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尿道致病性大肠埃希菌感染对人膀胱上皮细胞基因表达谱的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第11期30卷 998-1003页

作者：葛新陈锦英姚萍谷超赵凤玲天津医科大学基础医学院微生物学教研室 300070 武警医学院微生物学教研室天津300162

目的研究尿道致病性大肠埃希菌（UPEC）菌株132与人膀胱上皮EJ细胞的相互作用,分析该菌株感染对EJ细胞基因表达谱的改变.方法 UPEC132感染EJ细胞,用倒置显微镜观察细菌与细胞的黏附,计算黏附率,并通过激光共聚焦显微镜观察UPEC132对细... 详细信息

目的研究尿道致病性大肠埃希菌（UPEC）菌株132与人膀胱上皮EJ细胞的相互作用,分析该菌株感染对EJ细胞基因表达谱的改变.方法 UPEC132感染EJ细胞,用倒置显微镜观察细菌与细胞的黏附,计算黏附率,并通过激光共聚焦显微镜观察UPEC132对细胞的侵袭.感染UPEC132的EJ细胞与未经细菌感染的细胞提取总RNA,用人类全基因组寡核苷酸微阵列芯片分析差异表达基因,并采用RT-PCR对基因芯片数据进行验证.结果 UPEC132能够黏附于EJ细胞表面,黏附率为（73.20±5.26）% 激光共聚焦显微镜观察发现部分细菌位于细胞内部,证实该菌对EJ细胞具有侵袭性.UPEC132感染后的EJ细胞与未经感染的细胞相比,共有28个基因上调,1个基因下调,主要涉及细胞增殖、炎症反应、细胞凋亡等相关基因.结论 UPEC与尿路上皮细胞的相互作用激活宿主细胞内部多种应答反应与信号转导途径,本研究为深入探索UPEC致病机制奠定基础.

关键词：尿道致病性大肠埃希菌基因表达膀胱上皮细胞基因芯片

膀胱上皮细胞与致病菌相互作用及其抗菌机理的研究

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膀胱上皮细胞与致病菌相互作用及其抗菌机理的研究

作者：魏桂花四川大学

学位级别：硕士

机体的免疫系统分为天然免疫和获得性免疫，它们共同作用使得机体在复杂的外环境中维持正常生命过程，其中天然免疫这个古老的免疫系统在对抗病原微生物感染过程中的作用日益引起人们的关注。上皮细胞是天然免疫的重要组成部分，也是机... 详细信息

机体的免疫系统分为天然免疫和获得性免疫，它们共同作用使得机体在复杂的外环境中维持正常生命过程，其中天然免疫这个古老的免疫系统在对抗病原微生物感染过程中的作用日益引起人们的关注。上皮细胞是天然免疫的重要组成部分，也是机体抵御外来致病菌的首要防线。上皮细胞有复杂的免疫防御及炎症反应机制，涉及一系列复杂的炎症信号转导和基因表达及调控机制。致病菌与上皮细胞长期接触，相互之间形成了复杂的入侵与抗感染机制。尿路致病性大肠杆菌是引起尿路反复感染的主要致病菌。尿路感染被认为是急性的、自限性疾病。首次发作之后，可在数月内反复发生。体内外实验都表明，尿路致病性大肠杆菌可以诱发尿路感染。本实验用细胞实验模型观察大肠杆菌进入膀胱上皮细胞后，在细胞内的动态变化，以了解膀胱粘膜天然免疫抵御微生物入侵的作用。实验中使用了299和K12两株细菌大肠杆菌，感染人膀胱移形上皮细胞T24，在实验的4、24、48小时，用TritonX-100裂解细胞，裂解液涂布细菌培养平板，计数菌落。结果表明，随着时间的推移，胞内的大肠杆菌数量显著减少，说明膀胱上皮细胞在清除大肠杆菌方面，可以积极发挥防御功能。这可能是机体抵御微生物入侵的一个重要防御机制。微生物的致病机制十分复杂，涉及到微生物与机体双方的相

关键词：膀胱上皮细胞大肠杆菌肺炎克雷伯杆菌抗菌作用活性氧

针灸通过调节Hcn1通道蛋白及膀胱上皮细胞Ca^(2+)浓度抑制膀胱过度活动症的机制研究

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时珍国医国药 2021年第4期32卷 995-998页

作者：吴林张光彩周晓晖冯琦钒海南省中医院海南海口570300

目的通过观察膀胱过度活动症模型(DO)大鼠中Hcn1通道蛋白及膀胱上皮细胞Ca^(2+)浓度的表达情况,探讨针灸通过调节Hcn1通道蛋白及膀胱上皮细胞Ca^(2+)浓度抑制膀胱过度活动症的机制。方法除正常对照组外,其他两组试验大鼠;膀胱颈结扎法制... 详细信息

目的通过观察膀胱过度活动症模型(DO)大鼠中Hcn1通道蛋白及膀胱上皮细胞Ca^(2+)浓度的表达情况,探讨针灸通过调节Hcn1通道蛋白及膀胱上皮细胞Ca^(2+)浓度抑制膀胱过度活动症的机制。方法除正常对照组外,其他两组试验大鼠;膀胱颈结扎法制备OAB大鼠模型实验大鼠随机分为正常对照组、模型对照组和针灸治疗组。尿动力学检测评估模型构建是否成功;常规生物学方法进行RNA提取质控,后期建库测序,数据分析采用R平台完成;q-PCR和Western blot验证测序结论;无菌条件下分离、培养膀胱上皮细胞,观察细胞Ca^(2+)浓度测定。结果尿动力学检测显示OAB模型构建成功;样本的RNA-seq测序结果及后续q-PCR验证OAB模型大鼠膀胱组织Hcn1离子通道活性降低的;Western blot检测结果证实Hcn1通道蛋白在OAB模型大鼠中的表达被抑制(P膀胱上皮细胞的Ca^(2+)浓度与模型组比较,针灸治疗组的大鼠逼尿肌细胞Ca^(2+)浓度明显减少(P膀胱上皮细胞Ca^(2+)浓度,以达到抑制膀胱过度活动症的效果。

关键词：针灸 Hcn1通道蛋白膀胱上皮细胞 Ca^(2+)浓度膀胱过度活动症

3种抗氧化剂对亚砷酸钠染毒人膀胱上皮细胞血管内皮生长因子表达的拮抗作用研究

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环境与健康杂志 2017年第4期34卷 283-286页

作者：王菲刘婕瑜李梦丹金佩玉席淑华中国医科大学公共卫生学院地球化学性疾病研究室 "砷生物学作用评价及砷中毒防治"辽宁省重点实验室辽宁沈阳110122

目的探讨抗氧化剂褪黑素(melatonin,MEL)、N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl cysteine,NAC)、维生素C(Vitamin,VC)对砷诱导人正常膀胱上皮(SV-HUC-1)细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的拮抗作用。方法将处于对数生长期的SV-HUC-1细胞暴露于含终浓度分别为0(对照)、0.5、1、2、4、8、10μmol/L亚砷酸钠的F12K完全培养基染毒24 h,或者含终浓度分别为4、10μmol/L亚砷酸钠的F12K完全培养基染毒0(对照)、4、12、24、48、72 h;联合暴露组在加入含终浓度分为4μmol/L亚砷酸钠的F12K完全培养基前30 min分别加入1%二甲基亚砜(DMSO)和抗氧化剂MEL、VC、NAC(终浓度分别为0.5、1、1 mmol/L),染毒24 h。分别采用Western blot法和RT-PCR法检测SV-HUC-1细胞VEGF蛋白和mRNA的表达水平。结果 10μmol/L亚砷酸钠染毒组SV-HUC-1细胞VEGF mRNA的表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P细胞VEGF mRNA的表达水平呈上升趋势。与对照组比较,4μmol/L亚砷酸钠染毒12、24、48 h及10μmol/L亚砷酸钠染毒24和48 h后SV-HUC-1细胞VEGF mRNA的表达水平均升高,差异有统计学意义(P细胞VEGF mRNA的表达水平均呈先上升后下降的趋势。与对照组比较,4μmol/L亚砷酸钠+DMSO染毒组SV-HUC-1细胞中VEGF蛋白的表达水平均增加,差异有统计学意义(P细胞中VEGF蛋白的表达水平较高,差异有统计学意义(P细胞中VEGF蛋白的表达水平无明显改变。结论砷能诱导人正常膀胱上皮细胞VEGF表达增加,NAC能增加VEGF表达。

关键词：亚砷酸钠膀胱上皮细胞血管内皮生长因子抗氧化

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新生小鼠膀胱上皮细胞凋亡

中国现代医学杂志 2008年第3期18卷 318-320页

作者：康洁商丘师范学院生命科学系河南商丘476000

目的检测哺乳动物膀胱移行上皮细胞在个体发育时期脱落的机制。方法获取新生2d的小鼠膀胱上皮,做石蜡切片,进行Mallory's染色,普通光学显微镜观察;做冷冻切片,进行DAPI染色和TUNEL处理,荧光显微镜观察;取新生小鼠尿液,离心得细胞,做细... 详细信息

目的检测哺乳动物膀胱移行上皮细胞在个体发育时期脱落的机制。方法获取新生2d的小鼠膀胱上皮,做石蜡切片,进行Mallory's染色,普通光学显微镜观察;做冷冻切片,进行DAPI染色和TUNEL处理,荧光显微镜观察;取新生小鼠尿液,离心得细胞,做细胞涂片,TUNEL处理。结果石蜡切片上看到膀胱上皮有脱落的细胞;冷冻切片上看到膀胱上皮细胞发生了凋亡;尿液细胞涂片上有凋亡的细胞。结论出生2d的小鼠膀胱移行上皮细胞脱落是细胞的程序性死亡。

关键词：新生小鼠膀胱上皮细胞脱落细胞凋亡 DNA断裂原位末端标记

氯胺酮（K粉）在膀胱上皮细胞凋亡中的作用机理研究

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氯胺酮（K粉）在膀胱上皮细胞凋亡中的作用机理研究

作者：黄亮中南大学

学位级别：硕士

目的：通过分析用氯胺酮刺激人膀胱SV-HUC-1细胞后,诱导其发生细胞凋亡,为初步探讨氯胺酮相关性泌尿系统损伤的发病机制提供理论基础。方法：培养人膀胱SV-HUC-1永生化上皮细胞系,用不同浓度(Ommol/L、0.5mmol/L、1mmol/L、2mmol/L)的... 详细信息

目的：通过分析用氯胺酮刺激人膀胱SV-HUC-1细胞后,诱导其发生细胞凋亡,为初步探讨氯胺酮相关性泌尿系统损伤的发病机制提供理论基础。方法：培养人膀胱SV-HUC-1永生化上皮细胞系,用不同浓度(Ommol/L、0.5mmol/L、1mmol/L、2mmol/L)的氯胺酮刺激SV-HUC-1细胞24小时,用Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡率,Western免疫印迹法检测Bax、Bcl-2、pro-caspase-3、Cleaved Caspase-3蛋白表达的相对含量,并选取上述实验中结果最佳的氯胺酮浓度作为下一步实验的工作浓度,继续作用于SV-HUC-1细胞不同的时间后行上述实验。实验数据使用SPSS19.0统计软件进行统计分析。结果：1.氯胺酮对SV-HUC-1细胞凋亡率的影响0mmol/L、0.5mmol/L、1mmol/L、2mmol/L的氯胺酮作用SV-HUC-1细胞24小时后,流式细胞术检测结果显示各组细胞凋亡比率分别为(3.33±0.24)%、(5.16±0.57)%、(9.39±0.52)%、(11.33±0.40)%,各组间比较P值均细胞凋亡率与氯胺酮质量浓度呈正相关(r=0.829,P细胞0h、12h、24h、48h后,流式细胞术检测显示各组细胞凋亡比率分别为(3.72±0.22)%、(6.45±0.32)%、(11.18±0.45)%、(12.24±0.40)%,各组间比较P值均细胞凋亡率与氯胺酮作用时间呈正相关(r=0.762,P细胞Bax、Bcl-2、pro-caspase-3、Cleaved Caspase-3蛋白的表达的影响O mmol/L、0.5mmol/L.1mmol/L.2mmol/L的氯胺酮作用于SV-HUC-1细胞24小时后,Bax和Cleaved Caspase-3蛋白(17KD.19KD)的表达较对照组明显增多,Bax/Bcl-2比值增大(P细胞Oh、12h、24h、48h后,Bax和Cleaved Caspase-3蛋白(17KD.19KD)的表达较对照组增多,Bax/Bcl-2比值增大(P膀胱SV-HUC-1细胞系发生细胞凋亡,并呈浓度依赖性和时间依赖性。说明了氯胺酮可能诱导尿路上皮细胞发生凋亡,导致尿路上皮层变薄或上皮缺损,进一步对上皮下肌层组织造成损害,这可能是氯胺酮相关性泌尿系统损伤,在疾病发病早期的一个重要机制。

关键词：氯胺酮膀胱炎 SV-HUC-1 膀胱上皮细胞细胞凋亡

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膀胱上皮细胞对大肠杆菌抗菌作用观察

四川生理科学杂志 2008年第2期30卷 51-52页

作者：隋鹏诺刘燕翔刘珍赵丽君刘伟刘行海王伯瑶黄宁吴琦四川大学华西医学中心感染免疫研究室四川成都610041

目的:了解膀胱上皮细胞和大肠杆菌的相互作用,观察其对大肠杆菌杀菌作用的动态变化。方法:采用人膀胱上皮细胞株T24和大肠杆菌标准株K12共同孵育,分别与作用后的15分钟、30分钟、60分钟、90分钟、120分钟,用Triton X-100释放粘附在细胞... 详细信息

目的:了解膀胱上皮细胞和大肠杆菌的相互作用,观察其对大肠杆菌杀菌作用的动态变化。方法:采用人膀胱上皮细胞株T24和大肠杆菌标准株K12共同孵育,分别与作用后的15分钟、30分钟、60分钟、90分钟、120分钟,用Triton X-100释放粘附在细胞上及细胞内的活菌,用平板菌落计数法计数活菌数。结果:T24对大肠杆菌K12有杀菌作用,在相互作用15分钟时即表现出来,且在30分钟时杀菌作用最强,与对照组相比细菌减少53%。结论:膀胱上皮细胞对大肠杆菌有杀菌作用,这可能是泌尿道抵抗外来细菌感染的一种天然防御机制。

关键词：膀胱上皮细胞大肠杆菌杀菌作用

Cdx2反转录病毒载体的构建及转染膀胱上皮细胞的研究

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中国组织工程研究 2013年第46期17卷 8024-8029页

作者：林明恩邓毕华吕夷松荣禄姚友生汕头大学医学院第一附属医院泌尿外科广东省汕头市515041 中山大学附属第二医院泌尿外科广东省广州市510120

背景:尾侧型同源转录因子2在消化道尤其是小肠与结肠上皮的发育中起到关键作用。目的:构建尾侧型同源转录因子2反转录病毒表达载体pLNCX2-Cdx2,观察pLNCX2-Cdx2体外转染对人膀胱上皮细胞发生肠上皮化生的作用。方法:应用基因重组技术将... 详细信息

背景:尾侧型同源转录因子2在消化道尤其是小肠与结肠上皮的发育中起到关键作用。目的:构建尾侧型同源转录因子2反转录病毒表达载体pLNCX2-Cdx2,观察pLNCX2-Cdx2体外转染对人膀胱上皮细胞发生肠上皮化生的作用。方法:应用基因重组技术将人尾侧型同源转录因子2cDNA克隆到反转录病毒载体pLXSN2,酶切鉴定,包装到PA317细胞中。转染人膀胱尿路上皮细胞,应用荧光PCR及Western blot检测尾侧型同源转录因子2以及绒毛蛋白、LI-cadherin的表达情况。结果与结论:pLNCX2-Cdx2成功构建;细胞转染后尾侧型同源转录因子2的mRNA及蛋白水平表达明显增加;尾侧型同源转录因子2的过表达明显激活了绒毛蛋白与LI-cadherin的表达;转染后细胞可出现肠细胞样特征改变。结果提示体外尾侧型同源转录因子2过表达可使膀胱上皮细胞发生尾侧型同源转录因子2激活并产生肠上皮分化,从而诱导腺性膀胱炎发生。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验尾侧型同源转录因子2 绒毛蛋白,肝肠钙粘连蛋白肠上皮化生膀胱上皮细胞 LI-cadherin 尿路上皮腺性膀胱炎省级基金

乌药提取物对膀胱过度活动症模型膀胱上皮细胞Ca^(2+)浓度和UPII表达的影响

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中医药临床杂志 2016年第6期28卷 844-848页

作者：谈博江伟雯连大卫许艺飞黄萍操红缨广州中医药大学广东广州510006

目的:观察乌药提取物对膀胱过度活动症(OAB)模型大鼠膀胱上皮细胞生长、Ca2+浓度和UPII表达的影响。方法:膀胱出口梗阻手术复制OAB模型,随机分为OAB模型组、假手术组和乌药提取物组,给药4周后,无菌条件下分离、培养膀胱上皮细胞,观察细... 详细信息

目的:观察乌药提取物对膀胱过度活动症(OAB)模型大鼠膀胱上皮细胞生长、Ca2+浓度和UPII表达的影响。方法:膀胱出口梗阻手术复制OAB模型,随机分为OAB模型组、假手术组和乌药提取物组,给药4周后,无菌条件下分离、培养膀胱上皮细胞,观察细胞形态、生长及增殖过程,并进行HE染色、Ca2+浓度测定和UPII免疫荧光染色。结果:与对照组相比,模型组上皮细胞数量少,细胞生长缓慢,Ca2+浓度增加(P膀胱上皮细胞数量增加,形态正常,Ca2+浓度明显减少(P膀胱上皮细胞生长有改善作用,减少细胞内Ca2+浓度,提高UPII表达。

关键词：乌药提取物膀胱过度活动症膀胱上皮细胞 Ca2+,UPII