检索结果-南通市图书馆

作者：匡楠楠华中农业大学

学位级别：硕士

艾地普林(Aditoprim,ADP)是一种新型苄胺嘧啶类抗菌增效剂,具有抗菌谱广、优异的体内药动学特征和低毒安全等优点,应用开发前景良好。本实验室将其作为一类新兽药进行研究,前期已经进行了初步的工艺研究和质量研究,但是艾地普林作为新... 详细信息

艾地普林(Aditoprim,ADP)是一种新型苄胺嘧啶类抗菌增效剂,具有抗菌谱广、优异的体内药动学特征和低毒安全等优点,应用开发前景良好。本实验室将其作为一类新兽药进行研究,前期已经进行了初步的工艺研究和质量研究,但是艾地普林作为新药研发的药学研究还很不完善。本论文按照兽药制备和质量研究指导原则要求,针对以下三个方面对原料药合成工艺及质量进行研究,最终制定原料药的质量标准,从而为制剂研发及临床试验提供安全有效、质量合格的原料药,保证药物的安全、有效和质量可控。1艾地普林合成工艺研究艾地普林合成工艺以对二甲氨基苯甲醛为原料经还原(ADP)、溴化(ADP)、甲氧基化(ADP)、甲基化-还原(ADP)、缩合(ADP)、环合反应(ADP)制备终产品,在先前工艺的基础上,将前两步合并,省去ADP的重结晶,并以甲氧基丙腈进行缩合反应得中间体ADP,最终将工艺缩减为五步。采用紫外、红外、质谱、核磁等四种波谱技术对新中间体ADP及终产物进行化学结构确证,结果显示两者各功能基团及碳氢归属明确、分子量准确。该合成路线可行,操作简便。以单因素试验及正交试验对工艺中原料的投料比、溶剂、催化剂、反应温度及后处理工艺进行微调,并对确定的工艺进行验证试验。通过工艺摸索,可确定ADP的反应温度、ADP与甲醇钠的摩尔比、ADP滤液的p H、ADP的反应温度及纯度为关键工艺参数。五步小试工艺验证的平均收率为82.9～84.0%,74.4～79.3%,85.7～88.1%,79.7～82.6%,83.8～85.5%,其中ADP收率相比于之前研究的30.8%有显著提高,工艺操作更为简便。以经验放大法对艾地普林进行试制,对试验方案进行了微调,并对所得中间体及终产品进行纯度检测。放大合成中,ADP的反应温度维持在60℃;ADP合成中增加非质子化溶剂DMF的量,加入200g原料待反应引发后分四批加入ADP。最终五步反应平均收率为84.8%、76.0%、87.2%、82.3%和84.1%。小试及放大合成中原料、中间体及终产品的纯度分别达到99.0%,96.2%,98.5%,99.5%,99.5%,99.0%以上,熔程均小于2℃。本研究所得艾地普林制备工艺原料易得,操作简便,收率较高,环保可行,适合工业化生产。2艾地普林原料药质量研究根据小试工艺和放大合成终产品的检测结果,初步判定可能存在的有机杂质,对峰面积归一化法含量大于0.1%的有关物质进行液质联用定性分析并制备。建立高效液相色谱法(HPLC-DVD)和气相色谱方法分别用于原料药含量及有关物质的检测和七种溶剂的检测,分别进行方法验证。结果显示:艾地普林原料药共检测到四种有关物质,其中三种含量大于0.1%的有关物质定性为N-脱一甲基艾地普林、艾地普林异构体和中间体ADP,分别命名为IMP-1、2、3。IMP-1已有对照品,IMP-3纯度大于99.5%,可直接用作对照品,以制备硅胶柱从ADP滤液中分离得到IMP-2纯度为99.1%。两种色谱方法验证结果均符合2010版兽药典相关规定。高效液相色谱方法中主峰与相邻色谱峰及杂质峰间分离度均大于1.5,破坏试验中各组分分离良好,色谱峰纯度均大于0.999。ADP的检测限为0.25μg/m L,定量限为0.50μg/m L,在1-100μg/m L浓度范围内线性关系良好,高中低三浓度的平均回收率在98.56%～101.94%,批内相对标准偏差艾地普林含量及有关物质分析方法准确可靠。此外,性状及其他检查项目检测结果表明三批放大产品质量检测结果产品均为淡黄色粉末,无臭,无味,熔点

关键词：艾地普林合成工艺有关物质溶剂残留稳定性

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艾地普林及其代谢物的抗菌活性研究

艾地普林及其代谢物的抗菌活性研究

作者：徐亚妹华中农业大学

学位级别：硕士

艾地普林属于二氨基嘧啶类药物,主要通过抑制二氢叶酸还原酶的活性抑制四氢叶酸的合成,从而影响细菌的叶酸代谢。与同类药物甲氧苄啶相比,艾地普林的半衰期长,表观分布容积大,且低毒、安全,无致突变性,具有良好的应用前景。然而,艾地普... 详细信息

艾地普林属于二氨基嘧啶类药物,主要通过抑制二氢叶酸还原酶的活性抑制四氢叶酸的合成,从而影响细菌的叶酸代谢。与同类药物甲氧苄啶相比,艾地普林的半衰期长,表观分布容积大,且低毒、安全,无致突变性,具有良好的应用前景。然而,艾地普林药效学方面的研究较少,且没有对其代谢物的抗菌活性进行过研究。本课题立足本实验室前期关于艾地普林合成工艺及残留消除等研究成果,测定了艾地普林对多种动物源细菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),并对MIC50、MIC90、MBC50和MBC90进行统计,初步制定了抗菌谱;测定了艾地普林主要代谢物,即N-单脱甲基-ADP(ADP1)、N-双脱甲基-ADP(ADP2)和3’-羟基-ADP(ADP3)对其中两种敏感菌即猪源链球菌和鸡源沙门氏菌的抗菌活性;选取猪源链球菌,进行艾地普林对猪链球菌病的II期临床治疗试验。本研究的完成旨在补充艾地普林药效学相关资料,为该药的进一步推广应用提供理论依据。1艾地普林的体外抗菌活性根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)所制定的抗菌药物敏感性试验执行标准,以甲氧苄啶为对照药,测定了艾地普林对猪、鸡、鱼、牛和羊源常见致病菌的MIC和MBC。由于体内病原菌基本处于缺氧甚至无氧的环境,因此同时测定了有氧条件下和厌氧条件下艾地普林对兼性厌氧菌的抗菌作用,并进行了对比。抑菌效果相关参数表明,艾地普林的抗菌谱与甲氧苄啶相同,对大多数的革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有较好的抑制作用,为广谱型抗菌药物。对艾地普林较敏感的细菌包括猪源沙门氏菌和链球菌,鸡源大肠杆菌和沙门氏菌,牛源大肠杆菌、沙门氏菌、链球菌和巴氏杆菌,羊源的链球菌、曼氏杆菌,鱼源的大肠杆菌、柱状黄杆菌、鲍曼不动杆菌和鲁克氏耶尔森菌;中度敏感菌包括副猪嗜血杆菌,牛源和羊源克雷伯氏菌,鱼源金黄色葡萄球菌、肠型点状气假单胞菌、结核分枝杆菌、无乳链球菌;耐药菌包括猪源大肠杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌,鸡源金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌和-牛源的金黄色葡萄球菌。艾地普林对所测敏感菌和中度敏感菌的MBC/MIC在1-4之间,显示了较好的杀菌活性。在艾地普林的敏感菌和中度敏感菌中,艾地普林与甲氧苄啶对所测大部分病原菌的MIC和MBC相等或相差一个梯度。其中,两者对猪源大肠杆菌、沙门氏菌、链球菌,鱼源柱状黄杆菌的抗菌活性相当;艾地普林对鸡源沙门氏菌,牛源和羊源的曼氏杆菌、链球菌、巴氏杆菌,鱼源的大肠杆菌、鲍曼不动杆菌、鲁克氏耶尔森菌、肠型点状气假单胞菌、金黄色葡萄球菌、结核分枝杆菌和无乳链球菌的活性较甲氧苄啶稍强;对鸡源和牛源大肠杆菌的抗菌活性稍弱。从单个菌株比较,厌氧条件下艾地普林对所测兼性厌氧菌的MIC值和MBC值与有氧条件下相等或相差一个梯度;从每种菌的多株细菌的MIC50、MBC50、MIC90、MBC90的统计结果比较,有氧条件和厌氧条件的这些值均相等,即在有氧条件下和厌氧条件下艾地普林对兼性厌氧菌的抗菌活性无明显的差别,均具有较好的抑菌活性和杀菌活性。因此,该药无明显厌氧选择活性。2艾地普林主要代谢物的体外抗菌活性通过艾地普林的体外抗菌活性研究,选取了 44株猪源链球菌和40株鸡源沙门氏菌,测定艾地普林主要代谢物,即ADP1、ADP2和ADP3对这两种细菌的MIC和MBC。结果表明ADP3对所测定的44株猪源链球菌和40株鸡源沙门氏菌的MIC和MBC均大于128μg/mL,没有抗菌活性。整体来说,ADP1、ADP2和艾地普林三者对所测猪源链球菌和鸡源沙门氏菌的MIC50、MBC50、MBC50/MIC50、MIC90、MBC90和MBC90/MIC90都相等。其中,对猪源链球菌的MICso为2μg/mL,MBC50为 4 μg/mL,MBC50/MIC50 为 2;MIC90 为 32 μg/mL,MBC90 为 64 μg/mL,MBC90/MIC90=2。对鸡源沙门氏菌 MIC50 为 2 μg/mL,MBC50 为 4 μg/mL,MBC50/MIC50等于 2;MIC90为 32 μg/mL,MBC90为 64 μg/mL,MBC90/MIC90等于2。因此,ADP1和ADP2的抗菌活性与艾地普林相当,均具有较强的抑菌活性和杀菌活性。3艾地普林对猪链球菌病的治疗试验将60头体重11-13 kg的断奶仔猪随机分成6组,每组10头。除空白对照组不攻毒也不给药外,其他各组均皮下注射制备好的1010CFU的链球菌CVCC607。猪链球菌疾病模型构建成功后,阴性对照组不给药,药物对照组以30 mg/kgb.w.的剂量肌肉注射复方磺胺嘧钠,其他三个组分别以10mg/kgb.w.、20mg/kgb.w.和40 mg/kg b.w.的剂量肌肉注射艾地普林,并对应命名为低剂量组、中剂量和高剂量组。各治疗

关键词：艾地普林代谢物抗菌活性猪链球菌病临床治疗

艾地普林和艾地普林/磺胺甲噁唑对猪大肠杆菌的PK-PD研究

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艾地普林和艾地普林/磺胺甲噁唑对猪大肠杆菌的PK-PD研究

作者：王芳华中农业大学

学位级别：硕士

猪大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌(Escherichia coli,***)引起的猪消化道疾病,主要引起仔猪腹泻和水肿,具备很强的传染性,能够迅速传染整个猪群,给养殖业带来了巨大的经济损失。艾地普林(Aditoprim,ADP)作为一种新型动物专用氨苄嘧啶类... 详细信息

猪大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌(Escherichia coli,***)引起的猪消化道疾病,主要引起仔猪腹泻和水肿,具备很强的传染性,能够迅速传染整个猪群,给养殖业带来了巨大的经济损失。艾地普林(Aditoprim,ADP)作为一种新型动物专用氨苄嘧啶类抗菌药,对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有较强的抑菌作用,和磺胺类药物联用可以大幅度增强磺胺类的抗菌效果,减少细菌耐药情况的发生。本课题主要研究艾地普林和艾地普林/磺胺甲噁唑对猪大肠杆菌的抗菌作用,通过半体内药动学-药效学(Pharmacokinetics-pharmacodynamics,PK-PD)同步模型预测并制订ADP/SMZ注射剂的合理用药方案,为指导ADP/SMZ注射剂的临床合理应用提供理论依据,为ADP/SMZ注射剂的申报提供试验数据。1艾地普林和艾地普林/磺胺甲噁唑对猪大肠杆菌的体外药效学研究根据CLSI推荐的标准采用微量肉汤法测定ADP、SMZ和ADP/SMZ对185株猪大肠杆菌的最小抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration,MIC),选择MIC的大肠杆菌,进行小鼠毒力试验,筛选出致病力强的大肠杆菌SHC28,测定其MIC和MBC(Minimum bactericidal concentration),采用琼脂平板法测定了ADP、SMZ和ADP/SMZ对大肠杆菌SHC28的防突变浓度(Minimum prevention concentration,MPC),并测定出大肠杆菌重建后的生长趋势(Post-antibiotic effect,PAE),测定并绘制ADP/SMZ在MH肉汤和猪回肠内容物中对猪大肠杆菌SHC28的体外和半体内杀菌曲线。ADP、SMZ和ADP/SMZ(1/5)对185株大肠杆菌的MIC分别为4、256、0.5/2.5μg/mL,MIC分别为>256、>512、4/20μg/mL。ADP,SMZ和ADP/SMZ对大肠杆菌SHC28的MIC分别为8、128、0.5/2.5μg/mL,MBC分别为64,512,2/10μg/mL。ADP/SMZ防突变浓度(MPC)为3.8/19μg/mL。所以ADP/SMZ的耐药选择突变窗(Mutant Selection Window,MSW)范围为0.5/2.5μg/mL～3.8/19μg/mL。大肠杆菌暴露于ADP,SMZ和ADP/SMZ中1 h～2 h后PAE范围分别为0.14 h～0.96 h,0 h～0.56 h,0.13 h～1.55 h。ADP/SMZ对大肠杆菌SHC28的体外和半体内杀菌曲线结果均显示出浓度依赖性抗菌作用。2艾地普林和磺胺甲噁唑在猪回肠内容物中的药动学研究选择体重为25 kg左右的健康杜长大断奶仔猪24头,随机分为4组,每组6头。通过外科手术将回肠瘘管安装到仔猪回肠内。健康组猪按照ADP(5 mg/kg b.w.)、SMZ(25 mg/kg b.w.)和ADP/SMZ(5/25 mg/kg b.w.)单次肌肉注射给药,患病组猪按照ADP/SMZ(5/25 mg/kg b.w.)单次肌肉注射给药,并在给药后的0、0.5、1、2、3、4、6、8、12、24、36、48 h利用回肠瘘管收集仔猪回肠液,用高效液相色谱方法(HPLC)测定回肠液中游离的艾地普林和磺胺甲噁唑浓度。药动学结果表明,肌肉注射给药后,ADP和SMZ能够在猪回肠内容物中快速聚集并达到较高的药物浓度,且患病组回肠内容物中的药物浓度要高于健康组。利用非房室模型拟合出健康组ADP和SMZ的C分别为1.67±0.26μg/mL和20±2.42μg/mL,AUC分别为20.43±0.93 h·μg/mL和94.63±17.30 h·μg/mL。ADP/SMZ在健康猪中的ADP和SMZ的C分别为1.76±0.27μg/mL和19.15±2.63μg/mL,AUC分别为18.32±3.06 h·μg/mL和125.51±11.82h·μg/mL;在患病猪中的ADP和SMZ的C分别为1.88±0.13μg/mL和19.71±3.68μg/mL,AUC分别为14.68±0.66 h·μg/mL和131.82±17.20h·μg/mL。3半体内PK-PD模型拟合和给药方案的制定采用Sigmoid E方程对获取的猪半体内AUC/MIC参数和离体杀菌作用之间进行模拟,得出ADP/SMZ对猪大肠杆菌起到的抑菌、杀菌和根除作用时的AUC/MIC折点值。再根据剂量公式和蒙特卡罗得出用于预防、治疗、以及根除猪大肠杆菌病的ADP/SMZ的日间给药剂量。并通过Mlx Plore软件拟测出大肠杆菌在ADP/SMZ不同给药剂量下的生长状态趋势。据E方程进行PK-PD数据拟合,最终得出患病猪体内复方药物中SMZ的E方

关键词：艾地普林艾地普林/磺胺甲噁唑猪大肠杆菌药动学-药效学(PK-PD)模型剂量方案

艾地普林-磺胺甲噁唑复方注射液对副猪嗜血杆菌的PK-PD同步模型研究

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艾地普林-磺胺甲噁唑复方注射液对副猪嗜血杆菌的PK-PD同步模型研...

作者：黄啸华中农业大学

学位级别：硕士

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)是一种猪上呼吸道条件致病菌,感染后以浆液性纤维素性胸膜炎、关节炎和脑膜炎为特征。该病的爆发给养猪业带来巨大的经济损失,并且近些年副猪嗜血杆菌对许多抗菌药产生多重耐药性,因此寻找一种安全... 详细信息

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)是一种猪上呼吸道条件致病菌,感染后以浆液性纤维素性胸膜炎、关节炎和脑膜炎为特征。该病的爆发给养猪业带来巨大的经济损失,并且近些年副猪嗜血杆菌对许多抗菌药产生多重耐药性,因此寻找一种安全有效的抗菌药治疗副猪嗜血杆菌病很有必要。艾地普林(Aditoprim,ADP)是一种新型的动物专用抗菌增效剂,其不仅生物利用度高且在体内分布广泛。前期药效学研究显示其对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有作用,与其同类药物甲氧苄啶(Trimethoprim,TMP)相比,ADP抗菌能力远远强于TMP。磺胺甲噁唑(Sulfamethoxazole,SMZ)属于全身应用的中效磺胺类药,是临床上广泛应用的广谱抗生素,常用于水产类及畜禽类动物疾病的治疗。SMZ在体内吸收迅速,很快在血浆和肺组织中达到较高浓度。但在近些年来研究中,磺胺类药物对一些呼吸道和消化道病原菌耐药率逐年增加。研究发现两药联合使用,其抗菌能力远远强于单独使用,两者联用在减少单药用量的同时降低了耐药率,具有很好的发展前景。本课题通过ADP和SMZ单方以及ADP-SMZ复方的药效学研究,发现单方的抗菌效果显著低于复方的抗菌效果。因此建立ADP-SMZ复方注射液对副猪嗜血杆菌感染的药动学-药效学(Pharmacokinetic-Pharmacodynamic modeling,PK-PD)同步关系,并以此确定了ADP-SMZ复方注射剂临床合理的给药方案。1 艾地普林、磺胺甲噁唑及艾地普林-磺胺甲噁唑复方的药效学研究参考美国临床实验室标准化协会CLSI推荐的琼脂稀释法测定了ADP、SMZ以及ADP-SMZ复方对104株菌的最小抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration,MIC),得到ADP、SMZ以及ADP-SMZ复方对副猪嗜血杆菌的MIC分别为128μg/m L,>512μg/m L和32/640μg/m L。选择较敏感的13株进行肠杆菌基因间重复序列PCR(ERIC-PCR)分型试验,筛选出5型菌株,并且同时进行小鼠毒力试验,首先选用16 g～20 g健康Balb/c小鼠120只,进行分组每组3只,腹腔注射0.3 m L 1×10CFU、1×10CFU、1×10CFU菌液,观察小鼠病变情况及死亡情况,筛选出致病性最强的菌株,最终选择毒性最强且血清5型菌株H78来进行接下来的PK-PD实验。参考CLSI推荐的微量肉汤稀释法,测定ADP、SMZ及ADP-SMZ复方对致病性副猪嗜血杆菌H78在肉汤和肺泡灌洗液(Pulmonary Epithelial Lining Fuid,PELF)中MIC和最小杀菌浓度(Minimal Bactericidal Concentration,MBC)结果显示ADP在肉汤和肺泡灌洗液中的MIC分别为4μg/m L和2μg/m L,MBC分别为8μg/m L和4μg/m L;SMZ在肉汤中的MIC为512μg/m L和,MBC为1024μg/m L;ADP-SMZ复方在肉汤和肺泡灌洗液中的MIC分别为2/10μg/m L和0.5/2.5μg/m L,MBC分别为4/20μg/m L和1/5μg/m L,可以看出ADP及ADP-SMZ复方在肺泡灌洗液中的抗菌活性高于在肉汤中的抗菌活性,这可能是肺泡灌洗液中含有某种抗体或者抑菌因子或其它能增强ADP及ADP-SMZ抗菌活性的成分;通过平板涂布法分别测定ADP和ADP-SMZ复方对H78的最小防耐药突变浓度(Mutant Prevention Concentration,MPC)为20μg/m L和6.4/32μg/m L;将H78暴露在不同浓度的ADP和ADP-SMZ复方1 h和2 h后,测定H78与ADP孵育1 h和2 h的抗菌后效应(Post-antibiotic effect,PAE),分别为0.02 h～0.20 h和0.40 h～0.48 h;测定副猪嗜血杆菌与ADP-SMZ复方孵育1 h和2 h的PAE,分别为0.27 h～0.63 h和0.46 h～1.11 h。然后根据MIC测定结果,设置不同浓度的ADP和ADP-SMZ复方药物分别与H78孵育,在不同时间点各取0.1 m L,并且通过一系列稀释进行细菌的涂板计数,绘制ADP和ADP-SMZ复方对H78的体外杀菌曲线,通过体外药效学数据看到,ADP单方在临床上治疗效果不理想,在后期的药动学研究中ADP单方仅仅作为对照。最后根据ADP-SMZ复方注射剂给药后不同时间点肺泡灌洗液中的药物浓度,在空白的肺泡灌洗液中添加相应浓度的药物,与H78孵育,绘制半体内的杀菌曲线。其半体内杀菌曲线与体外的杀菌曲线均随着时间的增加,杀菌作用明显增强,与浓度关系不大,表现出明显的时间依赖性,最终

关键词：艾地普林磺胺甲噁唑注射液副猪嗜血杆菌 PK-PD模型给药方案

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艾地普林临床前毒理学研究

艾地普林临床前毒理学研究

作者：谈自强华中农业大学

学位级别：硕士

二氨基嘧啶类药物是一类本身有抗菌活性且具有抗菌增效作用的药物,常见的有甲氧苄啶、二甲氧苄啶、巴喹普林和奥美普林等。艾地普林(Aditoprim, ADP)是本类的新药,在国内由本实验室率先开展系统研究。本课题立足实验室前期研究成果,通... 详细信息

二氨基嘧啶类药物是一类本身有抗菌活性且具有抗菌增效作用的药物,常见的有甲氧苄啶、二甲氧苄啶、巴喹普林和奥美普林等。艾地普林(Aditoprim, ADP)是本类的新药,在国内由本实验室率先开展系统研究。本课题立足实验室前期研究成果,通过系统的毒理学试验研究,对艾地普林的安全性进行评价,为后期的临床研究提供参考资料。1急性毒性试验选用SPF级Wistar大鼠和昆明小鼠雌雄若干,采用上下法(UDP)进行试验。经口灌喂艾地普林混悬液染毒,短期观察决定上下剂量顺序,存活动物观察14天,记录中毒反应及死亡情况,最终利用AOT 425软件计算结果。试验得出Wistar大鼠口服艾地普林的半数致死量(LD5o)为1400 mg/kg b.w.,95%可信限为954.9到1750mg/kg b.w.;在昆明小鼠的LD50为1130 mg/kg b.w.,95%可信限为859.2到1900 mg/kgb.w.。艾地普林急性毒性分级为低毒。2遗传毒性试验细菌回复突变试验试验选用鼠伤寒沙门氏菌株分别为TA97a, TA98,TA100,TA102和TA1535,艾地普林剂量分别为1.0、0.5、0.25、0.125和0.0625μg/皿,同时设阳性对照组和阴性对照组。在加和不加S9代谢活化系统条件下检测受试物的致突变性。试验采用平皿掺入法,计数各皿回变菌落数,计算各剂量组与阴性对照组回变菌落数比值。结果显示,不论加与不加S9代谢活化系统,艾地普林在0.0625-1.0μg/皿的剂量范围内,各菌株回变菌落数与阴性对照组的比值均小于2,结果为阴性。说明艾地普林在本试验条件下不具有致突变性。小鼠骨髓细胞微核试验选用7-8周龄SPF级昆明小鼠随机分组,每组雌雄各5只,艾地普林剂量分别为141.5、282.5和565 mg/kg b.w.,同时设置阴性对照组和阳性对照组。经口染毒2次(阳性对照组一次腹腔注射),间隔24 h,第二次给药6h后,小鼠脱颈椎处死,采股骨骨髓样制片。每只动物计嗜多染红细胞(PCE)1000个计算含微核的嗜多染红细胞(MNPCE)数。在计数PCE时,计数见到的正染红细胞(NCE),求出PCE/NCE的比值。结果显示,与阴性对照组相比,艾地普林各剂量组微核发生率没有显著上升(p>0.05)。说明艾地普林在体内微核试验结果中为阴性,不具体内致突变能力。体外哺乳动物细胞染色体畸变试验以中国仓鼠肺成纤维细胞(V79)为研究对象,艾地普林剂量分别为300、150、75和37.5μg/mL,并设阴性对照组和阳性对照组。试验分别在加和不加S9代谢活化系统条件下进行,不加S9时,受试物分别作用6h和18 h;加S9时,受试物作用6 h,培养至24 h制片。每一剂量组计数200个中期分裂相细胞,计算细胞染色体畸变率。试验结果显示,艾地普林各剂量组在加与不加S9时,细胞畸变率与阴性对照组没有显著差异(p>0.05),且均小于5%,结果判定为阴性。表明艾地普林在本试验条件下不会引起V79细胞的染色体畸变。体外哺乳动物细胞基因突变试验以中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)为研究对象,在加与不加S9代谢活化系统条件下,观察艾地普林对CHO-K1细胞的致突变作用。艾地普林的浓度分别为300、150、75和37.5 μg/mL,同时设阴性对照组和阳性对照组。经处理6h后,采用克隆形成法观察艾地普林对CHO-K1细胞的毒性作用,并在此基础上观察其对CHO-K1细胞hgprt基因位点突变频率的影响。结果显示,不论加与不加S9代谢活化系统,艾地普林在37.5-300 μg/mL的剂量范围内,对CHO-K1细胞hgprt基因的突变率与阴性对照组相比差异不显著(p>0.05)。说明,在本试验条件下,艾地普林对CHO-K1细胞无诱变作用。小鼠睾丸染色体畸变试验选用体重30 g左右SPF级昆明小鼠随机分组,艾地普林剂量分别为141.5、282.5和565 mg/kg b.w.,同时设置阴性对照组和阳性对照组,保证采样时每组至少5只存活。经口染毒(阳性对照组腹腔注射),每天一次,连续5天,第12天处死小鼠。处死前6h注射秋水仙素,采睾丸制备染色体片,每只动物分析100个中期分裂相细胞,计算细胞染色体畸变率。试验结果显示,与阴性对照组相比,艾地普林各剂量组细胞染色体畸变率没有显著差异(p>0.05),说明艾地普林不具有体内的致生殖细胞染色体畸变效应。390天喂养试验选用5-6周龄SPF级Wistar大鼠作为试验动物,通过混饲方式染毒13周,最高剂量组有2周恢复期,剂量设置分别为艾地普林(ADP)0、20、100和1000 mg/kg饲料。空白对照组和艾地普林1000 mg/kg饲料组每组雌雄各20只;艾地普林20和100 mg/kg饲料组每组雌雄各15只,饲养条件符合国际动物福利规定。

关键词：艾地普林急性毒性遗传毒性亚慢性毒性繁殖和致畸毒性最大未观察到有害作用剂量

新型抗生素艾地普林对人体肠道菌群微生物毒理学的研究

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新型抗生素艾地普林对人体肠道菌群微生物毒理学的研究

同时检测猪可食性组织中磺胺甲恶唑、乙酰磺胺甲恶唑和艾地普林的UPLC-MS/MS方法的建立

中国毒理学会第十次全国毒理学大会

作者：王俊豪刘春贝张志浩李洁田玉谷宇锋郝海红华中农业大学国家兽药残留基准实验室

目的艾地普林是一种新型二氢叶酸还原酶抑制剂,具有抗菌谱广、毒性低、安全性高、药代动力学优良等特点。艾地普林作为一种新开发的药物,在临床应用中具有巨大的潜力和研究价值,有关其毒理学,药理学已在先前的研究中进行了评估。然而对... 详细信息

目的艾地普林是一种新型二氢叶酸还原酶抑制剂,具有抗菌谱广、毒性低、安全性高、药代动力学优良等特点。艾地普林作为一种新开发的药物,在临床应用中具有巨大的潜力和研究价值,有关其毒理学,药理学已在先前的研究中进行了评估。然而对其微生物学安全性评价的相关研究仍较匮乏,对人体肠道菌群定植屏障和抗生素耐药性发展的影响在很大程度上是未知的。因此本研究的目的在于评估艾地普林对人体肠道菌群的微生物安全性。材料和方法本研究通过将低中高三种浓度的艾地普林添加到含有人体肠道菌群的恒化器模型中。在给药前后利用气相色谱法监测肠道菌群代谢产物七种短链脂肪酸的含量变化、利用涂板计数法监测五种肠道优势微生物的数量变化以及优势菌群对艾地普林耐药率的变化。通过连续三天接种鼠伤寒沙门氏菌来判断肠道微生物群的定植屏障是否被破坏。在此基础上通过16S测序技术分析给药前后模型中肠道菌群物种水平的丰度变化。结果我们的结果表明,低剂量的艾地普林对人体肠道菌群的定植屏障功能没有显著影响。然而,在长期暴露于较高水平的艾地普林后,会显著破坏肠道菌群的定植屏障功能并增加耐药菌的比例。16S测序的结果也表明,较高水平的艾地普林会导致肠道菌群结构发生显著的变化,尤其是对脆弱拟杆菌和均匀拟杆菌。我们的研究通过模拟人体肠道微生物群环境,首次在体外评估了艾地普林的微生物安全性,并根据兽医注册国际协调会的相关文件计算出了艾地普林的每日允许摄入量。结论本研究评估了艾地普林对人体肠道微生物群的微生物安全性。先前研究的艾地普林毒理学每日允许摄入量(1.44μg/***/day)远低于我们的结果。因此,需要更多的药理学研究和微生物安全性评估工作来确定艾地普林的最终每日允许摄入量,我们的研究为艾地普林在兽医临床实践中的应用奠定了坚实的基础。

关键词：艾地普林恒化器肠道微生物群微生物学安全性定植屏障

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同时检测猪可食性组织中磺胺甲恶唑、乙酰磺胺甲恶唑和艾地普林的...

新型抗生素艾地普林对人体肠道菌群微生物毒理学评价

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：王玉可陶燕飞王旭黄玲利袁宗辉谢书宇潘源虎华中农业大学国家兽药残留基准实验室(HZAU) 农业部食品安全评价重点开放实验室

[目的]本研究旨在建立同时检测猪可食性组织中磺胺甲恶唑、乙酰磺胺甲恶唑和艾地普林残留的UPLC-MS/MS检测方法。[方法]用2%的氨化乙腈提取样品中的目标化合物,重复提取,合并上清,于40℃水浴下氮气吹干,1mL流动相复溶,过滤膜,超高效液... 详细信息

[目的]本研究旨在建立同时检测猪可食性组织中磺胺甲恶唑、乙酰磺胺甲恶唑和艾地普林残留的UPLC-MS/MS检测方法。[方法]用2%的氨化乙腈提取样品中的目标化合物,重复提取,合并上清,于40℃水浴下氮气吹干,1mL流动相复溶,过滤膜,超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)进行分析。0.1%甲酸-乙腈为流动相,梯度洗脱,电喷雾电离,正离子-多反应监测扫描模式。[结果]在猪肌肉、肝脏、肾脏组织中,磺胺甲恶唑、乙酰磺胺甲恶唑及艾地普林在20～2000μg/kg范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999。方法的检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别为1μg/kg和5μg/kg。在猪肌肉中,磺胺甲恶唑和乙酰磺胺甲恶唑在20、100、200μg/kg添加浓度下,平均回收率在92.3-105.3%范围内,日内变异系数小于5.2%,日间变异系数小于7.3%,艾地普林在20、50、100μg/kg添加浓度下,平均回收率在90.32-95.63%范围内,日内变异系数小于6.4%,日间变异系数小于8.3%;在猪肝脏中,磺胺甲恶唑和乙酰磺胺甲恶唑在20、100、200μg/kg添加浓度下,平均回收率在85.3%-93.6%范围内,日内变异系数小于4.8%,日间变异系数小于8.6%,艾地普林在20、50、100μg/kg添加浓度下,平均回收率在90.4%-98.6%范围内,日内变异系数小于3.6%,日间变异系数小于7.9%;在猪肾脏中,磺胺甲恶唑和乙酰磺胺甲恶唑在20、100、200μg/kg添加浓度下,平均回收率为91.2%-101.3%范围内,日内变异系数小于3.8%,日间变异系数小于6.4%,艾地普林在20、50、100μg/kg添加浓度下,平均回收率在86.5%-106.4%范围内,日间变异系数小于4.3%,日内变异系数小于5.6%[结论]本研究建立的猪肌肉、肝脏、肾脏组织中同时检测磺胺甲恶唑、乙酰磺胺甲恶唑和艾地普林的UPLC-MS/MS方法在特异性、准确度、精密度、可重复性方面均满足猪组织中残留检测的要求。

关键词：磺胺甲恶唑乙酰磺胺甲恶唑艾地普林猪可食性组织 UPLC-MS/MS

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新型抗生素艾地普林对人体肠道菌群微生物毒理学评价

艾地普林单方和复方注射液在猪的残留消除和靶动物安全性试验

中国毒理学会第九次全国青年科技大会暨第二届生物技术药物毒理与安全评价委员会学术会议

作者：王俊豪刘春贝田玉黄安雄谷宇锋郝海红华中农业大学国家兽药残留基准实验室

目的艾地普林是一种新型二氢叶酸还原酶抑制剂,具有抗菌谱广、毒性低、安全性高、药代动力学优良等特点。艾地普林作为一种新开发的药物,在临床应用中具有巨大的潜力和研究价值,有关其毒理学,药理学已在先前的研究中进行了评估。然而对其微生物学安全性评价的相关研究仍较匮乏,对人体肠道菌群定植屏障和抗生素耐药性发展的影响是未知的。因此本研究的目的在于评估艾地普林对人体肠道菌群的微生物安全性。材料和方法本研究将艾地普林(0、1、16和128μg/mL)加入到含有人类肠道微生物群的模型中。用药前后每天测量三个微生物终点,包括七种短链脂肪酸、五种优势微生物及其对艾地普林的耐药率。通过连续三天接种鼠伤寒沙门氏菌来判断肠道微生物群的定植屏障是否被破坏。通过16S测序分析给药前后模型中肠道菌群物种水平的丰度变化。结果结果表明,低剂量艾地普林(1μg/mL)对人类肠道菌群的定植屏障和耐药率没有影响。然而,长期暴露于较高水平的艾地普林后(16和128μg/mL)会显著破坏肠道菌群的定植屏障功能并增加耐药菌的比例。16S测序的结果也表明,较高水平的艾地普林会导致肠道菌群结构发生显著的变化,尤其是对脆弱拟杆菌(Bacteroidesfragilis)和均匀拟杆菌(Bacteroides uniformis)。结论本研究通过模拟人类肠道微生物群环境,首次在体外评估了艾地普林的微生物学安全性。研究结果显示,1μg/mL是无明显不良反应的浓度,微生物可接受日摄入量为91.67μg/***/day。我们的研究为艾地普林在临床实践中的应用奠定了坚实的基础。

关键词：艾地普林恒化器肠道微生物群微生物学安全性定植屏障

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艾地普林单方和复方注射液在猪的残留消除和靶动物安全性试验

作者：王玉可华中农业大学

学位级别：硕士

艾地普林是一类新型动物专用氨苄嘧啶类抗菌药,具有半衰期长、生物利用度高和表观分布容积大等特点,在多种动物体内的药动学数据表明其性质明显优于甲氧苄啶。该药可与磺胺类药物联用,从双重机制阻断细菌体内叶酸合成、抑制其生长繁殖,... 详细信息

艾地普林是一类新型动物专用氨苄嘧啶类抗菌药,具有半衰期长、生物利用度高和表观分布容积大等特点,在多种动物体内的药动学数据表明其性质明显优于甲氧苄啶。该药可与磺胺类药物联用,从双重机制阻断细菌体内叶酸合成、抑制其生长繁殖,从而发挥优良的抗菌效果。但艾地普林的毒理学研究证明其具有一定的肝脏毒性,因此动物用药后在其体内的残留监控尤为重要。兽药残留检测对于可食性动物产品安全性的评价不可或缺,艾地普林和艾地普林/磺胺甲噁唑注射液在猪的残留消除、安全性还未做相关研究。为了该药物能更加安全有效的应用于临床,本研究开展了艾地普林和艾地普林/磺胺甲噁唑注射液在猪的残留消除试验,阐明艾地普林(ADP)、磺胺甲噁唑(SMZ)及乙酰磺胺甲噁唑(Ac SMZ)在猪可食性组织中的残留消除规律,确定其在猪的残留标识物、残留靶组织和休药期;同时还进行了艾地普林及艾地普林/磺胺甲噁唑注射液在猪的安全性试验,通过临床观察、生长性能、血液生理生化、脏器系数、病理组织变化等指标来评价该药在猪的安全性。研究内容和结果如下:1艾地普林、磺胺甲噁唑和乙酰磺胺甲噁唑超高效液相色谱串联质谱残留检测方法的建立本试验建立了艾地普林、磺胺甲噁唑和乙酰磺胺甲噁唑在肝脏、肾脏、肌肉和脂肪4种组织中的超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)检测方法。样品经2%氨化乙腈提取,0.1%甲酸水和乙腈(95:5,V/V)混合试剂复溶,UPLC-MS/MS检测。具体液相条件如下,色谱柱:BEH C18(2.1×50 mm,1.7μm)进样量:5μL;流速:0.2 m L/min;柱温30℃,以0.1%甲酸水和乙腈(0-3 min,5%乙腈;3-3.1min,5%-30%乙腈;3.1-5 min,30%-5%乙腈)为流动相进行梯度洗脱,电喷雾正离子模式(ESI+)电离,多反应监测模式(MRM)检测,外标法定量。该方法下艾地普林、磺胺甲噁唑和乙酰磺胺甲噁唑在20μg/kg-1000μg/kg浓度范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999。方法的检测限和定量限分别为10μg/kg和20μg/kg。在3个添加浓度下,艾地普林、磺胺甲噁唑和乙酰磺胺甲噁唑在肝脏、肾脏、肌肉和脂肪中的回收率均分别在83.7%-89.9%、84.3%-91.4%和82.8%-90.3%之间,日内变异系数分别在3.1%-6.0%、2.8%-6.8%和3.9%-6.2%之间,日间变异系数分别在4.8%-10.1%、4.2%-11.3%和5.1%-9.4%之间。该方法满足猪可食性组织中艾地普林、磺胺甲噁唑和乙酰磺胺甲噁唑的残留检测。2艾地普林单方和复方注射液在猪的残留消除研究健康三元杂交商品猪45头,随机分成9组(艾地普林单方注射液试验组4组,艾地普林复方注射液试验组4组,空白对照1组)。艾地普林单方和复方注射液给药剂量分别为10 mg/kg b.w.和25 mg/kg b.w.,每天2次,连续7 d。分别于停药后12 h、3 d、7 d、14 d和28 d宰杀动物,采集肝脏、肾脏、肌肉和脂肪,样品前处理,UPLC-MS/MS检测,结果如下:艾地普林注射液给药后,停药后12 h,在肾脏中浓度最高为29283.5μg/kg,脂肪中浓度最低为2525.7μg/kg;停药14 d后,肝脏和肾脏中ADP的浓度分别为90.4μg/kg和77.7μg/kg;停药28 d后,检测不到药物。ADP在肝脏中滞留时间最长,半衰期为3.01 d。确定艾地普林注射液在猪的残留靶器官为肝脏,残留标识物为艾地普林。采用WT1.4软件进行拟合,建议艾地普林注射液在猪的休药期为23 d。艾地普林/磺胺甲噁唑注射液给药后,停药后12 h,ADP、SMZ和AcSMZ在肾脏中浓度最高,分别为27725.9μg/kg、4440.0μg/kg和12806.2μg/kg;停药后7 d,肾脏中Ac SMZ的浓度为45.4μg/kg;停药后14 d,肝脏中ADP和SMZ的浓度为85.6μg/kg和19.6μg/kg,肾脏中ADP和SMZ的浓度分别为55.9μg/kg和50.7μg/kg,肌肉中SMZ的浓度为29.3μg/kg;停药后28 d,检测不到药物存在。确定艾地普林/磺胺甲噁唑注射液在猪的残留标识物和残留靶组织分别为艾地普林和肝脏。结果表明,艾地普林复方注射液在猪的残留靶组织为肝脏,残留标识物为艾地普林。采用WT1.4软件进行拟合,建议艾地普林/磺胺甲噁唑注射液在猪的休药期为20 d3艾地普林和复方注射液在猪的靶动物安全性根据《VICH兽药靶动物安全性研究指导原则》设计以下试验。将56头健康三元杂交商品猪分为艾地普林注射液1倍最高推荐剂量组(10 mg/kg b.w.)、3倍最高推荐剂量组(30 mg/kg b.w.)、5倍最高推荐剂量组(50 mg/kg b.w.)

关键词：艾地普林磺胺甲噁唑注射液残留消除安全性

艾地普林单方和复方注射液中试生产及质量研究

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艾地普林单方和复方注射液中试生产及质量研究

作者：黎欣华中农业大学

学位级别：硕士

艾地普林(Aditoprim,ADP)作为一种新型的苄胺嘧啶类抗菌增效剂,与同类兽药相比安全性更高、抗菌效果更好,其特点具有半衰期长、生物利用度高等,目前国内外都没有上市。本课题在艾地普林原料药完成中试生产及前期开展的单复方注射液研究... 详细信息

艾地普林(Aditoprim,ADP)作为一种新型的苄胺嘧啶类抗菌增效剂,与同类兽药相比安全性更高、抗菌效果更好,其特点具有半衰期长、生物利用度高等,目前国内外都没有上市。本课题在艾地普林原料药完成中试生产及前期开展的单复方注射液研究的基础上,按照《兽药研究技术指导原则(化药、天然药物)》开展艾地普林注射液和艾地普林-磺胺甲噁唑(Sulfamethoxazole,SMZ)注射液的中试生产、产品质量研究及稳定性研究。为艾地普林单方和复方注射液一类新兽药的申报提供数据支持,为临床应用提供安全、稳定、有效的合格产品。根据药物的溶解特性,通过单因素试验优化确定注射液的组方。ADP注射液中ADP的含量为5%;辅料选用1,2-丙二醇作为助溶剂用量为30%;10%HCl为助溶剂用量为2.5%;亚硫酸氢钠为抗氧化剂用量为0.1%;尼泊金乙酯作为防腐剂用量为0.18%;注射用水作为溶剂定容至规定体积。ADP-SMZ注射液中ADP的含量为2%,SMZ的含量为10%;辅料选用1,2-丙二醇作为助溶剂用量为50%;三乙醇胺作为溶解SMZ的助溶剂用量为9%;乳酸作为ADP的助溶剂用量为2%;泊洛沙姆作为表面活性剂用量为5%;硫代硫酸钠作为抗氧化剂其用量为0.1%;尼泊金乙酯作为防腐剂用量为0.18%;注射用水作为溶剂定容至规定体积。在实验室制备工艺的基础上,对注射液的制备工艺进行优化,以注射液性状、p H、稳定性、药物含量及有关物质的量来确定各关键步骤的工艺参数。确定配液温度为40℃、搅拌时间为30 min;过滤采用0.22μm的滤膜;灭菌条件为121℃灭菌30 min。对确定的工艺进行逐步放大验证,以保证此处方工艺的安全稳定。实验室工艺验证从100 m L放大到500m L然后放大到5 L,对每批次产品按照质量检测项目进行检查,合格后进行中试生产。于2019年2月底在河南后羿实业集团有限公司,符合GMP标准的制剂车间进行ADP注射液和ADP-SMZ注射液的中试生产。ADP注射液30 L/批共三批,规格为10 m L/支,得到批号20190225的注射液2827支、批号20190226的注射液2883支和批号20190227的注射液2835支。各批次收率分别为94.23%、96.10%、94.50%。ADP-SMZ注射液150 L/批,规格为10 m L/支,得到批号20190228的注射液14165支、批号20190301的注射液14202支、批号20190302的注射液14131支。各批次收率分别为94.43%、94.68%、94.21%。制剂的质量研究是制剂组方筛选和工艺优化的重要科学基础,通过对组方和工艺优化后的结果,能为质量标准的建立提供数据支持和参考依据。本课题建立了艾地普林、磺胺甲噁唑及其有关物质的HPLC检测方法。此方法具有较高的灵敏度、较强的专属性,能适用于艾地普林、磺胺甲噁唑及其有关物质IMP-1、4-对氨基苯磺酸(Sulfanilic acid,SA)的分析检测。使用Agilent Eclipse XDB-Phenyl液相柱,柱温为30℃;紫外检测波长为283 nm,流动相为三乙胺:乙腈:水(1:150:849),使用磷酸调节溶液p H至6.50,采用等度洗脱法,流速为1.0 m L/min。在此色谱条件下,有关物质IMP-1和对氨基苯磺酸均能与主峰艾地普林和磺胺甲噁唑得到良好分离,且相邻峰之间的分离度超过1.5。按照ADP注射液和ADP-SMZ注射液的质量标准对三批中试产品进行有关项目考察。ADP注射液为淡黄色澄清透明液体,p H约为5.88,ADP药物含量为102.56%,有关物质含量为0.12%,按照制剂通则各项检测均合格,无溶血性及刺激性。ADP-SMZ注射液为浅黄色澄清透明液体,p H约为7.51,ADP和SMZ的药物含量分为101.56%和103.56%,有关物质含量为0.11%,按照制剂通则各项检测均合格,无溶血性,无刺激性。根据《兽药稳定性研究指导原则》对ADP注射液和ADP-SMZ注射液的中试产品进行1个批次的影响因素试验和3批次的加速试验和长期试验研究。其中包材稳定性试验与加速试验和长期实验一同进行。观察了注射液的外观性状,测定了p H、药物含量、有关物质含量等。结果表明在高温下,中试产品ADP注射液颜色略微加深,有关物质含量增加0.25%,需常温放置;在强光照射、低温冻融循环条件下稳定;6个月加速试验药物含量降低3.51%、有关物质含量增加0.21%、p H升高0.53;18个月长期试验结果表明,其各项质量指标符合标准。中试产品ADP-SMZ注射液在高温下颜色略微加深,有关物质含量增加0.28%,需常温放置;强光照射、低温冻融循环条件下稳定;6个月加速试验药物总含量降低2.88%,有关物质含量增加0.25%,

关键词：艾地普林磺胺甲噁唑注射剂中试质量标准稳定性研究