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芋花叶病毒检测试剂盒的研制

安徽大学学报（自然科学版） 2009年第4期33卷 85-89,94页

作者：韦传宝贾玉成杜宇皖西学院植物生物技术实训中心安徽六安237012 安徽大学生命科学学院安徽合肥230039

用IPTG诱导融合表达芋花叶病毒（Dasheen mosaic virus，DMV）CP基因的菌株，通过12％***和5％-20％梯度SDS—PAGE二次制备电泳获得纯化的CP免疫家兔，获得经过Western blot分析为特异的抗CP血清．硫酸铵沉淀初步提取IgG，然后用Protei... 详细信息

用IPTG诱导融合表达芋花叶病毒（Dasheen mosaic virus，DMV）CP基因的菌株，通过12％***和5％-20％梯度SDS—PAGE二次制备电泳获得纯化的CP免疫家兔，获得经过Western blot分析为特异的抗CP血清．硫酸铵沉淀初步提取IgG，然后用Protein A—Red Sepharose亲和层析进一步纯化IgG，IgG与甘油1：1混合获得效价1：3100的一抗，将一抗、羊抗兔二抗和4-硝基苯基磷酸二钠组成DMV检测试剂盒．用研制的检测试剂盒对芋、魔芋和马蹄莲叶片样品的间接ELISA检测表明，DMV在田间普遍发生，并确定研制的试剂盒完全可用于DMV检测．

关键词：芋花叶病毒抗血清制备试剂盒研制

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侵染白附子的芋花叶病毒分子变异研究

植物病理学报 2022年第6期52卷 881-890页

作者：秦艳红高素霞刘玉霞文艺杨瑾李雪梦王凤丽戚文平康宇静王飞鲁传涛河南省农业科学院植物保护研究所河南省农作物病虫害防治重点实验室农业部华北南部作物有害生物综合治理重点实验室郑州450002 开封市农林科学研究院开封475004

为明确侵染白附子的芋花叶病毒(dasheen mosaic virus,DsMV)的分子变异情况,对51个DsMV白附子分离物(DsMV-BF)的外壳蛋白(Coat Protein,CP)基因和3个分离物的近全长基因组序列进行了克隆和测定,DsMV-BF的CP基因大小有855个和942个核苷... 详细信息

为明确侵染白附子的芋花叶病毒(dasheen mosaic virus,DsMV)的分子变异情况,对51个DsMV白附子分离物(DsMV-BF)的外壳蛋白(Coat Protein,CP)基因和3个分离物的近全长基因组序列进行了克隆和测定,DsMV-BF的CP基因大小有855个和942个核苷酸两种类型,51个白附子分离物之间CP基因的核苷酸和氨基酸一致率分别为88.3%~100%和91.9%~100%,BF8、BF30和BF38分离物之间多聚蛋白的核苷酸和氨基酸序列一致率分别为82.9%~95.9%和90.7%~95.9%,与GenBank中其他分离物之间多聚蛋白的核苷酸和氨基酸序列一致率分别为76.9%~99.4%和85.6%~99.0%;P1基因的分子变异较大,P1基因大小有987个和990个核苷酸两种类型;CP基因核苷酸序列系统进化树分析结果表明,侵染白附子的DsMV分离物可分为两个亚组;重组分析结果表明BF8和BF30分离物各检测到1个重组事件,BF38检测到2个重组事件。

关键词：芋花叶病毒分子变异重组分析

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我国13种天南星科作物上的芋花叶病毒

微生物学报 1996年第2期36卷 126-131页

作者：陈集双李德葆浙江农业大学生物技术研究所杭州310029

用直接负染和免疫电镜方法从我国浙江省(杭州、奉化、温州等地)、上海、北京、福建、湖南等地的13种天南星科大田作物:芋(Colocasia esadenta)、魔芋(Amorphophallus sinesis)、药用植物:半夏(Pinellia ternata)、掌叶半夏(P. cordata)... 详细信息

用直接负染和免疫电镜方法从我国浙江省(杭州、奉化、温州等地)、上海、北京、福建、湖南等地的13种天南星科大田作物:芋(Colocasia esadenta)、魔芋(Amorphophallus sinesis)、药用植物:半夏(Pinellia ternata)、掌叶半夏(P. cordata)、盾叶半夏(P. pedatisecta)以及观赏植物:马蹄莲(Zantedeschia aethiopica)、海芋(Alocasia macrorrhiza)、象耳芋(Colocasia gigantea)、台果芋(Syngonium podophygum)、黄金葛(Scindapsus aureus)、广东万年青(Aglaonema modestum)、花叶芋(Caladium bicolar)、剑叶喜林芋(Philodendium oxycadium)上均检测到芋花叶病毒(Dasheen mosaicvirus, DMV)。在免疫吸附-免疫修饰电镜水平上,该病毒与DMV抗血清和PVY抗血清均有强阳性反应。在人工接种条件下,DMV各分离物均不侵染烟草等非天南星科供试植物,但接种天南星科指示植物Philodendron selloum、半夏和掌叶半夏均表现系统症状。受DMV自然感染的天南星科作物叶中,病毒粒子的平均长度为752nm,病毒粒子的最大分布范围为667～882nm。从感病植物叶组织超薄切片中观察到紧密聚集和分散的线状病毒粒子和典型的Potyvirus柱状内含体。内含体同时具有风轮状(Pinwheel)、卷筒状(Scroll-like)和片层状聚集体(Laminated aggregate)。

关键词：芋花叶病毒天南星科作物植物病毒

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引起掌叶半夏花叶病的芋花叶病毒

植物病理学报 1996年第1期26卷 87-91页

作者：陈集双洪健周雪平李德葆俞海琪浙江农业大学生物所浙江省中药研究所

在表现花叶症状的天南星科药用植物掌叶半夏（Ｐｉｎｅｌｉａｃｏｒｄａｔａ）上检测到一种线状病毒，病毒粒子的最大分布范围为７２５～７７６ｎｍ，平均长度为７４５ｎｍ。提纯病毒Ａ２６０／Ａ２８０为１．２８，电镜下观察为均一的... 详细信息

在表现花叶症状的天南星科药用植物掌叶半夏（Ｐｉｎｅｌｉａｃｏｒｄａｔａ）上检测到一种线状病毒，病毒粒子的最大分布范围为７２５～７７６ｎｍ，平均长度为７４５ｎｍ。提纯病毒Ａ２６０／Ａ２８０为１．２８，电镜下观察为均一的线状病毒粒子。经免疫电镜测定该线状病毒与芋花叶病毒（ＤＭＶ）抗血清有强的阳性反应。在病叶横切面的细胞质里观察到具风轮状、卷筒状和片层状聚集结构，在纵切面上为束状的细胞质内含体以及分散的和紧密聚集的线状病毒粒子。寄主反应测定结果表明，该病毒侵染天南星科植物，不侵染其它１１科３５种非天南星科供试植物。据上述试验结果，该病毒分离物认为属芋花叶病毒。

关键词：掌叶半夏芋花叶病毒花叶病

几种天南星科植物受芋花叶病毒感染后的叶片组织病变研究

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电子显微学报 1994年第3期13卷 183-189页

作者：陈集双高其康洪健李德葆浙江农业大学生物技术研究所

对自然感染芋花叶病毒（ＤＭＶ）的几种天南星科植物的叶片超微结构进行电镜观察的结果表明：ＤＭＶ感染天南星科植物同时形成风轮状（Ｐｉｎｗｈｅｅｌ）、卷筒状（Ｓｃｒｏｌｌ－ｌｉｋｅ）和片层状聚集体（ｌａｍｉｎａｔｅｄａｇｒ... 详细信息

对自然感染芋花叶病毒（ＤＭＶ）的几种天南星科植物的叶片超微结构进行电镜观察的结果表明：ＤＭＶ感染天南星科植物同时形成风轮状（Ｐｉｎｗｈｅｅｌ）、卷筒状（Ｓｃｒｏｌｌ－ｌｉｋｅ）和片层状聚集体（ｌａｍｉｎａｔｅｄａｇｒｅｇｇａｔｅｓ）结构的细胞质内含体（即柱状内含体，ＣｙｌｉｎｄｅｒｉｃａｌＩｎｃｌｕｓｉｏｎ，ＣＩ）。ＤＭＶ所产生的细胞质内合体与Ｅｄｗａｒｄｓｏｎ等所划分的Ⅱ型ＣＩｓ相符。在叶肉细胞质中还观察到分散的病毒粒子、大量紧密聚集的病毒粒子以及主要由病毒粒子组成的类似病毒包含体（Ｖｉｒｏｐｌａｓｍａ）的结构。同时，不同寄主来源对ＤＭＶ细胞质内含体的形状有明显影响：来源于自然感病的马蹄莲细胞中ＣＩｓ横切面上主要是风轮状结构组成；在芋、广东万年青的感病细胞中亦是以风轮状结构占优势，但具有一定数量的片层状结构和卷筒状结构；在魔芋、半夏和海芋的细胞中则以卷简状结构为主，具有一定数量的片层状结构，有的甚至完全不形成风轮状．

关键词：芋花叶病毒天南星科植物细胞质内含体

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引起马蹄莲花叶病的芋花叶病毒

中国病毒学 1993年第3期8卷 271-276页

作者：陈集双高其康李德葆浙江农业大学生物技术研究所杭州310029

在采自杭州、北京、上海等地的表现花叶和扭曲症状的马蹄莲(Zanledeschia aethiopica)上检测到一种线状病毒。经测定,其平均粒子长度为745nm,病毒粒子最大分布范围为720—750nm。该病毒经免疫电镜观察与芋花叶病毒(DMV)有紧密的血清学关... 详细信息

在采自杭州、北京、上海等地的表现花叶和扭曲症状的马蹄莲(Zanledeschia aethiopica)上检测到一种线状病毒。经测定,其平均粒子长度为745nm,病毒粒子最大分布范围为720—750nm。该病毒经免疫电镜观察与芋花叶病毒(DMV)有紧密的血清学关系,且与3个PVY抗血清也有一定的反应。在病叶细胞中观察到紧密聚集。松散聚集和分散的线状病毒粒子和典型的风轮状内含体。作者认为:感染马蹄莲的该种病毒符合芋花叶病毒的特征。本文对该病毒的血清学关系和组织病变情况进行了分析讨论。

关键词：马蹄莲芋花叶病毒植物病毒

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山东省芋花叶病毒病的田间调查及鉴定

中国蔬菜 2017年第7期 68-72页

作者：高利利姜珊珊吴斌张眉王升吉辛相启山东省农业科学院植物保护研究所山东济南250100

为明确芋花叶病毒(Dasheen mosaic virus,Ds MV)在山东芋种植区的发生和遗传进化,在山东潍坊、青岛、烟台、日照和临沂等5个芋主栽区进行调查,对采集样品进行病毒病病原鉴定、序列分析和遗传进化分析。结果显示,芋花叶病毒的检出率为55.... 详细信息

为明确芋花叶病毒(Dasheen mosaic virus,Ds MV)在山东芋种植区的发生和遗传进化,在山东潍坊、青岛、烟台、日照和临沂等5个芋主栽区进行调查,对采集样品进行病毒病病原鉴定、序列分析和遗传进化分析。结果显示,芋花叶病毒的检出率为55.9%,在5个地区皆有分布。5个Ds MV分离物cp基因的核苷酸序列相似性为88.5%~91.9%,氨基酸序列相似性为93.4%~97.5%;与国内外已报道代表性Ds MV分离物cp基因的核苷酸与氨基酸的序列相似性分别为74.8%~99.4%、79.7%~99.1%。遗传进化分析显示,Ds MV山东分离物与日本分离物(Ds23)、中国分离物(ND和ZAN)和美国分离物(Ds MV-U2)亲缘关系较近,聚在同一分支。综上,Ds MV在山东省芋主栽区发生普遍,其cp基因序列之间变异相对较大。

关键词：芋花叶病毒外壳蛋白基因序列分析

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魔芋中芋花叶病毒的RT-PCR检测

湖北农业科学 2010年第1期49卷 9-11页

作者：胡晓吴金平刁英顾玉成杨朝柱陈永波滕建勋胡中立武汉大学生命科学学院武汉430072 湖北省农业科学院经济作物研究所武汉430064 湖北省恩施自治州农业科学研究院湖北恩施445002

根据已报道的DsMV中的衣壳蛋白(cp)基因序列,首先合成1对扩增DsMV的cp基因中间部分核心序列的寡核苷酸引物;然后将提取的魔芋植株的总RNA反转成cDNA,再以cDNA为模板,用上述引物进行常规PCR反应,结果扩增得到了与预期大小一致的0.35kb片... 详细信息

根据已报道的DsMV中的衣壳蛋白(cp)基因序列,首先合成1对扩增DsMV的cp基因中间部分核心序列的寡核苷酸引物;然后将提取的魔芋植株的总RNA反转成cDNA,再以cDNA为模板,用上述引物进行常规PCR反应,结果扩增得到了与预期大小一致的0.35kb片段,健康魔芋植株接种DsMV后也扩增得到同样大小的片段,而健康植株则未扩增到任何片段。从而建立了魔芋中DsMV经济简便的RT-PCR检测体系,为魔芋DsMV的防治和脱毒苗的检测提供了有效手段。

关键词：魔芋芋花叶病毒 RT—PCR

水稻黑条矮缩病毒S8和S10基因序列分析和芋花叶病毒全基因组的测定

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水稻黑条矮缩病毒S8和S10基因序列分析和芋花叶病毒全基因组的测定

作者：刘志强山东农业大学

学位级别：硕士

黄淮海平原是我国重要的玉米产区。玉米粗缩病在黄淮海地区发生普遍,给黄淮海地区玉米安全生产造成了严重威胁。本研究用RT-PCR方法对山东、江苏、安徽等地采集的玉米、小麦和灰飞虱样品携带水稻黑条矮缩病毒(Rice black streaked dwar... 详细信息

黄淮海平原是我国重要的玉米产区。玉米粗缩病在黄淮海地区发生普遍,给黄淮海地区玉米安全生产造成了严重威胁。本研究用RT-PCR方法对山东、江苏、安徽等地采集的玉米、小麦和灰飞虱样品携带水稻黑条矮缩病毒(Rice black streaked dwarf virus, RBSDV)的情况进行了检测,测定并分析了部分分离物S8和S10的序列,以期明确山东RBSDV的来源,为玉米粗缩病的防治提供理论依据。获得了8个山东RBSDV分离物的S8序列和49个RBSDV分离物的S10序列。这些分离物的S8片段全长均为1936bp,5’-非编码区(5’-UTR)为24bp,3’-非编码区(3’-UTR)为136bp,含有一个1776bp的开放阅读框(ORF),编码591个氨基酸(aa),与其他RBSDV分离物S8片段的核苷酸(nt)和aa序列一致率分别为96.3%-99.5%和99.4%-99.9%;S10片段全长1801bp,5’-UTR为21bp,3’-UTR为103bp,含有一个1678bp的ORF,编码558个aa,与其他RBSDV分离物S10片段的nt一致率为93.4%-99.5%,aa一致率为98.4%-99.9%。在根据S10基因构建的系统进化树中,RBSDV分离物可以分为与地理和寄主来源无关的两个组,每组分离物均可再分为两个亚组。来自不同地区或寄主的RBSDV种群均处于负向(或纯化)选择。江苏和山东RBSDV分离物之间,以及山东小麦和玉米RBSDV分离物之间基因交流频繁。芋花叶病毒(Dasheen mosaic virus, DsMV)是世界性分布的危害天南星科植物的重要病毒。本研究通过RT-PCR和5’-RACE的方法,克隆了泰安掌叶半夏DsMV分离物的全基因组序列。该序列全长为10030nt,5’-UTR为165nt,3’-UTR为250nt,含有一个9612nt的ORF,编码一个由3203aa组成的多聚蛋白。该分离物与DsMV分离物M13(AJ298033)的nt和aa一致率分别为83.86%和96.53%。在根据CP基因构建的系统进化树中,41个DsMV分离物分成2个组,其中I组有40个分离物,进一步分为IA亚组、IB亚组和IC亚组;II组只有一个分离物。本论文得到的分离物属于IA亚组。

关键词：水稻黑条矮缩病毒玉米粗缩病分子变异芋花叶病毒马铃薯Y病毒属全基因组序列