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p38分子与TAB1分子的相互作用及其自我磷酸化研究进展

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军事医学科学院院刊 2008年第4期32卷 379-381页

作者：王庆阳冯健男张纪岩军事医学科学院基础医学研究所北京100850

一直以来,炎症的发生、发展受到人们的广泛关注。自1994年MAPK家族的p38分子被首次报道以来,大量相应的研究逐渐确立了p38分子在炎症调控中的重要作用。TAB1是MAP3K家族成员TAK1的结合蛋白,近来发现它能与p38发生相互作用并使p38自我磷... 详细信息

一直以来,炎症的发生、发展受到人们的广泛关注。自1994年MAPK家族的p38分子被首次报道以来,大量相应的研究逐渐确立了p38分子在炎症调控中的重要作用。TAB1是MAP3K家族成员TAK1的结合蛋白,近来发现它能与p38发生相互作用并使p38自我磷酸化。最近,关于TAB1与p38相互作用的研究越来越多,在分子、细胞和组织器官层面都有新的发现,而且以TAB1和p38相互作用为靶向也成为新型p38抑制剂研究的新策略。

关键词： p38丝裂原激活蛋白激酶类 TAB1 自我磷酸化

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近膜区对水稻类受体激酶的磷酸化活性的影响

农业生物技术学报 2008年第2期16卷 299-304页

作者：李莉云靳苗静刘茜陈浩刘国振河北农业大学生命科学学院河北省农林科学院粮油作物研究所

利用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的同源重组系统进一步克隆了缺失近膜区的水稻(Oryza sativa)类受体激酶序列,表达了激酶的GST融合蛋白质,进行了激酶的自我磷酸化活性分析。结果显示,缺失近膜区对激酶蛋白质的表达没有明显影响... 详细信息

利用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的同源重组系统进一步克隆了缺失近膜区的水稻(Oryza sativa)类受体激酶序列,表达了激酶的GST融合蛋白质,进行了激酶的自我磷酸化活性分析。结果显示,缺失近膜区对激酶蛋白质的表达没有明显影响,但是对其磷酸化活性检测发现,17个缺失近膜区的激酶中有14个激酶的活性丧失,按照PlantsP网站的分类,这14个激酶分别属于第一类跨膜受体激酶和非跨膜相关类受体激酶中的Receptor like cytoplasmic kinaseⅦ家族、CRPK1like kinase(type1)家族、S-domain kinase(type2)家族、Legume lectin domain kinase家族和Wall associated kinase家族,另外3个是推测的类受体激酶。表明近膜区对植物类受体激酶的活性具有重要影响。

关键词：类受体激酶近膜区自我磷酸化

水稻蛋白激酶的规模化克隆、表达及活性研究(简报)

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分子细胞生物学报 2007年第3期40卷 245-250页

作者：李莉云孙健王海娇刘茜刘丽娟陶勇刘国振河北农业大学生命科学学院保定071000 河北省农林科学院粮油作物研究所石家庄050051 中国科学院遗传与发育研究所北京100101

蛋白激酶几乎与所有重要的发育代谢过程有关，已知在植物的发育、自交不亲和、雄性不育、抗逆和抗病等生命活动过程中起重要的调控作用。蛋白激酶在各种生物中广泛存在，根据网络公布的水稻全基因组序列图谱，通过同源序列比对．TIGR Ri... 详细信息

蛋白激酶几乎与所有重要的发育代谢过程有关，已知在植物的发育、自交不亲和、雄性不育、抗逆和抗病等生命活动过程中起重要的调控作用。蛋白激酶在各种生物中广泛存在，根据网络公布的水稻全基因组序列图谱，通过同源序列比对．TIGR Rice Genome Annotation—Release4共找到了1532个具有激酶结构域的蛋白质（PF00069）.

关键词：水稻激酶克隆表达自我磷酸化

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水稻蛋白激酶高通量克隆表达及初步活性分析

水稻蛋白激酶高通量克隆表达及初步活性分析

作者：孙健河北农业大学

学位级别：硕士

水稻是世界上重要的粮食作物之一,是研究作物产量、转基因、杂种优势、病虫害抗性和其它抗逆等方面的重要遗传材料,也是基础研究的模式植物之一。水稻中有1500个以上的蛋白激酶,作为催化调节翻译后修饰的最大酶类,在水稻生长发育的所有... 详细信息

水稻是世界上重要的粮食作物之一,是研究作物产量、转基因、杂种优势、病虫害抗性和其它抗逆等方面的重要遗传材料,也是基础研究的模式植物之一。水稻中有1500个以上的蛋白激酶,作为催化调节翻译后修饰的最大酶类,在水稻生长发育的所有过程中发挥着重要作用。但目前真正了解功能的水稻激酶屈指可数。蛋白激酶的克隆与表达往往是了解其功能的首要步骤。以往的基因克隆方法如图位克隆法、转座子标签法等大都是建立在正向遗传学的基础上,这些方法只适用于一个或少数基因,应该说是零敲碎打的策略。水稻基因组测序的完成为在基因组水平上开展水稻激酶功能研究提供了必要条件,也为大规模的克隆水稻激酶基因提供了可能。本试验根据反向遗传学原理,利用已公布的水稻蛋白激酶序列设计引物,用PCR方法扩增水稻蛋白激酶的编码序列,再利用酵母的同源重组系统,将激酶基因克隆到酵母表达载体pEGH上,经验证后将含有重组子的克隆进行诱导,表达激酶蛋白质,并对表达的激酶进行了初步活性分析。通过对试验结果的分析,得出以下结论: 在本试验中,为了使水稻蛋白激酶能在体外进行表达,对水稻的激酶序列进行分析后,选取了基因内部不含内元,以及不含跨膜结构的激酶序列设计引物,共设计并合成了水稻激酶特异性引物30对;利用PCR反应得到了26个水稻蛋白激酶的编码序列;为了提高同源重组的效率,降低引物合成的成本,试验采用两次PCR方法使重组位点达到50bp,明显提高了转化效率;利用酵母的同源重组系统将这26个PCR产物转入酵母,最终23个发生了重组;以半乳糖为诱导物进行诱导,这23个激酶在酵母中都有不同程度的表达;此外,本试验还对这23个激酶蛋白质进行了初步活性分析,其中9个有自我磷酸化活性。这些工作的完成为抗体制备、激酶底物的筛选等研究奠定了基础,也为高通量克隆表达水稻蛋白建立了一个有效的系统。本试验建立的规模化克隆与表达水稻蛋白激酶的技术体系,也为其它功能基因的大规模研究提供了参考。

关键词：水稻蛋白激酶同源重组克隆表达自我磷酸化

对虾白斑综合症病毒(WSSV)蛋白激酶wsv083的初步研究

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中国农学通报 2015年第23期31卷 30-35页

作者：秦崇涛杨丰福建中医药大学中西医结合学院福州350122 国家海洋局第三海洋研究所海洋生物遗传资源重点实验室福建厦门361005

为探讨VP19和VP28是否由蛋白激酶wsv083催化发生磷酸化,将wsv083、VP19和VP28分别进行原核表达。将wsv083蛋白、wsv083表达菌株的裂解液上清以及去磷酸化的wsv083蛋白分别和2种膜蛋白相互作用,以及将wsv083、VP19和VP28的表达质粒共转... 详细信息

为探讨VP19和VP28是否由蛋白激酶wsv083催化发生磷酸化,将wsv083、VP19和VP28分别进行原核表达。将wsv083蛋白、wsv083表达菌株的裂解液上清以及去磷酸化的wsv083蛋白分别和2种膜蛋白相互作用,以及将wsv083、VP19和VP28的表达质粒共转化至同一菌株中进行表达。结果均未能发现VP19和VP28被磷酸化,但发现wsv083蛋白自身具有苏氨酸和酪氨酸磷酸化的现象。改变wsv083表达质粒,wsv083蛋白同样出现了磷酸化现象。而在将wsv083的序列改变使其失去激酶活性后,表达出的wsv083蛋白不再具有磷酸化的现象。因此认为VP19和VP28的磷酸化不是由wsv083催化产生,wsv083能够自我磷酸化。

关键词： WSSV 蛋白激酶自我磷酸化 VP19 VP28