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膜联蛋白v与碘化丙啶用于细胞周期特异性凋亡的检测

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中华检验医学杂志 2002年第2期25卷 78-81页

作者：陶德定冷彦覃吉超周晖申漫里余源龚建平华中科技大学同济医学院附属同济医院分子医学中心武汉430030

目的　建立一种新的细胞周期特异性凋亡检测方法。方法　将急性早幼粒细胞白血病细胞株 (HL 60 )分别经喜树碱 (CAM)、紫外线诱导 ,及喜树碱和N 甲苯磺酰基 L 苯基丙氨酸氯甲基酮(TPCK)共同诱导后 ,用异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白v(Ann... 详细信息

目的　建立一种新的细胞周期特异性凋亡检测方法。方法　将急性早幼粒细胞白血病细胞株 (HL 60 )分别经喜树碱 (CAM)、紫外线诱导 ,及喜树碱和N 甲苯磺酰基 L 苯基丙氨酸氯甲基酮(TPCK)共同诱导后 ,用异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白v(Annexinv)进行标记 ,经 1 %不含甲醇的甲醛溶液冰浴固定 ,再用含洋地黄皂苷的碘化丙啶染色液染色后 ,流式细胞术分析凋亡细胞的周期特异性和细胞凋亡率 ,并与DNA链缺口标记法 (TdT)和常规Annexinv法检测结果进行比较。结果　细胞凋亡的周期特异性分析 :膜联蛋白v/碘化丙啶法 (PA法 )和TdT法结果一致 ,CAM和紫外线诱导的细胞凋亡分别发生在S期和G1期 ;CAM和TPCK共同诱导试验显示 ,PA法对早期凋亡具有较高的检测灵敏度 ,TdT法则不能有效检测 ;而常规Annexinv法无法进行凋亡细胞的周期特异性分析。细胞凋亡率的检测 :HL 60经CAM、紫外线、CAM与TPCK三种方法诱导后 ,PA法检测凋亡率的结果 (1 7 3 %、34 .7%、35 .9% )与常规Annexinv法的检测结果 (1 8.1 %、35 .6 %、37.0 % )一致 (P >0 .0 5) ,而TdT法(1 0 .7%、1 9.5 %、- )则明显偏低 (P <0 .0 1 )。结论　PA法可以用于凋亡细胞周期特异性检测 ,其稳定、可靠。

关键词：流式细胞术细胞周期膜联蛋白v DNA链缺口标记法碘化丙啶细胞凋亡

生物素化膜联蛋白v的构建及在细胞凋亡研究中的应用

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1999年第2期31卷 16+18-20+17页

作者：孙建新陈哲宇由振东吴祥甫中国科学院上海生物化学研究所

我们利用基因工程的方法在大肠杆菌中制备了生物素化的膜联蛋白Ｖ。为此，我们构建了膜联蛋白Ｖ与乙酰Ｃ０Ａ羧化酶生物素受体肽ＢＣＣＰ８７的融合基因，并在大肠杆菌中进行了表达。表达产物经ＨＰＬＣ检测，我们发现大约有６０％的融... 详细信息

我们利用基因工程的方法在大肠杆菌中制备了生物素化的膜联蛋白Ｖ。为此，我们构建了膜联蛋白Ｖ与乙酰Ｃ０Ａ羧化酶生物素受体肽ＢＣＣＰ８７的融合基因，并在大肠杆菌中进行了表达。表达产物经ＨＰＬＣ检测，我们发现大约有６０％的融合表达产物在大肠杆菌体内进行了生物素化。生物素化的膜联蛋白Ｖ经抗生物素蛋白（ａｖｉｄｉｎ）亲和层析纯化后用于吗啡诱导的下丘脑神经元细胞的凋亡检测，取得了理想的结果。

关键词：膜联蛋白v 生物素化大肠杆菌细胞凋亡

膜联蛋白v流式细胞术在肝细胞损害研究中的应用

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中华肝脏病杂志 2001年第S1期9卷 24-26页

作者：武凡康格非蒋纪恺重庆医科大学检验系 046000

目的用膜联蛋白Ｖ（ＡｎｎｅｘｉｎＶ）法和碘化吡啶（ＰＩ）法两种流式细胞术定量检测肝细胞凋亡，作出应用评价，并用此方法探讨三七皂甙Ｒｇ１、Ｒｂ１对急性肝损害的保护作用。方法用ＡｎｎｅｘｉｎＶ法和ＰＩ法检测脂多糖所致... 详细信息

目的用膜联蛋白Ｖ（ＡｎｎｅｘｉｎＶ）法和碘化吡啶（ＰＩ）法两种流式细胞术定量检测肝细胞凋亡，作出应用评价，并用此方法探讨三七皂甙Ｒｇ１、Ｒｂ１对急性肝损害的保护作用。方法用ＡｎｎｅｘｉｎＶ法和ＰＩ法检测脂多糖所致急性肝损害和Ｒｇ１、Ｒｂ１对肝损害的保护作用。用３Ｈ标记油酸法检测分泌型磷脂酶Ａ２的活性。结果（ｌ）与ＰＩ染色法比，ＡｎｎｅｘｉｎＶ法有更高的灵敏度和特异性，且仅用此法既能将正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞区分开。（２）Ｒｇ１、Ｒｂ１可明显降低脂多糖所致的大鼠急性肝损伤的凋亡率和坏死率（Ｐ＜０．０１），可明显降低ｓＰＬＡ２的活性（Ｐ＜０．０１）。结论（１）ＡｎｎｅｘｉｎＶ法是理想的定量检测凋亡细胞的方法。（２）Ｒｇ１、Ｒｂ１可保护ＬＰＳ所致的大鼠急性肝损害。

关键词：肝损害脱噬作用膜联蛋白v 碘化吡啶

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突变型人膜联蛋白v的重组表达

中国医学科学院学报 2006年第4期28卷 549-552页

作者：蔡炯李方张迎强郑连芳蒲圻中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院核医学科北京100730

目的将人膜联蛋白v基因突变后转化入毕赤酵母重组表达，从培养液中纯化出具有内在金属螫合位点的活性突变型人膜联蛋白v。方法应用特异引物将天然人膜联蛋白v基因的5’和3’端进行突变改造，将突变型膜联蛋白v基因插入到pPIC9K质粒并... 详细信息

目的将人膜联蛋白v基因突变后转化入毕赤酵母重组表达，从培养液中纯化出具有内在金属螫合位点的活性突变型人膜联蛋白v。方法应用特异引物将天然人膜联蛋白v基因的5’和3’端进行突变改造，将突变型膜联蛋白v基因插入到pPIC9K质粒并进行基因测序鉴定。将正确连接的表达质粒线性化后用电穿孔法转化到毕赤酵母GS115中。通过MD平板筛选转化子、BMGY培养基培养、甲醇诱导表达目的蛋白质。培养物经过离心获取上清液，用SDS-PAGE和银染分析蛋白质的表达情况，通过外露磷脂酰丝氨酸的红细胞和异硫氰酸荧光素标记膜联蛋白v测定上清液中突变型人膜联蛋白v的结合活性。结果天然人膜联蛋白v基因5’端融合GCAGCGGCTGCGGCCAT编码序列，3’端946-948位TGT突变为AGC。毕赤酵母转化子分泌产生相对分子质量为36000的蛋白质，其半数抑制浓度为4nmol/L。结论利用毕赤酵母系统表达出高活性的、具有内在金属螫合位点的突变型人膜联蛋白v。

关键词：膜联蛋白v 突变表达毕赤酵母

膜联蛋白v cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1999年第2期31卷 55-58页

作者：孙建新沈小川吴祥甫中国科学院上海生物化学研究所

利用ＲＴＰＣＲ技术成功地从人胎盘组织中克隆了膜联蛋白（ａｎｎｅｘｉｎ）Ｖ的ｃＤＮＡ，测序分析表明，与文献报道的核苷酸序列完全一致。将膜联蛋白Ｖ的ｃＤＮＡ克隆进Ｔ７启动子控制下的表达质粒ｐＥＴ２４ａ（＋）中，转化大... 详细信息

利用ＲＴＰＣＲ技术成功地从人胎盘组织中克隆了膜联蛋白（ａｎｎｅｘｉｎ）Ｖ的ｃＤＮＡ，测序分析表明，与文献报道的核苷酸序列完全一致。将膜联蛋白Ｖ的ｃＤＮＡ克隆进Ｔ７启动子控制下的表达质粒ｐＥＴ２４ａ（＋）中，转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）后，经ＩＰＴＧ诱导可高效表达分子量为３６ｋＤ的膜联蛋白Ｖ蛋白，表达产物以可溶形式存在。表达产物占菌体总蛋白的３８％左右。表达产物经肝素亲和层析纯化后具有明显的延长部分凝血活酶时间的作用。

关键词：膜联蛋白v RT-PCR 克隆表达抗凝活性

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人胎盘膜联蛋白v cDNA的克隆及检测

北京师范大学学报（自然科学版） 2007年第4期43卷 438-441页

作者：张鑫蕊井健北京师范大学生命科学学院北京100875

提取新鲜人胎盘组织的总RNA,利用RT-PCR技术扩增出膜联蛋白v(Annexin v)基因的编码序列,将扩增产物克隆到真核表达载体pCMv5并转化到大肠杆菌DH5α中.对重组质粒进行DNA测序,其测序结果完全正确.成功地从人胎盘组织中克隆出Annexin v的... 详细信息

提取新鲜人胎盘组织的总RNA,利用RT-PCR技术扩增出膜联蛋白v(Annexin v)基因的编码序列,将扩增产物克隆到真核表达载体pCMv5并转化到大肠杆菌DH5α中.对重组质粒进行DNA测序,其测序结果完全正确.成功地从人胎盘组织中克隆出Annexin v的全长基因并构建了该基因的真核表达载体,为今后该基因的表达及其生理作用的研究奠定了基础.

关键词：膜联蛋白v RT-PCR 真核表达载体抗凝血

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人膜联蛋白v的重组表达与细胞凋亡显像

基础医学与临床 2006年第8期26卷 913-914页

作者：蔡炯李方郑连芳张迎强蒲圻王世真中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院核医学科北京100730

移植肿瘤模型的研究表明,化疗和放疗对肿瘤的杀伤效应是通过对细胞凋亡过程的迅速诱导来实现的[1].……

关键词：膜联蛋白v 细胞凋亡重组表达细胞膜磷脂程序性细胞死亡显像磷脂酰丝氨酸脂质双层结构

钙滴定法测定^(99m)Tc定点标记膜联蛋白v的亲和力

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基础医学与临床 2010年第5期30卷 534-537页

作者：蔡炯李方牛娜王世真中国医学科学院北京协和医院核医学科北京100730

目的测定一种新型99mTc定点标记膜联蛋白v与磷脂酰丝氨酸(PS)外翻红细胞的结合亲和力。方法通过毕赤酵母的培养和甲醇诱导表达获得带有金属螯合位点的膜联蛋白v;用超滤的方法纯化膜联蛋白v;用葡庚糖酸钠和氯化亚锡还原将99mTc定点标记... 详细信息

目的测定一种新型99mTc定点标记膜联蛋白v与磷脂酰丝氨酸(PS)外翻红细胞的结合亲和力。方法通过毕赤酵母的培养和甲醇诱导表达获得带有金属螯合位点的膜联蛋白v;用超滤的方法纯化膜联蛋白v;用葡庚糖酸钠和氯化亚锡还原将99mTc定点标记于膜联蛋白v氨基末端。采用不同浓度钙离子滴定放射性膜联蛋白v结合磷脂酰丝氨酸外翻红细胞的亲和力。结果在不同的蛋白质分子/细胞比值下测定出的半数标记蛋白结合细胞的钙离子浓度是不同的,在低蛋白质分子/细胞比值下测定出99mTc-膜联蛋白v对细胞的亲和力pK=33.4。结论毕赤酵母系统重组表达的膜联蛋白v具有较高的结合外露PS红细胞的能力。

关键词：膜联蛋白v 亲和力 ^99mTc 毕赤酵母磷脂酰丝氨酸

丹皮酚对高血压病血瘀证患者血清干预的人脐静脉内皮细胞膜联蛋白v与肌动蛋白结合的影响

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中华中医药杂志 2015年第12期30卷 4458-4461页

作者：王华强陈利国孙喜稳王盛飞李晴浙江省丽水市中医院丽水323000 暨南大学医学院广州510632 广州中医药大学中药学院广州510006 暨南大学附属第一医院东圃分院广州510630 广东省中医院广州510120

目的:研究丹皮酚对高血压病血瘀证患者血清损伤后的血管内皮细胞(vEC)的膜联蛋白v与肌动蛋白结合的表达的影响,进一步探讨丹皮酚保护vEC的作用机制。方法:运用CCK-8法检测丹皮酚不同浓度25、50、100、250、500、1 000mg/L对人脐静脉内... 详细信息

目的:研究丹皮酚对高血压病血瘀证患者血清损伤后的血管内皮细胞(vEC)的膜联蛋白v与肌动蛋白结合的表达的影响,进一步探讨丹皮酚保护vEC的作用机制。方法:运用CCK-8法检测丹皮酚不同浓度25、50、100、250、500、1 000mg/L对人脐静脉内皮细胞活性的影响;选用250mg/L浓度的丹皮酚预干预细胞模型,运用免疫印记杂交技术检测丹皮酚组与对照组膜联蛋白v与肌动蛋白结合的表达。结果:丹皮酚不同浓度对细胞活性的影响:不同浓度组之间比较,差异无统计学意义。250mg/L丹皮酚干预后对与肌动蛋白结合的膜联蛋白v表达的影响:模型对照组、丹皮酚组与肌动蛋白结合的膜联蛋白v的表达逐渐降低,其中每组与肌动蛋白结合的膜联蛋白v的表达呈现血瘀证组、非血瘀证组、正常组逐渐降低的趋势。血瘀证组,丹皮酚组与模型对照组比较,差异有统计学意义(P蛋白G/F含量比值的方式,减少膜联蛋白v与肌动蛋白的结合,促进肌动蛋白的重装。

关键词：高血压病血瘀证血管内皮损伤膜联蛋白v 肌动蛋白