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腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊IL-2融合基因的分泌型表达

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动物医学进展 2004年第2期25卷 69-70页

作者：刘艳环苗利光王克坚刘波李理中国农业科学院特产研究所吉林132109 厦门大学海洋环境学院福建厦门361005 吉林特产高等专科学校吉林132109

用改进的 Mg Cl2 法制备宿主菌株PAK/ 2 pfs感受态细胞 ;由 JM10 5工程菌中提取纤毛蛋白与绵羊白细胞介素 2 ( Pilin-IL-2 )融合基因表达载体 ,转化宿主细胞 PAK/ 2 pfs,筛选出具有 Pilin-IL-2融合基因表达载体的阳性克隆菌株 ;在营养... 详细信息

用改进的 Mg Cl2 法制备宿主菌株PAK/ 2 pfs感受态细胞 ;由 JM10 5工程菌中提取纤毛蛋白与绵羊白细胞介素 2 ( Pilin-IL-2 )融合基因表达载体 ,转化宿主细胞 PAK/ 2 pfs,筛选出具有 Pilin-IL-2融合基因表达载体的阳性克隆菌株 ;在营养肉汤中进行 Pilin-IL-2融合基因的表达。培养 16～ 18h后 ,离心 ,向上清液中加入饱和 ( NH4) 2 SO4提取 Pilin-IL-2融合基因表达蛋白。用羊抗兔 E型节瘤拟杆菌抗血清与提取的融合蛋白进行对流免疫电泳。

关键词：腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白绵羊融合基因工程疫苗分泌型表达白细胞介素2 免疫佐剂

牛接种天然节瘤拟杆菌菌苗后抗趾间皮炎的免疫作用

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动物医学进展 1987年第1期 35-36页

作者： Clark B. L. 金扩世

趾间皮炎又称腐蹄病,是由良性节瘤拟杆菌(Bacteroides nodosus)引起的牛的一种传染性疾病。在潮湿、泥泞的环境中过度拥挤的牛容易流行本病。它的特征是:具有

关键词：趾间节瘤拟杆菌拟杆菌属坏死杆菌病皮炎菌苗疫苗免疫作用天然

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腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白的基因克隆与表达

中国兽医学报 2000年第4期20卷 362-366页

作者：王克坚 Dhungyel Om 冯书章吴广谋杨海滨 Egerton JR 朱平殷震中国农业科学院特产研究所吉林吉林市132109 澳大利亚悉尼大学解放军军需大学军事兽医研究所吉林长春130062

用 PCR技术从腐蹄病 E型节瘤拟杆菌克隆出具免疫保护性抗原 0 .93 kb纤毛蛋白基因 ( Pili基因 ) ,利用该基因构建了纤毛蛋白基因表达载体。先将 PCR产物 Pili基因克隆于 TA Cloning System,扩增后 ,用Eco R 酶切 ,低熔点胶回收 ,经 Kle... 详细信息

用 PCR技术从腐蹄病 E型节瘤拟杆菌克隆出具免疫保护性抗原 0 .93 kb纤毛蛋白基因 ( Pili基因 ) ,利用该基因构建了纤毛蛋白基因表达载体。先将 PCR产物 Pili基因克隆于 TA Cloning System,扩增后 ,用Eco R 酶切 ,低熔点胶回收 ,经 Klenow补平后 ,用 T4DNA连接酶与中间载体 p PLλ连接 ,将 Pili基因克隆于 p PLλ载体 ;经 Bam H 、Bgl 、Pvu 和 Smal +Bgl 酶切鉴定和 p PLλ-Pili重组质粒 Pili基因序列测定正确后 ,扩增 p PLλ-Pili重组质粒 ,用 Bam H 酶切出 2 .1 kb大小的片段 ,回收后 ,与 p ME2 90表达质粒连接 ,转染宿主细胞 PAK/2 pfs,在营养肉汤中进行 Pili基因的表达。培养 1 8～ 2 4 h后 ,离心 ,向上清液中加入 0 .1mol/L Mg Cl2 提取重组纤毛蛋白。用羊抗兔 E型节瘤拟杆菌抗血清与提取的重组纤毛蛋白进行对流免疫电泳 ,证明重组纤毛蛋白具有特异性 ;染料结合法测定 1 0 0 0 m L上清液中表达纤毛蛋白粗含量约为 1 1 4mg。SDS-PAGE测定重组纤毛蛋白的表达量占总菌量的 1 1 .8%,Western

关键词：腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因克隆

以不同剂量,型别的节瘤拟杆菌弗氏佐剂菌苗免疫绵羊产生抗体与保护力的观察

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青海畜牧兽医杂志 1984年第3期 44-44页

作者： Stewart,Q. J. 乐牧

加完全与不完全弗氏佐剂乳化的六种提纯节瘤拟杆菌菌苗,以不同的三种剂量分别免疫绵羊,每羊二次。免疫一月后,放牧于有腐蹄病病菌污染的草场上26周,观察结果:两种较大剂量免疫绵羊的保护力优于小剂量。佐剂的种类无差别,但不完全佐剂菌... 详细信息

加完全与不完全弗氏佐剂乳化的六种提纯节瘤拟杆菌菌苗,以不同的三种剂量分别免疫绵羊,每羊二次。免疫一月后,放牧于有腐蹄病病菌污染的草场上26周,观察结果:两种较大剂量免疫绵羊的保护力优于小剂量。佐剂的种类无差别,但不完全佐剂菌苗注射部位的反应最小。

关键词：绵羊弗氏佐剂节瘤拟杆菌拟杆菌属保护力菌苗疫苗

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中国奶牛 2001年第1期 58-59页

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奶牛腐蹄病诊断与防治

中国兽医杂志 2006年第11期42卷 23-25页

作者：吕占军李林东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

腐蹄病是由严格厌氧性节瘤拟杆菌(Dichelo-bacter nodosus)、坏死杆菌等引起牛、羊、鹿等反刍动物的一种危害严重的疾病,具有一定传染性,是肢蹄病中较严重的疾病,本病重者可使奶牛卧地不起,产生褥疮,至使腿部肌肉和神经受损,肌肉缺血性... 详细信息

腐蹄病是由严格厌氧性节瘤拟杆菌(Dichelo-bacter nodosus)、坏死杆菌等引起牛、羊、鹿等反刍动物的一种危害严重的疾病,具有一定传染性,是肢蹄病中较严重的疾病,本病重者可使奶牛卧地不起,产生褥疮,至使腿部肌肉和神经受损,肌肉缺血性坏死而被淘汰,严重危害了奶牛业的发展,给奶牛业带来了很大的经济损失.

关键词：牛腐蹄病奶牛业防治诊断坏死杆菌节瘤拟杆菌反刍动物卧地不起

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奶牛腐蹄病病原菌的分离鉴定与生物特性研究

奶牛腐蹄病病原菌的分离鉴定与生物特性研究

作者：孙玉国东北农业大学

学位级别：硕士

腐蹄病(Footrot)是引起牛、羊、鹿等反刍动物常见且发病率较高的一种危害严重的传染病，在反刍动物的蹄病中是危害性很大的一类疾病，主要病原菌为坏死梭杆菌(Fusobacterium necrophorum)和节瘤拟杆菌(Baeteroides nodosus)。坏死梭杆... 详细信息

腐蹄病(Footrot)是引起牛、羊、鹿等反刍动物常见且发病率较高的一种危害严重的传染病，在反刍动物的蹄病中是危害性很大的一类疾病，主要病原菌为坏死梭杆菌(Fusobacterium necrophorum)和节瘤拟杆菌(Baeteroides nodosus)。坏死梭杆菌主要以白细胞毒素、内毒素、溶血素、血凝素和各种蛋白酶起致病作用;节瘤拟杆菌主要通过细菌纤毛和蛋白酶起致病作用，其他杂菌在致病中起辅助作用，所以腐蹄病的主要判定依据是检测到病料中是否有节瘤拟杆菌和坏死梭杆菌的存在。本实验通过对黑龙江省部分农场采集的11份奶牛腐蹄病病料进行病原菌分离培养和鉴定，分别从绿色农场奶牛病蹄组织4头份、九三农场奶牛蹄部浓汁3头份病料中分离出致病性坏死梭杆菌，没有观察和分离到节瘤拟杆菌。同时从病料中分离出链球菌、大肠埃希氏杆菌、沙门氏菌、粪弯曲杆菌、化脓棒状杆菌、梭菌、酵母菌和不同的球菌等，其中化脓棒状杆菌和梭菌为腐蹄病辅助因子;链球菌、大肠埃希氏杆菌、不同的球菌等为环境常在菌。通过对腐蹄病病料病原菌的分离培养筛选出适合病原菌分离用的马冻融血、厌氧血琼脂固体培养基;适合病原菌增殖的硫乙醇酸盐和坏死梭杆菌液体培养基，并找到了病原菌最适宜的培养条件干燥器培养方法。同时经生化鉴定和PCR检测试验证实，所采集病料中主要病原菌为坏死梭杆菌，无节瘤拟杆菌。对分离的坏死梭杆菌进行药敏试验结果表明，青霉素类、头孢菌素类、克林霉素对坏死梭杆菌抑制效果最好;红霉素、中药组方I对坏死梭杆菌中度敏感;卡那霉素、庆大霉素、万古霉素等对坏死梭杆菌耐药。在对坏死梭杆菌进行保存条件实验，结果表明坏死梭杆菌在4℃条件下2周内存活完好;在-20℃条件下3个月内存活完好;在-70℃条件下可存活一年以上。在对坏死梭杆菌生长规律测定试验中，表明坏死梭杆菌生长在20～38h之间为对数期，34～38h之后进入稳定期。用分离的坏死梭杆菌进行实验动物致病性试验，可引起实验鼠和兔的发病与死亡，同时坏死梭杆菌在再培养过程中呈β型溶血，表明分离纯化的坏死梭杆菌有致病性。综合以上实验结果分析表明，黑龙江省部分农场奶牛腐蹄病的主要病原菌为坏死梭杆菌，同时伴有大量其他杂菌，而无节瘤拟杆菌。患腐蹄病的动物死亡率虽然低，可它造成的经济损失大。本试验通过对奶牛腐蹄病病原菌的分离鉴定与生物特性研究为科学地指导临床用药，治疗腐蹄病提供了科学依据，为深入开展腐蹄病病原菌的研究提供必要的实验基础。

关键词：腐蹄病节瘤拟杆菌坏死梭杆菌 PCR 分离和鉴定药敏试验

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羊场环境中绵羊腐蹄病病原的检测

中国兽医学报 2018年第4期38卷 662-664,699页

作者：李稳欣薛慧文张学勇王光华马利青甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730070 青海省畜牧兽医科学院青海西宁810016

以近年来国内外最新研究资料为基础，采用PCR方法对采集于绵羊腐蹄病发病地区水样和土样环境中坏死杆菌和节瘤拟杆菌的存在情况进行检测。结果显示：34份样品中有1份水样为坏死杆菌阳性，其余为阴性，节瘤拟杆菌检测全为阴性。将扩增所... 详细信息

以近年来国内外最新研究资料为基础，采用PCR方法对采集于绵羊腐蹄病发病地区水样和土样环境中坏死杆菌和节瘤拟杆菌的存在情况进行检测。结果显示：34份样品中有1份水样为坏死杆菌阳性，其余为阴性，节瘤拟杆菌检测全为阴性。将扩增所得基因KY130428通过BLAST序列比对，发现该基因片段与FJ230831序列同源性为99％，表明样品中存在坏死杆菌。从羊圈周围动物饮水中检测到坏死杆菌的存在，国内尚未见相关报道，本研究旨在摸清羊场环境中腐蹄病病原的分布情况，为该病的防制提供参考依据。

关键词：坏死杆菌节瘤拟杆菌羊场环境水样土样

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疫苗

生物技术通报 1985年第8期 72-78页

853255 由cDNA进行脊髓灰质炎3型病毒株的基因组的分子克隆:R N A杂种方法[英]/Stanway,G.…//***.-1984,81(1—2).-67～78[译自D B A,1984,3(20),84-09595]脊髓灰质炎Ⅲ型病毒的2个神经毒力

关键词：活疫苗 DNA RNA 大肠杆菌质粒大肠埃希氏菌埃希氏杆菌属基因载体拟杆菌属节瘤拟杆菌菌毛素血凝抗原病毒株蠕虫吸虫寄生虫抗原恶性疟原虫抗原决定簇