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腺苷a2a受体对低氧肺动脉高压大鼠肺血管和肺组织细胞因子信号传导抑制蛋白-3表达的调控作用

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中华结核和呼吸杂志 2016年第6期39卷 469-473页

作者：樊荣黄晓颖杜开颐范云峰王良兴扬州市江都人民医院呼吸内科 225200 温州医科大学附属第一医院呼吸内科

目的探讨腺苷a2a受体（a2aAR）对低氧肺动脉高压大鼠肺血管和肺组织细胞因子信号传导抑制蛋白3（SOCS-3）表达的调控作用.方法 SD大鼠30只按照随机数字表法分为3组：对照组,低氧组,低氧＋a2aAR激动剂组（激动剂组）.低氧组及激动剂组... 详细信息

目的探讨腺苷a2a受体（a2aAR）对低氧肺动脉高压大鼠肺血管和肺组织细胞因子信号传导抑制蛋白3（SOCS-3）表达的调控作用.方法 SD大鼠30只按照随机数字表法分为3组：对照组,低氧组,低氧＋a2aAR激动剂组（激动剂组）.低氧组及激动剂组置入常压低氧舱内,氧浓度控制在8％～ 11％,CO2浓度维持在1％～3％,每天8h（晨8时至16时）,每周6d,连续4周,低氧组入舱前腹腔注射生理盐水4 ml/kg,激动剂组入舱前腹腔注射a2aAR激动剂0.2 mg/kg.造模4周后,有心导管法测定各组大鼠平均肺动脉压（mPAP）、平均颈动脉压（mCAP）,测定右心室/（左心室＋室间隔）厚度[RV/（LV＋S）];观察各组肺细小动脉显微结构变化,测定管壁面积/管总面积（WA/TA）;用免疫组织化学法测定肺细小动脉管壁a2aAR和SOCS-3含量,实时荧光定量PCR法、Western blot法测定肺组织匀浆a2aAR mRNA、SOCS-3 mRNA和a2aAR蛋白、SOCS-3蛋白含量的变化.结果低氧组大鼠mPAP为[（20.9±3.9） mmHg,1 mmHg =0.133 kPa],明显高于对照组[（12.6±6.6） mmHg,P＜0.01],激动剂组mPAP为[（14.8±3.8）mmHg],明显低于低氧组（P＜0.01）.低氧组RV/（LV＋S）为[（35.2±2.0）％],显著高于对照组[（29.6±2.7）％,P＜0.01],激动剂组RV/（LV＋S）为[（28.3±8.8）％],显著低于低氧组（P＜0.01）.低氧组大鼠WA/TA值为73 ±5,显著高于对照组（48±4,p ＜0.01）,激动剂组WA/TA值为54±3,明显低于低氧组（P＜0.01）.低氧组大鼠肺血管a2aAR含量为（0.134±0.034）,SOCS-3含量为（0.119 ±0.011）,两者均高于正常组（P＜0.01）,而激动剂组肺血管a2aAR含量（0.201±0.024）和SOCS-3含量（0.136±0.004）较低氧组进一步升高（p＜0.01）.与对照组相比,低氧组大鼠肺组织a2aAR mRNA和SOCS-3 mRNA表达增加1.5倍,而激动剂组a2aAR mRNA和SOCS-3 mRNA表达增加2倍.同样,低氧组大鼠肺组织a2aAR蛋白和SOCS-3蛋白表达明显高于对照组,而激动剂组两种蛋白的表达进一步上升.结论a2aAR能够上调低氧肺动脉高压大鼠肺血管和肺组织SOCS-3的表达,该通路可能是其抑制低氧性肺动脉高压和低氧性肺血管重建的重要机制.

关键词：高血压肺性低氧腺苷a2a受体细胞因子信号传导抑制蛋白3

腺苷a2a受体和代谢型谷氨酸受体5亚型及其拮抗剂在帕金森病治疗中的作用

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中华老年医学杂志 2010年第3期29卷 259-262页

作者：黄译腺李丹罗蔚锋苏州大学附属第二医院神经内科 215004

长期应用左旋多巴制剂（5～10年）会导致约50％的帕金森病（Parkinson’sdisease，PD）患者出现异动症，称为左旋多巴诱发的异动症（L—DOPAinduceddyskinesia，LID），主要表现为舞蹈症和手足徐动症，严重影响PD患者的日常生活质量。LI... 详细信息

长期应用左旋多巴制剂（5～10年）会导致约50％的帕金森病（Parkinson’sdisease，PD）患者出现异动症，称为左旋多巴诱发的异动症（L—DOPAinduceddyskinesia，LID），主要表现为舞蹈症和手足徐动症，严重影响PD患者的日常生活质量。LID的发生与黑质多巴胺能神经元丢失的严重程度、多巴胺波动性刺激引起的直接通路和间接通路的不平衡、突触结构发生可塑性改变以及年龄等密切相关。

关键词：代谢型谷氨酸受体5 帕金森病腺苷a2a受体拮抗剂左旋多巴制剂治疗亚型多巴胺能

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腺苷a2a受体与神经系统疾病

国际药学研究杂志 2014年第3期41卷 287-290,317页

作者：王美亮俞纲苏瑞斌广西医科大学药学院南宁530021 军事医学科学院毒物药物研究所北京100850

作为一种重要的神经递质,腺苷能通过与细胞膜上的腺苷受体(adenosine receptors,AR)结合而发挥细胞调节作用。AR属于G蛋白偶联受体家族,哺乳动物的AR至少包含A1、a2a、A2B和A3等4个亚型,其中a2a受体与多种临床疾病的发生、发展都有着密... 详细信息

作为一种重要的神经递质,腺苷能通过与细胞膜上的腺苷受体(adenosine receptors,AR)结合而发挥细胞调节作用。AR属于G蛋白偶联受体家族,哺乳动物的AR至少包含A1、a2a、A2B和A3等4个亚型,其中a2a受体与多种临床疾病的发生、发展都有着密切的关系。本文主要综述了a2a受体与多种神经精神疾病之间关系的研究进展,以期为这些疾病的防治研究提供新的线索。

关键词：腺苷a2a受体神经系统

腺苷a2a受体对肺泡上皮细胞钠离子通道α亚基的上调作用

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第三军医大学学报 2010年第12期32卷 1293-1295页

作者：邓旺李长毅王导新重庆医科大学附属第二医院呼吸内科重庆400010

目的研究腺苷a2a受体对肺泡上皮A549细胞钠离子通道α亚基(epithelial sodium channelα-subunit,α-ENaC)表达变化的影响,探讨其在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征中的作用。方法不同剂量(0、0.1、1、10、100μmol/L)和不同时间(0、1、4... 详细信息

目的研究腺苷a2a受体对肺泡上皮A549细胞钠离子通道α亚基(epithelial sodium channelα-subunit,α-ENaC)表达变化的影响,探讨其在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征中的作用。方法不同剂量(0、0.1、1、10、100μmol/L)和不同时间(0、1、4、8、24、48h)的腺苷a2a受体激动剂CGS-21680干预A549细胞,分别用RT-PCR和Western blot检测α-ENaC mRNA和蛋白表达情况。结果①不同剂量CGS-21680作用A549细胞8h后,α-ENaC mRNA和蛋白表达水平从0.1μmol/L开始增加,并与CGS-21680剂量呈正相关(mRNA表达:r=0.959,P21680作用A549细胞1h后,α-ENaC mRNA和蛋白表达水平开始增加,4h后与对照组相比差异具有统计学意义(P腺苷a2a受体能上调α-ENaC的表达,有益于急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的预后。

关键词：腺苷a2a受体上皮细胞钠离子通道α亚基成人呼吸窘迫综合征

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腺苷a2a受体在IL-1β致抑郁中的作用

中华行为医学与脑科学杂志 2010年第6期19卷 569-571页

作者：曹龙龙黄庆军汕头大学医学院精神卫生中心汕头515063

抑郁症是由各种原因引起的以抑郁为主要临床表现的心境障碍或情感障碍.关于抑郁症发病的可能机制主要有单胺耗竭假说、神经可塑性假说、HPA轴功能亢进假说、细胞因子假说、受体假说和第二信使失衡假说等.有众多的研究表明,脑内细胞因子... 详细信息

抑郁症是由各种原因引起的以抑郁为主要临床表现的心境障碍或情感障碍.关于抑郁症发病的可能机制主要有单胺耗竭假说、神经可塑性假说、HPA轴功能亢进假说、细胞因子假说、受体假说和第二信使失衡假说等.有众多的研究表明,脑内细胞因子白介素-1β（interleukin-1 beta,IL-1β）在抑郁的发病过程中发挥重要作用.许多动物实验也提示了脑内IL-1β和腺苷在行为性抑郁发生过程中的作用和机制,如IL-1β介导利血平致大鼠行为性抑郁的过程、腺苷a2a受体介导IL-1β的致大鼠行为性抑郁作用等.本文对于腺苷a2a受体在IL-1β致抑郁中的作用作一综述.

关键词：腺苷a2a受体 IL-1β 抑郁症脑内细胞因子行为性抑郁受体假说白介素-1β 发病过程

腺苷a2a受体对新生小鼠离体延髓脑片基本节律性呼吸放电的调节作用

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郑州大学学报（医学版） 2017年第1期52卷 25-28页

作者：闫思涵刘友才千智斌新乡医学院机能学实验室河南新乡453003 新乡市结核病防治所河南新乡453000 新乡医学院三全学院河南新乡453003

目的:探讨腺苷a2a受体对新生小鼠离体延髓脑片基本节律性呼吸放电(RRDA)的调节作用。方法:制备新生小鼠离体延髓脑片,分别使用含0.0、2.5、5.0、10.0、20.0 nmol/L腺苷a2a受体激动剂CGS21680或拮抗剂SCH58261的人工脑脊液(ACSF)灌流脑片... 详细信息

目的:探讨腺苷a2a受体对新生小鼠离体延髓脑片基本节律性呼吸放电(RRDA)的调节作用。方法:制备新生小鼠离体延髓脑片,分别使用含0.0、2.5、5.0、10.0、20.0 nmol/L腺苷a2a受体激动剂CGS21680或拮抗剂SCH58261的人工脑脊液(ACSF)灌流脑片,每个浓度灌流10 min,在每个浓度灌流第6 min时,使用吸附电极记录脑片RRDA,分析吸气时程(TI)、放电积分幅度(IA)和呼吸周期(RC)。结果:CGS21680可以缩短RC,增加TI和IA(P261则可以延长RC,减小TI和IA(P腺苷a2a受体参与调节新生小鼠延髓RRDA,激活腺苷a2a受体对RRDA有兴奋作用。

关键词：腺苷a2a受体新生小鼠延髓脑片基本节律性呼吸放电

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腺苷a2a受体介导艾灸镇痛作用研究

腺苷A2a受体介导艾灸镇痛作用研究

作者：岳运青成都中医药大学

学位级别：硕士

目的:明确腺苷a2a受体是否参与艾灸的镇痛作用。方法:选取成年雌雄各半C57BL/6J小鼠,筛选出痛阈稳定的小鼠,随机分为空白组、造模组。造模组小鼠给予完全弗氏佐剂(Complete Freund’s adjuvant,CFA)于右足底注射20μL诱导炎症痛模型。... 详细信息

目的:明确腺苷a2a受体是否参与艾灸的镇痛作用。方法:选取成年雌雄各半C57BL/6J小鼠,筛选出痛阈稳定的小鼠,随机分为空白组、造模组。造模组小鼠给予完全弗氏佐剂(Complete Freund’s adjuvant,CFA)于右足底注射20μL诱导炎症痛模型。造模后第4天,将造模组小鼠随机分为模型组、模型+CGS21680(腺苷a2a受体激动剂)组、模型+SCH58261(腺苷a2a受体拮抗剂)组、模灸组、模灸+CGS21680组、模灸+SCH58261组。我们于模型+CGS21680组、模型+SCH58261组小鼠的右侧“足三里”处分别注射CGS21680或SCH58261后,捆绑15 min;于模灸组小鼠“足三里”穴位处行温和灸15 min;于模灸+CGS21680组、模灸+SCH58261组小鼠“足三里”处局部采用激动剂或拮抗剂注射后立即进行温和灸干预,方法同前一致。痛阈测定分别在造模前、造模后第4天(艾灸干预前)、艾灸干预结束后0 min、30 min、60 min、90 min、120 min用PL-200热刺痛仪测定小鼠右后足底中部位置,记录热痛阈值;采用实时荧光定量PCR技术检测下丘脑a2aR mRNA表达;运用SPSS23.0、GraphPad Prism 6统计软件对实验数据进行统计分析处理。结果:1.艾灸“足三里”穴对炎症痛模型小鼠的镇痛效应与空白组比较,模型组小鼠痛阈值在各时间点均降低(P20 min时降至模型组水平。2.激动或拮抗穴位局部腺苷a2a受体对艾灸镇痛效应的影响(1)激动与拮抗“足三里”处腺苷a2a受体对炎症痛小鼠痛阈值的影响:运用CGS21680激动模型鼠“足三里”处腺苷a2a受体后,与模型组比较,热痛阈值下降,在00 min显著降低(P261拮抗模型鼠“足三里”处腺苷a2a受体后,与模型组比较,痛阈升高但维持时间短暂,只在注射后的0 min显著升高(P2)穴位局部腺苷a2a受体激动后的艾灸镇痛效应:(1)与模灸组比较,模灸+CGS21680组在艾灸结束后020 min内痛阈值均显著下降(P2)模灸+CGS21680组灸后30min、90min痛阈较模型+CGS21680组有升高趋势,艾灸后0 min、60 min痛阈值显著升高(P腺苷a2a受体拮抗后的艾灸镇痛效应:(1)与模灸组比较,模灸+SCH58261组痛阈值在艾灸结束后0 min时显著增高(P20 min时降至模型组水平。(2)与模型+SCH58261组比较,模灸+SCH58261组痛阈升高,在灸后0 min时虽低于模型+SCH58261组,但差异无统计学意义(P>0.05),在30 min时高于模型+SCH58261组(P腺苷a2a R mRNA表达的变化结果:与空白组比较,模型组下丘脑腺苷a2aR mRNA表达显著下调(P腺苷a2aR mRNA表达显著上调(P2.局部腺苷a2a受体参与艾灸镇痛;1)激活穴位局部腺苷a2a受体可阻断艾灸镇痛效应;2)拮抗穴位局部腺苷a2a受体可增强艾灸镇痛效应。3.下丘脑腺苷a2a受体可能参与艾灸镇痛。

关键词：艾灸镇痛炎症痛腺苷a2a受体下丘脑

腺苷a2a受体激活后抑制NLRP3信号通路和促进突触发生在治疗焦虑样行为中的药物机理研究

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腺苷A2a受体激活后抑制NLRP3信号通路和促进突触发生在治疗焦虑样...

作者：周兴兰云南大学

学位级别：硕士

背景:焦虑症是一种持续和广泛且难以治愈的心境障碍疾病。目前临床上的抗焦虑药物都存在各自的局限性,因此开发出稳定且安全的抗焦虑药十分有必要。临床研究发现焦虑症可能与神经免疫失调相关,长期异常的中枢神经免疫会增大焦虑症的发... 详细信息

背景:焦虑症是一种持续和广泛且难以治愈的心境障碍疾病。目前临床上的抗焦虑药物都存在各自的局限性,因此开发出稳定且安全的抗焦虑药十分有必要。临床研究发现焦虑症可能与神经免疫失调相关,长期异常的中枢神经免疫会增大焦虑症的发生率。突触发生相关蛋白的异常也和焦虑症密切相关。最近研究发现,腺苷A受体具有免疫调节和调控突触传递的作用,腺苷A受体低表达的小鼠会表现出强烈的焦虑样行为。本课题主要研究腺苷A受体激动剂是否在皮质酮诱导的焦虑样C57BL/6N小鼠模型中具有稳定的抗焦虑作用,且该抗焦虑作用是否是由调节神经免疫和促进突触发生介导的。方法:本课题以雄性C57BL/6N小鼠为实验材料,第一批小鼠分为空白对照组、阳性对照组和3个腺苷A受体激动剂PSB0777剂量组侧脑室给药5五天后高架十字迷宫实验评估腺苷A受体激动剂PSB0777的抗焦虑效果。第二批小鼠侧脑室插管后使用皮质酮进行焦虑样小鼠模型造模3周,选择第一批中抗焦虑效果最显著的腺苷A受体激动剂PSB0777剂量给药五天,同时设置阳性对照与阴性对照;高架十字迷宫实验和旷野实验评估腺苷A受体激动剂PSB0777在皮质酮诱导的焦虑样小鼠模型中的抗焦虑效果;蛋白质印迹实验检测皮质酮诱导的焦虑样小鼠模型前额叶皮层NLRP3信号通路相关因子和炎症因子以及突触发生相关蛋白表达水平。结果:高架十字迷宫实验结果显示连续5天注射腺苷A受体激动剂PSB0777后显著增加中剂量组小鼠在高架十字迷宫开臂活动距离和活动时间;连续5天注射50ng腺苷A受体激动剂PSB0777后显著增加皮质酮诱导的焦虑样小鼠模型在高架十字迷宫开臂活动距离和活动时间;旷野实验结果显示连续5天注射50ng腺苷A受体激动剂PSB0777后显著增加皮质酮诱导的焦虑样小鼠模型在旷野箱中间区活动距离以及活动时间;蛋白质印迹实验结果显示连续5天注射50ng腺苷A受体激动剂PSB0777后逆转皮质酮诱导的焦虑样小鼠模型前额叶皮层NLRP3信号通路相关因子和炎症因子以及突触发生相关蛋白异常表达。结论:腺苷A2R激动剂PSB0777在皮质酮诱导的焦虑样C57BL/6N小鼠中起到稳定的抗焦虑作用,并且抗焦虑作用是通过调节免疫和促进突触发生实现的。

关键词：抗焦虑腺苷a2a受体动物行为学神经免疫突触发生

腺苷a2a受体在肝细胞癌发生发展中的作用及机制研究

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腺苷A2A受体在肝细胞癌发生发展中的作用及机制研究

作者：李风伟中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

研究背景与目的肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一,高居于癌症相关死亡率第三位。全球超过一半的肝细胞癌死亡病例发生在中国。目前肝细胞癌的治疗方法包括手术切除、肝移植、介入治疗、放化疗及靶... 详细信息

研究背景与目的肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一,高居于癌症相关死亡率第三位。全球超过一半的肝细胞癌死亡病例发生在中国。目前肝细胞癌的治疗方法包括手术切除、肝移植、介入治疗、放化疗及靶向治疗。手术切除仍是治疗肝细胞癌的主要治疗方法,然而根治性切除后复发率高、转移率高仍是影响肝细胞癌患者术后预后的主要因素。因此,探索影响肝细胞癌生长、侵袭、转移的因素并针对此开发新的治疗措施,是当今肝细胞癌研究中的重点和难点。腺苷(Adenosine)是合成三磷酸腺苷(Adenosine Triphosphate,ATP)的前体物质,同时,作为腺嘌呤核苷酸代谢的中间产物,腺苷几乎产生于所有的细胞,普遍存在于机体的各个系统。腺苷通过A、A、A和A四种腺苷受体作用于人体各个系统,参与多种生理病理过程的调节。越来越多的证据表明,腺苷对人体的多种疾病的发生过程都有十分重要的调节作用。目前的研究发现,腺苷通过腺苷A受体参与了体内的多个病理生理过程的调节,在肿瘤微环境中亦起到了非常重要的调节作用。肿瘤微环境中的腺苷通过腺苷A受体抑制了免疫细胞对肿瘤的杀伤作用。大量研究报道了选择性腺苷A受体拮抗剂可以重新激活肿瘤组织中的免疫细胞的免疫作用,因此,选择性腺苷A受体拮抗剂有望用于肿瘤的辅助治疗。肿瘤微环境中的腺苷通过腺苷A受体在胸腺瘤、黑色素瘤、非小细胞肺癌、人头颈部鳞状细胞癌中促进肿瘤生长、侵袭和转移的作用已有相关研究报道。目前,国内外尚无有关腺苷A受体在肝细胞癌中的表达及作用的研究报道。本研究拟通过实验研究腺苷A受体在肝癌组织及肝癌细胞中的表达状况,对肝细胞癌的增殖、凋亡、血管生成、侵袭的影响,并结合临床,对腺苷A受体表达水平与患者预后的关系作出分析,并初步探索腺苷A受体的下游信号通路,通过研究,初步探索腺苷A受体在肝细胞癌的发生、进展过程中的作用。研究方法一、肝癌组织和癌旁组织中腺苷A受体的表达水平1、肝癌组织及癌旁组织的收集:所有标本均采集自东方肝胆外科医院手术切除的肝癌及癌旁组织。(经东方肝胆外科医院伦理委员会批准,患者及家属知情并同意)2、肝癌及癌旁组织中腺苷A受体表达水平的检测:运用qRT-PCR、Western Blot免疫印迹检测每一组肝癌及癌旁组织中腺苷A受体表达水平。二、体外检测肝癌细胞株和正常肝细胞株中腺苷A受体表达的水平运用实时定量PCR技术检测腺苷A受体在人肝癌细胞株HepG2和正常肝细胞株L02中的mRNA的表达水平。三、构建腺苷A受体的干扰慢病毒载体并包装慢病毒通过在线软件设计腺苷A受体的基因序列,体外合成后经酶切连接到pds019-pl6.3-SHRNA-BSD质粒载体上,获得质粒CL810DS19-shADORA,经验证,酶切验证测序结果正确。用构建好的腺苷A干扰慢病毒载体CL810DS19-ADORA和包装质粒共转染293T细胞,包装慢病毒,收集病毒液并测定滴度。获得滴度合格的腺苷A受体干扰慢病毒LV478DS19-ADORA。四、建立腺苷A受体稳定低表达肝癌细胞株用包装好的腺苷A受体干扰慢病毒感染HepG2靶细胞,感染72小时后观察到荧光比例分布达到90%以上,同时未观察到大面积细胞死亡的现象,用qRT-PCR技术检测腺苷A受体在两组中的表达水平,结果表明,实验组的腺苷A受体mRNA水平较对照组明显降低,沉默效率>70%。说明所构建的慢病毒对腺苷A受体表达的干扰效果好,可以用于研究腺苷A受体的功能及机制的实验。五、体外检测腺苷A受体对肝癌细胞株生物学行为的影响为了检测腺苷A受体对肝癌细胞株生物学行为的影响我们将通过质粒转染沉默表达腺苷A受体的肝癌细胞设置为实验组(shA组),将转染无序序列质粒的肝癌细胞设置为阴性对照组(NC组),将没有转染任何序列和质粒的肝癌细胞设置为空白对照组(KB组)。我们的预实验结果显示,腺苷在100μM浓度时,对肝癌细胞的促增殖、促侵袭、抗凋亡等作用最强,因此为研究腺苷对肝癌细胞生物学行为的影响,我们同时将三组细胞加入到100μM浓度的腺苷中,观察在100μM的腺苷环境中,肝癌细胞各种生物学行为的变化。因此同时设置了shA+adenosine组、NC+adenosine组和KB+adenosine组。一共有6组细胞进行体外细胞实验。1、腺苷A受体沉默对肝癌细胞株增殖的影响:CCK-8法检测六组细胞在培养24小时、48小时、72小时和96小时480nm处的相对吸光度值(OD值),并绘制相对吸光度曲线。2、腺苷A受体沉默对细胞凋亡的影响:将六组细胞Annexin V和7-AAD细胞染色后,用流式细胞仪检测其凋亡发生的比例。3、腺苷A受体沉默后对VEGF表达的影响:qRT-PCR检测六组细胞VEGFmRNA的表达量。4、腺苷A受体沉默对血管生成

关键词：肝细胞癌腺苷a2a受体细胞增殖细胞凋亡血管生成信号转导通路