并且各剂量组CCL20的mRNA表达相对值与空白对照组比较均有显著性差异(P苦参乌梅汤的浓度为0.625mg/ml时,CCL20的mRNA表达相对值最高,为1.349±0.203。4.苦参乌梅汤对JAK-STAT信号转导通路部分信号相关细胞因子(STAT1、STAT2、ISGF3、OAS和PKR)的mRNA表达水平的影响：与空白对照组比较,苦参乌梅汤不同剂量组(0.156mg/ml、0.625mg/ml和2.500mg/ml)作用HepG2.2.15细胞96h后,细胞内STAT1的mRNA表达相对值低剂量组降低,中剂量组和高剂量组均升高,STAT2的mRNA表达相对值均降低,当苦参乌梅汤的浓度为2.500mg/ml时,STAT1和STAT2的mRNA表达相对值最高,分别为1.110±0.116和0.900±0.039,但与空白对照组相比均无统计学意

关键词：苦参乌梅汤 HepG2.2.15细胞乙型肝炎病毒分子机制中医药

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苦参乌梅汤影响乙型肝炎病毒转基因小鼠乙型肝炎表面抗原表达的研究

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中国医药 2011年第2期6卷 129-130页

作者：郭朋刘燕玲孔伟郑蕊张引强中国中医科学院西苑医院肝病科北京100091

目的探讨苦参乌梅汤对HBV转基因小鼠HBsAg表达的影响，确定苦参乌梅汤的最佳组方。方法采用正交试验设计，以HBV转基因小鼠血清中HBsAg的含量为评定指标，考察苦参乌梅汤中苦参、乌梅不同比例，不同用量以及不同给药时间对HBsAg表达的... 详细信息

目的探讨苦参乌梅汤对HBV转基因小鼠HBsAg表达的影响，确定苦参乌梅汤的最佳组方。方法采用正交试验设计，以HBV转基因小鼠血清中HBsAg的含量为评定指标，考察苦参乌梅汤中苦参、乌梅不同比例，不同用量以及不同给药时间对HBsAg表达的影响。结果苦参乌梅汤按照苦参、乌梅1：1的比例，以9．0g／（kg·d）给药1周，对HBV转基因小鼠血清中HBsAg表达影响最为显著。其中，影响HBV转基因鼠HBsAg表达最主要的因素是苦参和乌梅的配比，差异具有统计学意义；日处方量和给药时间差异均不具有统计学意义。结论苦参乌梅汤最佳组方应为苦参、乌梅1：1的比例，以9．0g/（kg·d）给药1周。此组方能够明显降低HBV转基因小鼠血清中HBsAg的表达。

关键词：肝炎表面抗原,乙型正交试验小鼠,转基因苦参乌梅汤

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基于网络药理学和代谢组学的苦参乌梅汤对HepG 2.2.15细胞模型抗乙型肝炎病毒作用机制研究

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中国医药导报 2022年第15期19卷 12-18页

作者：郑蕊郭朋刘宇孔伟陈艳中国中医科学院西苑医院药学部北京100091

目的应用网络药理学和代谢组学技术探讨苦参乌梅汤对HepG 2.2.15细胞模型抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用机制。方法采用酶联免疫吸附试验评价苦参乌梅汤对HepG 2.2.15细胞模型的药效影响。采用UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS的代谢组学分析方法,结... 详细信息

目的应用网络药理学和代谢组学技术探讨苦参乌梅汤对HepG 2.2.15细胞模型抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用机制。方法采用酶联免疫吸附试验评价苦参乌梅汤对HepG 2.2.15细胞模型的药效影响。采用UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS的代谢组学分析方法,结合主成分分析法及正交-偏最小二乘法分析法进行多元统计分析。另外,采用网络药理学的技术预测苦参乌梅汤抗HBV的潜在代谢通路。结合两部分获得的代谢通路,探究苦参乌梅汤抗HBV的作用机制。结果与空白组比较,1250μg/ml组和2500μg/ml组细胞存活率更低(P苦参乌梅汤候选活性成分的潜在治疗乙型肝炎靶点共115个,degree值排名前5位的靶点依次为蛋白激酶B、人体表皮生长因子受体、原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src、肿瘤坏死因子和血管内皮生长因子A;基因本体富集分析到679个条目,包括生物过程2162个、细胞组分56个、分子功能133个;京都基因和基因组数据库通路富集分析,P值排名前20位的通路主要有PI3K-Akt、乙型肝炎、卡波西氏肉瘤相关疱疹病毒感染等信号通路。结论苦参乌梅汤可以抗HBV,代谢组学和网络药理学发现其作用的机制可能与调节鞘脂代谢通路、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成、苯丙氨酸代谢通路及PI3K-Akt信号通路有关,为抗HBV的作用机制提供了依据。

关键词：苦参乌梅汤抗乙型肝炎病毒代谢组学网络药理学

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