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巨细胞病毒核酸疫苗构建及其在小鼠中的免疫保护效果评价

巨细胞病毒核酸疫苗构建及其在小鼠中的免疫保护效果评价

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作者：黄超洋湖南师范大学

学位级别：硕士

本文分为巨细胞病毒及其疫苗研究概述、核酸疫苗构建及保护效果评价三个部分。人类巨细胞病毒(HCMV)是一种机会性感染疱疹病毒,在人群中普遍感染,可在免疫缺陷个体及新生儿中引起严重疾病。因而了解与其相关的宿主免疫保护机制,并研究... 详细信息

本文分为巨细胞病毒及其疫苗研究概述、核酸疫苗构建及保护效果评价三个部分。人类巨细胞病毒(HCMV)是一种机会性感染疱疹病毒,在人群中普遍感染,可在免疫缺陷个体及新生儿中引起严重疾病。因而了解与其相关的宿主免疫保护机制,并研究出安全有效的疫苗显得非常重要。美国2001年将研发CMV疫苗列为优先发展项目。尽管第一个HCMV疫苗临床研究开始于30年前,至今仍无有效预防HCMV感染及相关疾病的疫苗面世。目前研究较多的是蛋白亚单位疫苗及核酸疫苗。由于疱疹病毒严格的种属特异性,一般用MCMV动物模型来研究巨细胞病毒的免疫,它们有相似的病毒颗粒结构、基因组组成、组织嗜性及潜伏感染。将PCR扩增得到的MCMV Smith株M04、M54、M55、M84、M105和IE-1基因片段分别克隆入pcDNA3.1/myc-His B载体,构建成各自基因的表达质粒。这些基因分别编码gp34,DNA聚合酶,包膜蛋白B(gB),p65,DNA解旋酶和pp89蛋白。经过测序等证明各个质粒构建正确。我们在BALB/c小鼠中评价上述核酸疫苗抗CMV急性及潜伏性感染,提供免疫保护的有效性。通过电穿孔法免疫小鼠(每次分别免疫100μg,共免疫五次,每次间隔两周),随后用致死剂量(3×LD50)的同源病毒(为唾液腺分离病毒SGV,即将MCMV在BALB/c小鼠体内连续传代14次制得的高毒力SGV)感染小鼠。通过检测小鼠体液免疫和细胞免疫反应、体重丢失、唾液腺感染病毒滴度及存活率等来评价疫苗的保护效果。实验结果显示,pM55质粒能诱导小鼠产生高水平的特异性抗体免疫应答,pM04,pM84,pM105和pIE1质粒免疫过的小鼠能产生显著数目的分泌IFN-y的,脾脏细胞。五次免疫后,pM04,pM84和pIE-1质粒疫苗能提供小鼠完全保护,而pM54,pM55和pM105质粒提供的保护率为56-67%。结果表明MCMV DNA疫苗能提供有效抗致死量SGV感染的保护力。

关键词：巨细胞病毒核酸疫苗致死量感染抗体免疫应答细胞免疫应答

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