检索结果-南通市图书馆

作者：滕振雷华中农业大学

学位级别：硕士

硒是鱼类的必需微量元素,日粮中硒的缺乏或过量均会影响鱼类的生长。目前包括二倍体虹鳟(Oncorhychus mykiss)在内的许多鱼类的硒需求量已经被广泛报道,但是很少有研究关注三倍体虹鳟对日粮硒的响应以及需求量。研究表明,不同倍型的养... 详细信息

硒是鱼类的必需微量元素,日粮中硒的缺乏或过量均会影响鱼类的生长。目前包括二倍体虹鳟(Oncorhychus mykiss)在内的许多鱼类的硒需求量已经被广泛报道,但是很少有研究关注三倍体虹鳟对日粮硒的响应以及需求量。研究表明,不同倍型的养殖鱼类在营养需求和饲料利用上可能存在差异。本研究探讨了三倍体虹鳟的硒需求量以及日粮硒水平对其躯体生长的影响。鱼体的生长主要取决于肌肉生长,蛋白质在肌肉组织中的沉积速率可能是决定鱼体生长的主要因素。有证据表明,日粮硒水平对鱼类肌肉蛋白质自噬性降解系统具有显著影响。因此,本研究也从肌肉蛋白质自噬性降解的角度探讨了硒影响虹鳟肌肉生长的可能机制。本研究主要分为两个部分:(1)以酵母硒为硒源,通过向低硒基础日粮中添加0(Se0)、0.1(Se0.1)、0.3(Se0.3)、0.5(Se0.5)、1.0(Se1.0)、4.0(Se4.0)和16.0(Se16.0)mg/kg的硒,综合评估三倍体虹鳟的日粮硒需求量及其机体硒状态对日粮硒水平的响应;(2)研究不同硒状态(缺硒、足量硒和过量硒)对虹鳟肌肉生长及蛋白质自噬性降解的影响,并进一步从蛋白质降解的视角来探究硒影响虹鳟肌肉生长的内在调控机制。主要研究结果如下:1.三倍体虹鳟日粮硒需求量和机体硒状态的研究10周的养殖实验结束后,对三倍体虹鳟生长性能、硒蛋白m RNA水平、组织氧化状态以及肌肉营养成分进行分析,结果表明硒的缺乏和过量均不利于其生长。日粮硒在三倍体虹鳟肝脏和肌肉中的蓄积呈线性趋势,并且肝脏的硒沉积量远高于肌肉。在肌肉营养组成方面,饲喂Se4.0日粮的虹鳟肌肉粗蛋白含量显著高于Se0、Se0.1和Se16.0组。通过对虹鳟肝脏和肌肉中28个硒蛋白基因的表达水平进行分析,日粮中4.0和16.0 mg/kg的硒添加显著提高了肝脏中10个硒蛋白基因和肌肉中9个硒蛋白基因的m RNA水平。对肝脏和肌肉中差异表达的硒蛋白基因的m RNA水平进行S型曲线回归分析,发现使肌肉中所有硒蛋白基因转录物丰度达到最大的最低日粮硒需求量为2.19 mg/kg,而肝脏中为1.28 mg/kg。这表明当日粮硒水平大于2.19或1.28 mg/kg时,可以分别满足虹鳟肌肉或肝脏对硒蛋白的合成需求。生长性能通常被用作评估鱼类硒需求量的指标,本研究中Se4.0组虹鳟的生长性能和抗氧化能力相比于饲喂Se16.0和Se0日粮的虹鳟显著升高。对饲喂不同日粮硒水平的三倍体虹鳟增重率进行折线回归分析,发现使三倍体虹鳟达到最大生长速率的日粮硒需求量为3.53 mg/kg。综合本实验的结果,确定了虹鳟机体硒状态对日粮硒水平的响应情况:饲喂Se0日粮的虹鳟处于缺硒状态;饲喂Se4.0日粮的虹鳟处于足量硒状态;饲喂Se16.0日粮的虹鳟处于过量硒状态。2.机体硒状态对虹鳟肌肉蛋白质自噬性降解的影响及机制研究根据前期实验确定的虹鳟机体硒状态与日粮硒水平的关系,进一步研究了机体硒状态对虹鳟肌肉自噬水平及其上游调节通路的影响。首先对三种硒状态(缺硒、足量硒和过量硒)下虹鳟泄殖孔水平横截面白肌纤维切片进行统计分析,发现不同硒状态的虹鳟泄殖孔水平横截面白肌的肌纤维数目没有显著差异,但是缺硒和过量硒状态组的虹鳟肌纤维直径显著低于足量硒状态组。此外,硒状态显著影响了虹鳟肌肉的粗蛋白和总硒含量,并且足量硒状态组虹鳟肌肉的粗蛋白含量最高,我们推论机体硒状态可能通过影响肌肉蛋白质的沉积来调控虹鳟肌肉生长。结合本实验室的前期研究基础,我们检测了不同硒状态下虹鳟肌肉的自噬相关基因(Atg)表达和自噬标志物(微管相关蛋白轻链3(LC3)和P62)水平。结果显示,肌肉中许多自噬相关基因(Atg4b、Atg12l、LC3B、Atg13、Atg7、Atg5)的表达量在缺硒和过量硒状态组显著升高,并且缺硒和过量硒状态组虹鳟的肌肉自噬标志物LC3-II水平显著升高,P62蛋白含量显著降低,这表明缺硒和过量硒状态组虹鳟肌肉的自噬水平相对于足量硒状态组显著提高。对自噬的上游调节通路——蛋白激酶B-雷帕霉素靶蛋白(Akt-TOR)通路进行了检测,发现缺硒和过量硒状态显著抑制了虹鳟肌肉中Akt和TOR的磷酸化水平,降低了Akt-TOR通路的活性。对腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPKα)的磷酸化分析也表明,缺硒和过量硒状态下虹鳟肌肉的AMPK活性显著升高。本研究表明,缺硒和过量硒状态促进了虹鳟肌肉的自噬水平,导致其肌肉生长和蛋白质沉积受到抑制。根据对肌肉自噬性降解相关通路的检测结果,我们推论Akt-TOR和AMPK通路可能是硒状态影响虹鳟肌肉自噬的潜在途径。此外,缺硒和过量硒状态下虹鳟肌肉的丙二醛(MDA)和脂质过氧化物(LPO)含量显著升高,肌肉氧化应激加剧,这可能是机体硒状态影响Akt-TOR通路和AMPK通路的一种机制。综上所述,本研究通过折线拟合模型得出了三倍体虹鳟的日粮硒需求量(3.53mg/kg),并确定日粮硒水平与机体硒状态的关

关键词：三倍体虹鳟酵母硒硒状态生长肌肉自噬性降解

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乙型肝炎病毒感染调控细胞自噬的研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2023年第11期43卷 874-880页

作者：魏真李思慧李辰唐海欢林永重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染可导致慢性乙型肝炎、肝硬化和肝细胞癌等一系列严重肝脏疾病,目前仍是全球最严重的公共卫生问题之一。自噬是广泛存在于真核细胞内的一种非常保守的溶酶体依赖降解途径,也是宿主细胞固有免疫... 详细信息

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染可导致慢性乙型肝炎、肝硬化和肝细胞癌等一系列严重肝脏疾病,目前仍是全球最严重的公共卫生问题之一。自噬是广泛存在于真核细胞内的一种非常保守的溶酶体依赖降解途径,也是宿主细胞固有免疫应答的重要组成。HBV生命周期的多个过程(包含病毒复制、成熟和分泌)与细胞自噬密切相关。自噬能调控宿主肝细胞HBV复制、包装与分泌等过程,并参与固有免疫和适应性免疫应答清除HBV。HBV感染能够诱导肝细胞产生较强的自噬反应,并通过相关机制逃逸自噬性降解。本文全面总结近年来HBV感染诱导细胞自噬以及逃逸自噬性降解的最新研究进展,为深入了解HBV感染调控细胞自噬的具体机制以及开发抗HBV治疗新策略提供理论参考。

关键词：乙型肝炎病毒自噬自噬性降解固有免疫适应性免疫

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自噬调节细胞凋亡的机制研究

自噬调节细胞凋亡的机制研究

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作者：王静超浙江大学

学位级别：硕士

凋亡是细胞发生的一种程序性死亡过程,细胞自噬通过吞噬细胞质中不必要的蛋白或受损的细胞器将其分解成氨基酸等小分子物质供细胞循环使用。细胞自噬和凋亡相互调节细胞的多种生理和病理过程,两者之间的相互关系错综复杂。一般来说,与... 详细信息

凋亡是细胞发生的一种程序性死亡过程,细胞自噬通过吞噬细胞质中不必要的蛋白或受损的细胞器将其分解成氨基酸等小分子物质供细胞循环使用。细胞自噬和凋亡相互调节细胞的多种生理和病理过程,两者之间的相互关系错综复杂。一般来说,与细胞凋亡相关的半胱氨酸蛋白酶(Caspase)的激活可以阻断自噬过程,反之自噬的激活又可以阻断细胞的凋亡过程,因此阐明两者之间的分子机制会推进癌症和其他疾病的治疗。通过研究我们发现自噬通过靶向降解NOXA调控细胞凋亡。抑制自噬延长NOXA蛋白的半衰期,从而增加了 NOXA的蛋白水平;NOXA蛋白的累积诱导细胞凋亡,因此可以有效地抑制肿瘤细胞生长,在p53野生型细胞中尤为明显。在NOXA自噬性降解机制研究方面,我们发现外源表达的NOXA与内源性p62发生相互作用,p62绑定NOXA作为自噬底物发生降解,并且NOXA的C端三个赖氨酸残基对其自噬性降解尤为重要。综上所述,我们的研究表明NOXA在细胞自噬和凋亡之间起到了桥梁的作用,同时也表明自噬抑制剂可能是癌症治疗的有效靶点,尤其是对p53野生型癌细胞。

关键词： NOXA 自噬凋亡自噬性降解癌细胞死亡

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自噬影响细胞接触性抑制的作用及机制研究

自噬影响细胞接触性抑制的作用及机制研究

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作者：崔丹蕊浙江大学

学位级别：硕士

自噬是真核细胞内溶酶体依赖的、降解细胞内生物大分子和受损细胞器的分解代谢过程,在控制细胞内物质更新,维持细胞内环境稳态过程中发挥重要作用。自噬功能障碍时,细胞内会积聚大量异常蛋白质和受损细胞器,使细胞生长和代谢机制发生紊... 详细信息

自噬是真核细胞内溶酶体依赖的、降解细胞内生物大分子和受损细胞器的分解代谢过程,在控制细胞内物质更新,维持细胞内环境稳态过程中发挥重要作用。自噬功能障碍时,细胞内会积聚大量异常蛋白质和受损细胞器,使细胞生长和代谢机制发生紊乱,诱发多种人类疾病,如糖尿病、神经退行性疾病和肿瘤等。大量的研究结果显示,自噬对肿瘤的发生具有抑制作用。自噬缺陷引起细胞内p62蛋白、受损的线粒体、蛋白质聚合物和ROS等的累积,导致正常细胞向肿瘤细胞发生转化。肿瘤形成后,肿瘤细胞又能利用自噬对抗应激环境,增强其存活能力,促进肿瘤发展。肿瘤治疗过程中,抑制细胞自噬,能提高肿瘤放疗、化疗的敏感性。目前,自噬对肿瘤发生发展的调节机制研究是肿瘤研究的热点内容。细胞接触性抑制是调控组织生长与创伤修复的重要方式,细胞接触性抑制的丧失是正常细胞向肿瘤细胞转化的标志之一,Hippo-YAP信号通路在调节细胞接触性抑制过程中发挥重要作用。当细胞生长接触时,Hippo信号通路被激活,诱发促生长因子YAP蛋白的泛素化降解,进而抑制细胞生长。Hippo-YAP信号通路异常在多种肿瘤的发生过程中扮演关键角色。本研究中,我们发现野生型(wildtype,WT)的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)在高密度生长接触时表现出生长抑制现象,形成单层细胞。而重要自噬相关基因Atg5敲除的自噬缺陷Atg5-/-MEF细胞在高密度生长接触时,可以层叠生长,形成多层细胞克隆,提示自噬调节细胞接触性抑制作用的可能性。利用CRISPR-Cas9系统,我们又构建了自噬相关基因ATG5和ATG7特异敲除的人胚肾上皮细胞(HEK293),ATG5-/-和ATG7-/-HEK293细胞在高密度生长接触时仍然持续增殖,表现出层叠生长的现象。利用溶酶体抑制剂氯喹(Chloroeuine,CQ)和Class Ⅲ PI3K抑制剂渥曼青霉素(Wortmannin)干扰HEK293细胞的正常自噬过程,发现抑制自噬性降解或抑制自噬发生均能形成明显的多层细胞克隆。进一步研究发现,细胞高密度生长接触时,相较于野生型细胞中YAP蛋白的细胞质定位,Atg5-/-及Atg7-/-细胞中YAP仍明显定位于细胞核中,YAP蛋白水平显著升高,而mRNA水平无差异,提示YAP通过自噬-溶酶体途径降解的可能性。利用CQ抑制细胞自噬性降解,我们发现野生型HEK293中YAP蛋白水平呈现时间和浓度依赖性升高。免疫荧光实验结果显示,YAP能够与自噬泡的标记蛋白LC3共定位。这些结果证明,YAP可通过自噬途径被溶酶体降解。综上所述,我们的研究表明,细胞自噬能够降解促生长因子YAP,调节Hippo-YAP信号通路的活性。自噬功能障碍抑制YAP降解,造成细胞中YAP活性上升,导致正常细胞向肿瘤细胞发生转化,丧失接触性抑制作用。

关键词：细胞自噬细胞接触性抑制 YAP 自噬性降解肿瘤发生

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