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血小板激活时胞质游离钙浓度与两种颗粒数变化的相关性

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生理学报 1998年第2期50卷 183-187页

作者：丁舰俞彰戎大梅钟慈声上海医科大学生物物理学教研室上海200032 上海医科大学仪器分析中心实验室上海200032

用电镜形态计量法检测血小板α颗粒（αG）和致密颗粒（dG）的数密度，用钙荧光指示剂Fura2检测血小板胞质游离Ca2+浓度（[Ca2+]i），观察到在钙离子导体A23187作用下，血小板[Ca2+]i明显升高。凝血酶与ADP也都分别引起[Ca2+]i升高，且... 详细信息

用电镜形态计量法检测血小板α颗粒（αG）和致密颗粒（dG）的数密度，用钙荧光指示剂Fura2检测血小板胞质游离Ca2+浓度（[Ca2+]i），观察到在钙离子导体A23187作用下，血小板[Ca2+]i明显升高。凝血酶与ADP也都分别引起[Ca2+]i升高，且有浓度依赖性。选用三种激动剂的不同量以反映血小板不同程度激活时，测定[Ca2+]i与颗粒数密度，分析两者间的相关性，发现αG和dG的数密度都与[Ca2+]；有紧密的相关性（Pr（αG）＜0．05，pr（dG）＜0.01），说明血小板的[Ca2+]i升高可促进αG和dG内容的分泌。

关键词：血小板激活 α果粒致密颗粒胞质钙

超分辨水平对脑胶质瘤患者中血小板亚细胞结构的初步研究

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超分辨水平对脑胶质瘤患者中血小板亚细胞结构的初步研究

作者：陈非凡华中科技大学

学位级别：硕士

脑胶质瘤是最常见的原发性脑内肿瘤,5年病死率位居第三位,其中胶质母细胞瘤已成为最难治疗的肿瘤。目前研究表明,肿瘤与血小板间存在密切的相互作用。一方面,肿瘤可以明显地改变血小板功能。另一方面,血小板也参与肿瘤的侵袭、增殖与转... 详细信息

脑胶质瘤是最常见的原发性脑内肿瘤,5年病死率位居第三位,其中胶质母细胞瘤已成为最难治疗的肿瘤。目前研究表明,肿瘤与血小板间存在密切的相互作用。一方面,肿瘤可以明显地改变血小板功能。另一方面,血小板也参与肿瘤的侵袭、增殖与转移。脑胶质瘤与血小板间同样存在这种密切的相互作用。在脑胶质瘤患者中,血小板的功能发生了明显变化。血小板中具有微管、α颗粒与致密颗粒等多种亚细胞结构。这些亚细胞结构相互作用,共同维持了血小板的正常生命活动。通过改变亚细胞结构,血小板可以调控绝大多数的功能。在多种疾病中,血小板的功能会发生明显的改变。因此,获取血小板亚细胞结构的详尽信息是了解疾病相关的血小板功能变化的重要途径。显微成像是获取血小板亚细胞结构信息的一种重要方法,但使用传统光学显微镜与电子显微镜时都存在一些问题。目前,新发展出的超分辨成像技术同时具备分辨率高、样本制备简单、容易大规模样本分析等优点,可以用来解析血小板亚细胞结构。综合而言,研究脑胶质瘤患者血小板中的亚细胞结构的变化,一方面可能为血小板与脑胶质瘤的相互作用如何改变血小板功能,并促进脑胶质瘤的增殖与转移提供新的线索。另一方面也可能加深对癌症相关的血小板高反应性、计数增多或其它尚不清楚缺陷的理解。最终,可能成为脑胶质瘤辅助诊断与治疗的潜在手段。但目前,尚不清楚脑胶质瘤患者中血小板的亚细胞结构如何变化。因此本文基于超分辨成像技术中的掠入射结构光照明显微术与膨胀显微术等,对脑胶质瘤患者中的血小板亚细胞结构进行了研究。研究结果如下:(1)为满足血小板亚细胞结构超分辨成像与分析的需求,首先对人源血小板的固定条件进行了系统筛选与优化:对于微管,3%PFA+0.05%GA+0.15%Triton X-100是其最优固定条件。该条件既可以保持微管的正常环状边缘带结构,又可以大幅减少血小板的聚集。对于α颗粒、致密颗粒与线粒体,4%PFA是其最优固定条件。该条件可以保持三种亚细胞结构的正常形态。(2)本文共采集15名胶质瘤患者与10名正常人的血液样本,每种亚细胞结构至少获取500个超分辨成像数据。对于微管,大部分患者与正常人在形态上并无明显差异,仅有部分患者会显出环状弥散状态。对于α颗粒,患者在颗粒分布、数量与所占面积上存在明显差异,其它参数无明显差异。对于致密颗粒,患者在直径与所占面积上存在明显差异,其它参数不存在明显差异。对于线粒体,所有参数均不存在明显差异。(3)通过结合徕卡共聚焦显微镜的lighting模式~*与膨胀显微术,更精确地研究了血小板的α颗粒。首先,对现有的TREx凝胶进行了改良。通过2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸钠,凝胶的机械强度提升了1.79倍,可以更好地兼容徕卡共聚焦显微镜。随后,在凝胶膨胀8.8倍的条件下,验证血小板的膨胀系数为5.77倍,实际分辨率为34.7 nm。最后,通过这种方式对血小板α颗粒进行研究。与膨胀前相比,正常人与胶质瘤患者血小板膨胀后检测到的颗粒数量分别提高了3.05倍与2.41倍,因此可以更清晰地检测血小板α颗粒。综合而言,本文通过使用超分辨成像技术对脑胶质瘤患者中血小板的亚细胞结构进行了研究。实验结果表明,与正常人相比,患者血小板的多种亚细胞结构发生了明显变化,可能有助于加深对脑胶质瘤相关血小板功能变化的理解,并具有辅助诊断与筛查的潜力。

关键词：脑胶质瘤血小板微管 α颗粒致密颗粒线粒体超分辨成像技术

基于超分辨显微镜下急性脑梗死患者血小板的形态、超微结构和功能的改变

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基于超分辨显微镜下急性脑梗死患者血小板的形态、超微结构和功能...

作者：杨冰鑫华中科技大学

学位级别：硕士

目的:基于超分辨显微镜直视化观察急性脑梗死患者血小板形态和超微结构,定量分析急性脑梗死患者血小板致密颗粒和α-颗粒的数量和面积,探讨急性脑梗死患者血小板结构和功能变化,以及PY受体拮抗剂(2Me SAMP)和COX-1抑制剂(Aspirin)对血... 详细信息

目的:基于超分辨显微镜直视化观察急性脑梗死患者血小板形态和超微结构,定量分析急性脑梗死患者血小板致密颗粒和α-颗粒的数量和面积,探讨急性脑梗死患者血小板结构和功能变化,以及PY受体拮抗剂(2Me SAMP)和COX-1抑制剂(Aspirin)对血小板超微结构的影响。方法:本研究收集11例来自武汉市第四医院神经内科2021年12月到2022年6月期间初诊的急性脑梗死患者,12例健康志愿者(其中6例年龄在18～30岁,6例年龄>55岁)的枸橼酸钠抗凝血(1:9)。离心收集富血小板血浆分为7个组:1)静息组;2)凝血酶激活5分钟组;3)2Me SAMP处理5分钟组;4)Aspirin处理5分钟组;5)凝血酶激活1小时组;6)2Me SAMP处理1小时组;7)Aspirin处理1小时组。应用全血细胞计数仪分析血小板数量、血小板分布宽度、平均血小板体积,大血小板比率;应用免疫荧光法标记CD63和VWF蛋白;应用超分辨显微镜直视化观察致密颗粒和α-颗粒形态;应用FIJI量化血小板直径、平均每个血小板内颗粒数量、颗粒平均面积、每个血小板内颗粒平均总面积、一个视野下颗粒总面积所占百分比;应用酶联免疫吸附法测定7个组内血小板4因子含量。结果:共观察来自11例急性脑梗死患者和12例健康对照组3170张图片,7162个血小板。和老年健康组相比,急性脑梗死患者血小板直径较减小(P致密颗粒数量增加(P=0.0213),致密颗粒平均面积(P致密颗粒总面积(P致密颗粒总面积所占百分比显著减小(P=0.0074);α-颗粒的数量(P颗粒平均面积(P=0.0107)、每个血小板内α-颗粒总面积(P颗粒总面积所占百分比均显著减小(P=0.0099);凝血酶激活1小时,和老年健康组相比,急性脑梗死患者血小板α-颗粒数量减少(P颗粒数量显著增加(P=0.0008),血小板α-颗粒大团块状聚集被抑制;Aspirin处理不能抑制血小板α-颗粒团块聚集形态;和老年健康组相比,急性脑梗死患者血小板静息时血小板因子4释放量低(P颗粒的结构和功能影响较COX-1抑制剂大,超分辨显微镜可以作为评估急性脑梗死患者血小板和抗血小板药物的方法。

关键词：急性脑梗死超分辨显微镜血小板致密颗粒 α-颗粒抗血小板药物

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喷雾造粒因素对粉体颗粒形成的影响

中国陶瓷 2000年第6期36卷 7-9,19页

作者：章登宏龚树萍周东祥姜胜林汪小红谭险峰奚玉敏江汉石油学院数理系湖北荆州434102 华中理工大学电子科学与技术系武昌430074

通过研究BaTiO3浆料的造粒干燥过程 ,雾化条件、固含量、粘结剂的比例对PTC粉体是形成致密颗粒还是空心颗粒或絮状颗粒起决定性作用 ,实验证实 ,高固体物含量、适量的粘结剂和较高泵压是形成实心颗粒、松装密度大的粉体的重要条件。

关键词：喷雾造粒因素干燥致密颗粒钛酸钡浆料

鸭病毒性肠炎病毒强毒在人工感染鸭体内形态结构和发生学的电镜观察

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畜牧兽医学报 2005年第5期36卷 486-491页

作者：袁桂萍程安春汪铭书周毅刘菲韩晓英郭宇飞廖永洪徐超文明贾仁勇周伟光陈孝跃四川农业大学动物科技学院禽病防治研究中心动物疫病与人类健康四川省重点实验室雅安625014

为研究鸭病毒性肠炎病毒(DEV)CH强毒株在感染鸭体内的分布和形态学发生规律,应用透射电镜和超薄切片技术对人工感染DEV的成年鸭各组织器官进行观察。结果表明:感染后12 h在脾脏和法氏囊首先观察到少量的DEV出现,24 h后在脾、胸腺和法氏... 详细信息

为研究鸭病毒性肠炎病毒(DEV)CH强毒株在感染鸭体内的分布和形态学发生规律,应用透射电镜和超薄切片技术对人工感染DEV的成年鸭各组织器官进行观察。结果表明:感染后12 h在脾脏和法氏囊首先观察到少量的DEV出现,24 h后在脾、胸腺和法氏囊以及死亡鸭的肝、肠和胰中均观察到具有典型的疱疹病毒粒子及其核衣壳形态的DEV。DEV病毒核衣壳有空心型、致密核心型、双环型和内壁附有颗粒型4 种形态,存在胞核和胞浆两种装配方式。病毒成熟有两种方式:一为细胞核内核衣壳在核内获得皮层,通过核内膜获得囊膜成为成熟病毒;二为核内核衣壳通过内外核膜进入胞浆,核内和胞浆内的核衣壳在细胞浆中获得皮层,然后在各种质膜上获得囊膜,最后成熟病毒通过细胞破裂或其他方式释放到细胞外。伴随着病毒的复制、装配和成熟,细胞中出现多种核内和胞浆包涵体、核内致密颗粒、核内微管和中空短管、胞浆电子致密小体等结构。

关键词：病毒性肠炎人工感染电镜观察形态结构体内发生学超薄切片技术核衣壳发生规律组织器官透射电镜病毒粒子装配方式致密颗粒法氏囊胞浆成熟形态学强毒株成年鸭致密核颗粒型细胞核细胞外包涵体皮层

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弓形虫侵入相关抗原的研究进展

黑龙江畜牧兽医 2016年第3期 58-61页

作者：郭衍冰姚新华苑淑贤王英贺程荣华曹利利吉林省畜牧兽医科学研究院长春130062 吉林农业大学生命科学学院长春130118

弓形虫作为一种胞内寄生原虫给人类的健康及畜牧业的发展带来严重危害。文章详细介绍了弓形虫表面抗原、致密颗粒蛋白及棒状体蛋白等侵入相关抗原,并对弓形虫侵入宿主细胞的过程和相关机制进行了阐述;同时,还概述了宿主感染虫体后所发... 详细信息

弓形虫作为一种胞内寄生原虫给人类的健康及畜牧业的发展带来严重危害。文章详细介绍了弓形虫表面抗原、致密颗粒蛋白及棒状体蛋白等侵入相关抗原,并对弓形虫侵入宿主细胞的过程和相关机制进行了阐述;同时,还概述了宿主感染虫体后所发生的细胞及体液免疫应答,并对未来弓形虫的相关研究进行了展望。

关键词：弓形虫表面抗原致密颗粒侵入机制宿主细胞免疫应答

婴儿急死综合征(SIDS)颈动脉体的超微结构

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中国法医学杂志 1991年第2期6卷 81-83,131页

作者：吕俊苞约翰.希尔顿中山医科大学法医病理学教研室广州510089 澳州柏斯法医局

作者利用透射电镜对8例婴儿急死综合征死亡及4例其他原因死亡的婴儿的颈动脉体进行观察。发现婴儿急死综合征与非婴儿急死综合征死亡的婴儿,其颈动脉体的主细胞形态结构相似。两组检材的主细胞内均含大量致密颗粒,其大小及数量无明显不... 详细信息

作者利用透射电镜对8例婴儿急死综合征死亡及4例其他原因死亡的婴儿的颈动脉体进行观察。发现婴儿急死综合征与非婴儿急死综合征死亡的婴儿,其颈动脉体的主细胞形态结构相似。两组检材的主细胞内均含大量致密颗粒,其大小及数量无明显不同。认为有必要进一步应用生化技术对婴儿急死综合征颈动脉体主细胞中致密颗粒物质进行定性和定量研究。

关键词：婴儿急死综合征颈动脉体主细胞致密颗粒

Sterile20激酶TNIK调控血小板功能并参与血栓功能的机制研究

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Sterile20激酶TNIK调控血小板功能并参与血栓功能的机制研究

作者：汪怡浙江大学

学位级别：硕士

血小板细胞最重要的生理功能是参与生理性止血和动脉血栓形成,血小板功能的异常包括活化不足或者活化过度,均会引发严重的出血和血栓性疾病。因此,探究出血或血栓性疾病的机制,阐明血小板活化过程中的分子作用,将会对出血或血栓性疾病... 详细信息

血小板细胞最重要的生理功能是参与生理性止血和动脉血栓形成,血小板功能的异常包括活化不足或者活化过度,均会引发严重的出血和血栓性疾病。因此,探究出血或血栓性疾病的机制,阐明血小板活化过程中的分子作用,将会对出血或血栓性疾病的药物研发提供新的靶点分子,也为疾病的治疗带来显著意义。在血小板活化过程中,MAPK作为关键的信号节点分子,对血小板的粘附,分泌,聚集产生重要调节作用。MAPK作为血栓调控的经典信号通路,是由MAP3K激酶,MAP2K激酶,MAPK激酶顺次级联磷酸化组成。但在调控过程中,MAPK网络分子如何具体地对各个不同的血栓形成过程产生影响还不够清楚。Ste20激酶家族作为近年来发现的MAP4K家族成员,其在血栓形成过程中作用和机制尚有待研究。Ste20激酶家族根据结构分为两大类——PAK（p21-activated kinases）和GCK（germinal center kinases）。GCKIV亚家族中的MINK1蛋白已经被我们实验室的前期发表论文证明正向调控止血和血栓形成。TNIK蛋白也属于GCKIV亚家族,它在1999年才被首次发现。虽然近年的研究已明确TNIK在细胞增殖、神经发育等过程中扮演重要作用,但并未在血栓形成领域中进行研究。鉴于TNIK和MINK1的蛋白家族同源性以及MAPK家族蛋白在血小板和血栓中的重要作用,我们作出假设:TNIK通过调控MAPK介导血小板活化,参与血栓形成过程。本研究利用基因敲除小鼠模型,首次研究了 TNIK在血小板功能以及血栓形成中的作用。实验结果概括总结如下:（1）在三氯化铁诱发的肠系膜动脉血栓模型中,TNIK血小板特异性敲除小鼠的动脉堵塞时间显著延长,几乎是野生型小鼠的两倍。（2）在血小板活化功能实验中发现,低浓度的凝血酶和胶原刺激后,TNIK敲除血小板的聚集水平显著下降,但TNIK不影响α颗粒的释放。另外,TNIK敲除血小板在纤维蛋白原上的铺展面积下降。（3）TNIK敲除导致高低浓度各种刺激剂导致的血小板致密颗粒释放显著降低。而在用ADP水解酶Apyrase作用下,TNIK敲除血小板和野生型血小板聚集水平和在纤维蛋白原上的铺展面积的差异均消失。此外,外源性非聚集浓度的低剂量ADP加入,可使TNIK敲除血小板在纤维蛋白原上的铺展面积恢复到野生型水平。（4）在分子机制方面,TNIK敲除使p38、AKTThr308/Ser473位点磷酸化水平降低。综上所述,TNIK可能是正向调控血小板活化和血栓形成的新信号分子,在血小板中的可能作用为影响致密颗粒的释放,其分子信号转导可能通过p38和AKT的活化进行。

关键词：血小板 TNIK 致密颗粒 ADP

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酸性钙体的研究进展

国际医学寄生虫病杂志 2013年第2期40卷 104-109页

作者：程莎莎郝文波罗树红南方医科大学生物技术学院抗体工程所广州510515

酸性钙体是近年发现的一种富含磷酸盐的致密颗粒性的酸性细胞器，主要以焦磷酸盐（pyrophosphate，PPi）、多磷酸（polyphosphate，polyP）为代表，另外还含有钙和其他阳离子。其膜上含有多种泵（钙泵、ATP酶质子泵、焦磷酸酶质子泵）... 详细信息

酸性钙体是近年发现的一种富含磷酸盐的致密颗粒性的酸性细胞器，主要以焦磷酸盐（pyrophosphate，PPi）、多磷酸（polyphosphate，polyP）为代表，另外还含有钙和其他阳离子。其膜上含有多种泵（钙泵、ATP酶质子泵、焦磷酸酶质子泵）、转运体（钠离子／氢离子、钙离子／氢离子）及通道（通道蛋白），基质中含有与Pn和DolyP代谢有关的酶。酸性钙体已在包括细菌、寄生虫、人类细胞等多种生物中被发现，其主要功能包括：（1）是阳离子和磷酸盐的储存场所，（2）参与焦磷酸盐和多聚磷酸盐代谢机制，（3）维持细胞内钙和DH的稳态，（4）参与渗透压的调节等。该文对近年来有关酸性钙体的研究进展进行综述和讨论．

关键词：酸性钙体致密颗粒多聚磷酸盐焦磷酸盐异染质颗粒