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一株鸭疫里默氏杆菌自然弱毒株的分离鉴定

中国畜牧兽医 2010年第6期37卷 141-144页

作者：高继业唐妤赵洁丁孟建刘燕刘子勇李继祥西南大学荣昌校区动物医学系重庆402460

从四川德阳某鸭场病死鸭肝脏中分离的DY9株细菌,经理化特性、16SrRNA核苷酸序列与cam基因检测,证明为鸭疫里默氏杆菌,并对其毒力与毒力稳定性等进行了测定。DY9株细菌对14日龄非免疫健康鸭的LD50大于2.3×1010CFU/0.5mL,但死亡鸭不具有... 详细信息

从四川德阳某鸭场病死鸭肝脏中分离的DY9株细菌,经理化特性、16SrRNA核苷酸序列与cam基因检测,证明为鸭疫里默氏杆菌,并对其毒力与毒力稳定性等进行了测定。DY9株细菌对14日龄非免疫健康鸭的LD50大于2.3×1010CFU/0.5mL,但死亡鸭不具有纤维素性炎症病变,并未能回收到细菌;经敏感鸭体内连续传10代和经巧克力营养琼脂平板传30代后毒力未见显著改变;培养滤液不影响鸭胚成纤维细胞的形态;油佐剂灭活菌苗与活菌苗免疫鸭后14d攻毒分别获得100%和79.52%的相对保护率,21d时均为100%。以上结果表明,DY9株细菌为毒力稳定的鸭疫里默氏杆菌自然弱毒株。

关键词：鸭疫里默氏杆菌自然弱毒株分离鉴定

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鹅源新城疫病毒自然弱毒株的分离与鉴定

中国家禽 2007年第7期29卷 16-19页

作者：马晓丹焦库华周守长侯建刚岑皓扬州大学兽医学院江苏扬州225009 河南碧云天动物药业有限公司河南郑州450000

从江苏省某健康鹅群分离并筛选出一株病毒,经鸡胚传代培养和血清学试验,证明该毒株为新城疫病毒。应用电镜技术、生物学特性检测对其进行鉴定,结果表明:该毒株MDT为146.4h,ICPI为0.375,参照判定标准,确定该毒株为NDV弱毒株。通过RT-PCR... 详细信息

从江苏省某健康鹅群分离并筛选出一株病毒,经鸡胚传代培养和血清学试验,证明该毒株为新城疫病毒。应用电镜技术、生物学特性检测对其进行鉴定,结果表明:该毒株MDT为146.4h,ICPI为0.375,参照判定标准,确定该毒株为NDV弱毒株。通过RT-PCR方法,扩增出该毒株F基因,并进行克隆和序列测定,其F蛋白裂解位点的序列为112G-K-Q-G-R-L117,符合典型的NDV弱毒株的特征,从基因和分子水平上进一步证明该毒株为NDV弱毒株,通过绘制的系统发育进化树进行分析,表明该毒株为F基因Ⅰ型新城疫病毒,并将该毒株暂命名为G0405。

关键词：新城疫自然弱毒株分离鉴定

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鸭疫里默氏杆菌自然弱毒株的部分特性研究

鸭疫里默氏杆菌自然弱毒株的部分特性研究

作者：赵洁西南大学

学位级别：硕士

鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)引起的鸭传染性浆膜是家鸭、火鸡和多种其它鸟类的一种接触传染性疾病。该病呈世界范围分布,几乎已在所有的集约化养鸭生产的国家发现。该病的发病率和死亡率较高,已成为目前危害世界各国... 详细信息

鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)引起的鸭传染性浆膜是家鸭、火鸡和多种其它鸟类的一种接触传染性疾病。该病呈世界范围分布,几乎已在所有的集约化养鸭生产的国家发现。该病的发病率和死亡率较高,已成为目前危害世界各国养鸭业最为严重的传染病之一,给养鸭业造成了巨大的经济损失。本实验室在前期对我国鸭传染性浆膜炎的病原流行病学进行了研究,分离、鉴定、保存有500余株鸭疫里默氏杆菌。本文在此基础上筛选出2株低致病力的鸭疫里默氏杆菌,通过16SrDNA核苷酸序列测定及对雏鸭的半数致死量与毒力稳定性测定,确证为鸭疫里默氏杆菌自然弱毒株,并对其侵袭性、培养滤液的细胞毒性、免疫原性、培养及生化特性等进行研究,可为进一步研究鸭疫里默氏杆菌毒力因子和弱毒菌苗等提供材料。本研究的主要结果如下: 1.以扩增细菌16SrDNA的通用引物(16S-8F/20)和(16S-1512R/21)为引物,以基因组DNA为模板进行PCR扩增,测序显示DY株和517株的扩增部分片段大小分别为1436bp和1440bp,BLAST软件分析发现二者的核苷酸序列与已报道鸭疫里氏杆菌的同源性均达到99%以上,且相互之间的同源性为99%以上。 2.鸭疫里默氏杆菌自然弱毒517株和DY株对14日龄非免健康四川麻鸭的半数致死量分别为1.18×10CFU和2.3×10CFU;二者在10-14日龄非免健康鸭体内连传10代后的半数致死量分别为1.02×10和2.2×10CFU。 3.鸭疫里默氏杆菌自然弱毒517株和DY株利用LB培养,去细胞培养物经超滤浓缩、硫酸铵沉淀、透析除盐及微孔滤膜过滤除菌制备的培养滤液与鸭成纤维细胞共培养,在4小时内成纤维细胞形态与空白对照间差异不明显,而阳性对照AF株则呈现细胞膜消失、胞质流失与核浓缩等;517株和DY株与鸭胚成纤维细胞共作用5h测得侵袭力分别为1320(CFU/ml)和1262(CFU/ml),与强毒AF株1510(CFU/ml)间差异显著(0.01＜p＜0.05)。 4.鸭疫里默氏杆菌自然弱毒517株和DY株灭活菌液与矿物油佐剂乳化制成灭活菌苗(5.5×10CFU/ml)免疫5日龄四川麻鸭,0.5ml/只,免疫后21天的血清抗体水平(ELISA)分别为1.618和1.884(A值)、同血清型强毒菌株攻毒保护率均为100%,28天的血清抗体水平分别为1.549和1.724、攻毒保护率均为100%;1.1×10CFU活菌接种后,试验鸭无明显的临床表现,21天的血清抗体水平分别为1:17和1.379、攻毒保护率均为80%,28天的血清抗体水平分别为1.289和1.491、攻毒保护率分别为75%和100%。 5.鸭疫里默氏杆菌自然弱毒517株和DY株为具有荚膜的革兰氏阴性小杆菌,在巧克力营养平板上生长旺盛,菌落为奶油状,能在LB营养琼脂平板上生长;除517株发酵血清菊糖、阿拉伯糖和DY株发酵血清菊糖、阿拉伯糖、糊精外,不利用葡萄糖等其它碳水化合物;过氧化氢酶均呈阳性;明胶液化试验均呈阴性;对青霉素、氨苄青霉素、阿莫西林、痢特灵、复方新诺民、奈替米星等具有抗性。本试验结果表明,鸭疫里默氏杆菌517株和DY株为有荚膜、不液化明胶、能诱导动物产生良好免疫应答的毒力稳定的自然弱毒菌株,具有鸭疫里默氏杆菌典型的形态大小,能在LB培养基中生长,可作为比较基因组学等研究毒力因子及疫苗开发的基础菌株。

关键词：鸭疫里默氏杆菌自然弱毒株致病力免疫原性

弓形虫病免疫的研究——自然弱毒株(QHO)免疫原性的观察

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中国兽医科技 1989年第6期19卷 9-11页

作者：杜重波马军武郭志刚刘卫张德林中国农业科学院兰州兽医研究所

本文描述了弓形虫自然弱毒株(QHO)速殖子不经任何理化处理,以敏感模式动物小白鼠进行的适宜免疫剂量、有效免疫力产生的时间、适宜攻击剂量和免疫持续期等项试验。结果用QHO株10~1～10~5免疫剂量存活率分别为100％、70％、100％、90％... 详细信息

本文描述了弓形虫自然弱毒株(QHO)速殖子不经任何理化处理,以敏感模式动物小白鼠进行的适宜免疫剂量、有效免疫力产生的时间、适宜攻击剂量和免疫持续期等项试验。结果用QHO株10~1～10~5免疫剂量存活率分别为100％、70％、100％、90％、80％;免疫后第14天即可产生免疫力,免疫后的小鼠可经受10~1～10~4以上强毒攻击,保护率达90％以上,免疫后小鼠经120天以上持续期观察和抗体消长规律测定都可经受10~5大剂量强毒攻击,保护率达90％,抗体滴度一直维持在高滴度水平(滤纸IHA法1:32)。证实QHO株是一种典型的弱毒株,并具有较好的免疫原性和激发机体产生明显的免疫保护效应,是许多弓形虫(RH、GJS、M-7741、GT-1等株)所不能相媲的一种特异弱毒虫株。为进一步研究弓形虫的生物学特性和弱毒株虫苗提供了依据。

关键词：弓形虫病免疫自然弱毒株免疫性

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非洲猪瘟自然弱毒株演变进程

中国动物检疫 2021年第3期38卷 68-73页

作者：戈胜强王振忠吕艳屈海龙张潇月胡永新钱莺娟吴晓东王志亮中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032 南京农业大学教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏南京210095 山东农业大学山东泰安271001

自2018年非洲猪瘟(African swine fever,ASF)传入中国以来疫情得到了有效控制。但2021年以后,我国的ASF流行情况出现了新的变化,临床中出现了“自然变异株”。这些毒株可能导致感染后临床症状不典型,容易与其他疫病混淆等问题。这与国... 详细信息

自2018年非洲猪瘟(African swine fever,ASF)传入中国以来疫情得到了有效控制。但2021年以后,我国的ASF流行情况出现了新的变化,临床中出现了“自然变异株”。这些毒株可能导致感染后临床症状不典型,容易与其他疫病混淆等问题。这与国外的流行演变规律一致,即当ASF在一个国家或地区流行较长时间后,其临床表现将由急性发病转变为缓慢发病或出现新的临床表现。经过多年的观察积累,国外已经对该病毒的流行规律特别是自然弱毒株的演变进程有了大量记载,但国内目前尚无这方面的描述。为此,就ASF自然弱毒株的演变进程进行综述,从而提出加强血清学诊断产品研发、加快产业化报批进程、适时开展血清学监测追溯等建议,以期为我国ASF科学防控提供参考。

关键词：非洲猪瘟红细胞吸附活性自然弱毒株

Ⅱ型犬腺病毒自然弱毒YCA18株的实验免疫研究

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中国兽药杂志 2001年第2期35卷 1-4页

作者：夏咸柱范泉水扈荣良黄耕邱薇军需大学军事兽医研究所吉林长春130062 成都军区军事医学研究所云南昆明650032

应用 YCA1 8株第 8代细胞培养物 (YCA1 8- 8)经口鼻和静脉接种犬腺病毒 (CAV) SN抗体 <1∶ 2的易感犬作安全试验 ,结果未见任何 CAV临床症状与病理解剖学改变 ;用不同剂量的YCA1 8- 8分组免疫 CAV易感犬 ,经 SN抗体测定与用 CAV强毒攻... 详细信息

应用 YCA1 8株第 8代细胞培养物 (YCA1 8- 8)经口鼻和静脉接种犬腺病毒 (CAV) SN抗体弱毒作免疫互扰试验 ,结果与各弱毒的单独免疫结果未见差异 ;将 YCA1 8- 8冰冻保存于 -30℃ ,6个月内 TCID50 仍不低于 1 0 -4 /0 .1 ml,经加明胶 -蔗糖低温真空冻干后 ,4℃和 - 30℃保存 1年 ,TCID50 均仍维持在 1 0 -4 /0 .1 ml以上 ;经 YCA1 8- 2 0 3次免疫的试验犬 ,1年后 SN抗体仍在最低抗体保护值 1∶ 1 6以上。

关键词： Ⅱ型犬腺病毒自然弱毒株弱毒疫苗实验免疫开发利用

鸡马立克氏病(MD)免疫的研究——MD病毒弱毒疫苗株的培育和免疫试验

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畜牧兽医学报 1984年第2期 34-41页

作者：童昆周林英华徐宜为付德霞李春风刘春萱朴钟洙戴克珍中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

从2个多年没有发生MD的鸡场的临诊健康鸡分离到两株MD病毒,分别命名为 K 株和 S 株。毒力测定证明这两株病毒是自然弱毒株。对经过培育的K和S株做了安全性和稳定性试验,证明对鸡是安全和稳定的,也做了免疫原性试验,同火鸡疱疹病毒(HVT)... 详细信息

从2个多年没有发生MD的鸡场的临诊健康鸡分离到两株MD病毒,分别命名为 K 株和 S 株。毒力测定证明这两株病毒是自然弱毒株。对经过培育的K和S株做了安全性和稳定性试验,证明对鸡是安全和稳定的,也做了免疫原性试验,同火鸡疱疹病毒(HVT)进行对比,结果证明 K株对鸡的免疫效力(81.25～93.75%)明显高于HVT(60.5%),S 株(68.75%)也高于HVT。用K株制造的疫苗做了大面积实际予防MD 的试验,注射鸡14万只以上。证明安全有效,免疫效力比HVT好。因此,K 株可以用作制造疫苗的弱毒株。

关键词：鸡马立克氏病弱毒疫苗 HVT 免疫试验自然弱毒株 MD 鸡场

抗鸡新城疫疫苗发展历程概述(二)Ⅱ、鸡新城疫弱毒活苗

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中国兽药杂志 1985年第3期 42-46页

作者：马闻天李慧姣中国兽药监察所

一、弱毒活疫苗研究概况在灭活苗研究的同时,许多人进行了弱毒活疫苗的研究。有人用鸡胚通过(Iyer 和Dobson 1940、Haddow 和 Ibani 1646)方法;有人用非易感宿主通过的方法,如鸭胚脑内传代(Martini 和 Knrjana 1950)或鸭胚绒毛尿囊传代(... 详细信息

一、弱毒活疫苗研究概况在灭活苗研究的同时,许多人进行了弱毒活疫苗的研究。有人用鸡胚通过(Iyer 和Dobson 1940、Haddow 和 Ibani 1646)方法;有人用非易感宿主通过的方法,如鸭胚脑内传代(Martini 和 Knrjana 1950)或鸭胚绒毛尿囊传代(Frier、Millen 及 Allerts 1950 & Beamer1952);也有用小鼠脑内传代或田鼠脑内传代或细胞培养传代,以减弱病毒毒力。此外,还有许多用从自然病例分离的弱毒株制作疫苗(Crowther 1950和 Kutlesa 1952)。在40年

关键词：鸡新城疫弱毒活苗日龄周龄加强免疫新城疫疫苗免疫母源抗体饮水免疫中等毒力抗体价雏鸡强毒株鸡群自然弱毒株

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鸡的马立克氏病疫苗

中国兽药杂志 1975年第1期 67-68页

1.概况:马立克氏病疫苗,目前已知有三种,一种是用从患马立克氏病的鸡体内分离出来的强毒,通过鸡的肾细胞再通过鹌鹑胚细胞继代减弱的所得弱毒株制成的苗。这种苗具有一定免疫力,其缺点是注苗后的鸡易脱毛,在日本个别鸡场有激发其他病发... 详细信息

1.概况:马立克氏病疫苗,目前已知有三种,一种是用从患马立克氏病的鸡体内分离出来的强毒,通过鸡的肾细胞再通过鹌鹑胚细胞继代减弱的所得弱毒株制成的苗。这种苗具有一定免疫力,其缺点是注苗后的鸡易脱毛,在日本个别鸡场有激发其他病发生的现象。1970年后,日本已不用这种苗了。第二种是从火鸡身上分离出来的马立克病毒

关键词：马立克氏病疫苗自然弱毒株火鸡马立克病毒