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作者：刘建俊苏州大学

学位级别：硕士

目的:探讨钟基因nr1d1在BPA暴露导致斑马鱼自闭样行为中的作用及可能的机制。方法:1、BPA暴露对钟基因nr1d1的表达及其节律的影响。将斑马鱼胚胎置于不同处理条件下,培养至72 hpf,用系统水培养至96 hpf;96hpf后,分别在CT4、CT10、CT16、... 详细信息

目的:探讨钟基因nr1d1在BPA暴露导致斑马鱼自闭样行为中的作用及可能的机制。方法:1、BPA暴露对钟基因nr1d1的表达及其节律的影响。将斑马鱼胚胎置于不同处理条件下,培养至72 hpf,用系统水培养至96 hpf;96hpf后,分别在CT4、CT10、CT16、CT22四个点收集各个处理组的样本(72 hpf后持续避光),运用q-PCR检测斑马鱼钟基因nr1d1转录水平及节律振荡。2、斑马鱼幼鱼自闭样行为学实验将斑马鱼胚胎置于不同处理条件下,培养至72hpf,用养鱼水培养至13 dpf分别进行社交行为学、触觉行为学实验,适应10分钟后,在连续1小时光照条件下评估不同处理组斑马鱼幼鱼自闭样行为的改变。3、斑马鱼幼鱼自闭症相关风险基因的检测将斑马鱼胚胎置于不同处理条件下,培养至72 hpf,用系统水培养至96 hpf;96hpf后,分别在CT4、CT10、CT16、CT22四个点收集各个处理组的样本(72 hpf后持续避光),运用q-PCR检测斑马鱼自闭症相关风险基因(α-nrxn2a、β-nrxn2a)转录水平及节律振荡。4、氧化还原平衡相关指标检测将斑马鱼胚胎置于不同处理条件下,培养至72 hpf,用系统水培养至96 hpf;96hpf后,分别在CT4、CT10、CT16、CT22四个点收集各个处理组的样本(72 hpf后持续避光);运用q-PCR检测抗氧化系统中的关键基因(nrf2、gpx、gst、sod1、sod2)转录水平及其节律;运用酶联免疫吸附实验(Enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA)检测不同处理组斑马鱼体内抗氧化相关酶(GPx、GST、SOD)的含量及节律振荡情况。5、斑马鱼炎症指标检测将斑马鱼胚胎置于不同处理条件下,培养至72 hpf,用系统水培养至96 hpf;96hpf后,分别在CT4、CT10、CT16、CT22四个点收集各个处理组的样本(72 hpf后持续避光),运用q-PCR检测白细胞介素1β(il-1β)的转录水平及节律;运用Tg(mpo:EGFP)转基因斑马鱼观察中性粒细胞募集和迁移情况。6、斑马鱼星形胶质细胞活化情况检测将转基因斑马鱼Tg(gfap:EGFP)胚胎置于不同处理条件下,培养至72hpf,用系统水培养至96hpf;96hpf后,分别在CT4、CT10、CT16、CT22四个点观察不同处理组对斑马鱼星形胶质细胞活化情况的影响(72 hpf后持续避光),使用Image J软件对其进行荧光强度半定量。7、E/I平衡相关指标检测将转基因斑马鱼Tg(dlx5a/dlx6a:EGFP)胚胎置于不同处理条件下,培养至72hpf,用系统水避光培养至96hpf;96hpf后,分别在CT10、CT22检测不同处理组对GABA神经元活化情况的影响(72 hpf后持续避光),使用Image J软件对其进行荧光强度半定量。将野生型斑马鱼胚胎置于不同处理条件下,培养至72hpf,用系统养鱼水培养至96 hpf;96 hpf后,分别在CT4、CT10、CT16、CT22四个点收集各个处理组的样本(72 hpf后持续避光),使用q-PCR检测谷氨酸、GABA合成过程关键基因(gad1b、glsb、gls2a、gls2b)的转录水平及节律;并在CT10、CT 22检测谷氨酸和GABA的含量。结果:1、斑马鱼昼夜节律基因nr1d1的变化:结果发现,BPA可以导致nr1d1节律破坏,且转录量显著下降。nr1d1激动剂GSK4112可以使其节律及转录量恢复。2、在斑马鱼自闭样行为学中,BPA组斑马鱼幼鱼产生自闭样行为,表现为社交缺陷及对触觉刺激的反应性降低,在晚间这种影响尤为明显。nr1d1激动剂GSK4112可以使BPA所致的自闭样行为得到缓解。3、斑马鱼自闭症相关风险基因的变化:结果发现BPA导致斑马鱼幼鱼自闭症相关风险基因α-nrxn2a、β-nrxn2a的节律破坏且转录量显著升高,nr1d1激动剂GSK4112可以使BPA所致自闭症相关风险基因转录量的改变和节律的破坏恢复至正常水平。4、斑马鱼氧化还原平衡及其节律变化:结果发现,BPA可以导致ROS水平显著升高且节律发生改变,抗氧化系统中nrf2、gpx、gst、sod1、sod2转录量显著下降且节律紊乱,ELISA结果发现,体内抗氧化相关酶GPx、GST、SOD的节律被破坏且含量显著下降。nr1d1激动剂GSK4112可以恢复BPA所导致的氧化还原失衡及其节律紊乱。5、斑马鱼体内炎症反应的变化:通过使用Tg(mpo:EGFP)转基因斑马鱼发现,BPA可以导致中性粒细胞的募集和迁移增多且节律出现紊乱,并且使用q-PCR发现il-1β的节律被破坏且转录量显著升高。nr1d1激动剂GSK4112可以恢复BPA所致的炎症反应及

关键词： BPA 自闭样行为 nr1d1 斑马鱼幼鱼

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孕期低剂量poly(I:C)暴露联合新生接种乙肝疫苗诱发小鼠持久性自闭样行为

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解剖学研究 2019年第2期41卷 93-97页

作者：张红阳杨俊华袁丽芳祁方昉左泽杰姚志彬中山大学中山医学院人体解剖学教研室广东广州510080 广东药科大学生命科学与生物制药学院人体解剖学教研室广东广州510080

目的探讨低剂量聚肌苷酸胞甘酸[poly(I:C)]暴露联合新生期乙肝疫苗接种导致小鼠表现出持久性自闭症样行为的机制。方法将孕鼠随机分成4组,分别为对照(CON)组、poly(I:C)(PIC)组、乙肝疫苗(HBV)组和联合免疫干预(P/H)组。4周、8周和12周... 详细信息

目的探讨低剂量聚肌苷酸胞甘酸[poly(I:C)]暴露联合新生期乙肝疫苗接种导致小鼠表现出持久性自闭症样行为的机制。方法将孕鼠随机分成4组,分别为对照(CON)组、poly(I:C)(PIC)组、乙肝疫苗(HBV)组和联合免疫干预(P/H)组。4周、8周和12周龄时,检测小鼠自闭症样行为。12周龄时,检测小鼠脾脏Th2、Th17和TH2/17细胞的比例及外周血和海马组织中IL-4和IL-17a的含量。结果与CON组比较,HBV组8周龄时出现行为学损害,12周龄时行为学损害恢复;P/H组8周、12周龄时均出现行为学损害。此外,P/H组较CON组Th2型的细胞水平有升高(P自闭症样行为。

关键词：自闭样行为聚肌苷酸胞甘酸乙肝疫苗孕期 Th2/17细胞

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海藻糖对毒死蜱导致小鼠自闭与抑郁样行为的保护作用

海藻糖对毒死蜱导致小鼠自闭与抑郁样行为的保护作用

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中国毒理学会第十次全国毒理学大会

作者：涂英杨咏咏游明丹贵州医科大学公共卫生与健康学院

目的观察海藻糖(Trehalose,Tre)对神经发育期毒死蜱(Chlorpyrifos,CPF)暴露导致的小鼠自闭与抑郁样行为的影响,并探讨可能的机制。材料和方法将交配成功的母鼠随机分为Ctrl组、1 mg/kg CPF组、1 mg/kg CPF+2 g/kg Tre组、2 g/kg Tre组。... 详细信息

目的观察海藻糖(Trehalose,Tre)对神经发育期毒死蜱(Chlorpyrifos,CPF)暴露导致的小鼠自闭与抑郁样行为的影响,并探讨可能的机制。材料和方法将交配成功的母鼠随机分为Ctrl组、1 mg/kg CPF组、1 mg/kg CPF+2 g/kg Tre组、2 g/kg Tre组。Ctrl组灌胃给予纯玉米油;1 mg/kg CPF组和1 mg/kg CPF+2 g/kg Tre组在孕哺期灌胃给予CPF;1 mg/kg CPF+2 g/kg Tre组和2 g/kg Tre组在雄性仔鼠出生后第14天开始腹腔注射Tre至出生后第42天,每周三次。分别于出生后第24、28、32、36、40和41天分别进行雄性仔鼠理毛、T迷宫、埋珠、三箱、强迫游泳和悬尾实验。出生后第43天剥离海马组织。运用Western Blot方法检测雄性仔鼠海马组织中TLR4、MLKL蛋白和自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、P62的表达。结果在理毛实验和T迷宫实验中,CPF组仔鼠理毛的时间及重复进入同一臂的次数多于对照组(P0.05);在第三阶段(社交行为实验),与对照组相比,CPF减少仔鼠在陌生小鼠1(Stranger1,S1)室停留时间,增加仔鼠在空笼子(Empty,E)室的停留时间(P0.05);在第四阶段(社会新奇偏好测试),CPF组的仔鼠在S1室的停留时间多于陌生小鼠2(Stranger2,S2)室(P0.05),另外,与对照组相比,CPF暴露减少了仔鼠在S2室停留的时间,而与CPF组相比,Tre处理增加了仔鼠在S2室停留的时间。强迫游泳与悬尾实验发现CPF增加了小鼠的不动时间,而Tre减少了小鼠的不动时间(P0.05)。结论 Tre可改善神经发育期CPF暴露导致的小鼠自闭和抑郁样行为,其机制可能与抑制TLR4激活,减少坏死性凋亡,促进自噬降解有关。

关键词：毒死蜱海藻糖自闭样行为抑郁样行为 TLR4 MLKL 自噬

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