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中国组织工程研究与临床康复 2008年第50期12卷 9929-9933页

作者：赵俊英北京协和医学院基础学院中国医学科学院基础医学研究所生物化学与分子生物学系北京市100005

背景:2003年研究发现一个全新的III型干扰素家族,即IFN-λs,包括λ1,2,3三种亚型。目的:对在毕赤酵母中高效表达重组人干扰素-λ1(rhIFN-λ1)进行产率纯度分析,理化性质、受体表达鉴定以及抗肿瘤活性初步探讨。设计、时间及地点:单一样... 详细信息

背景:2003年研究发现一个全新的III型干扰素家族,即IFN-λs,包括λ1,2,3三种亚型。目的:对在毕赤酵母中高效表达重组人干扰素-λ1(rhIFN-λ1)进行产率纯度分析,理化性质、受体表达鉴定以及抗肿瘤活性初步探讨。设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-09/2008-07在中国医学科学院基础所生物化学与分子生物学系完成。材料:含rhIFNλ1表达质粒的酵母菌种pAO815-4αF-IFNλ1/GS115,人宫颈癌细胞系Hela细胞和HCT116细胞,为中国医学科学院基础所医学分子生物学国家重点实验室保存。方法:诱导含rhIFN-λ1表达质粒的甲醇营酵母Pichia pastoris进行表达,表达产物经阳离子交换层析及凝胶层析纯化。主要观察指标:通过HPLC,质谱,毛细管电泳等鉴定其纯度及理化性质,反转录-聚合酶链反应及real-time荧光定量聚合酶链反应鉴定其在肿瘤细胞中特异受体的表达,应用四甲基偶氮唑盐比色法初步评价其抗肿瘤活性。结果:毕赤酵母表达的rhIFN-1表达水平约9.23mg/L,纯化后的纯度近90%。rhIFN-λ1等电点为8.01,相对分子质量为20960。在Hela和HCT116中均检测到rhIFN-λ1受体小亚基IL-10R2和特异大亚基IL-28RmRNA的表达,但U937细胞中未检测到IL-28RmRNA的表达。rhIFN-λ1具有与IFN-α2a相似的降低细胞增殖的作用,但在经检测无或极少表达IL-28R的细胞中此作用不明显。结论:rhIFN-λ1可以在毕赤酵母中实现高效表达,表达产物的理化性质与天然IFN-λ1一致,具有与IFN-α2a相似的抗肿瘤活性,但对其特异受体分布少的骨髓造血系统降低增殖作用相对较弱。

关键词：干扰素毕赤酵母表达纯化色普法,高效液相组织构建

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