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不同氧分压暴露对小鼠脑和肺组织腺苷代谢通路分子及相关酶表达的影响

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中华航海医学与高气压医学杂志 2022年第3期29卷 321-325,335页

作者：刘颖官振标刘文武烟台市烟台山医院病理科烟台264001 海军军医大学附属长海医院呼吸与危重症医学科上海200433 海军特色医学中心潜水与高气压医学研究室上海200433

目的:探讨不同氧分压暴露对小鼠脑和肺组织内腺苷代谢相关分子含量及酶表达的影响。方法:36只雄性小鼠随机分为对照组、高氧性肺损伤(HILI)组和急性氧中毒(ACOT)组,每组12只。对照组仅暴露于常压空气中;HILI组动物暴露于0.25 MPa(2.5 A... 详细信息

目的:探讨不同氧分压暴露对小鼠脑和肺组织内腺苷代谢相关分子含量及酶表达的影响。方法:36只雄性小鼠随机分为对照组、高氧性肺损伤(HILI)组和急性氧中毒(ACOT)组,每组12只。对照组仅暴露于常压空气中;HILI组动物暴露于0.25 MPa(2.5 ATA)氧分压下6 h;ACOT组动物暴露于0.40 MPa(4.0 ATA)氧分压下30 min。暴露结束后即刻,动物腹腔麻醉后取肺组织和脑组织,采用高效液相检测三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、单磷酸腺苷(AMP)和腺苷(Ado)含量;采用Western blotting检测CD37、腺苷脱氨酶(ADA)和腺苷激酶(ADK)蛋白表达。结果:不同氧分压暴露可一定程度升高动物肺和脑组织内的腺苷含量,这可能与高分压氧暴露后上调腺苷合成相关酶、抑制腺苷分解相关酶的表达有关。ACOT组脑组织的变化小于肺组织。结论:不同水平的氧分压暴露会影响腺苷代谢通路,增加肺和脑内的腺苷含量,可能作为一个保护机制对抗高分压氧的不良影响。

关键词：氧中毒肺脑腺苷腺苷脱氨酶腺苷激酶

过表达腺苷生物合成正相关基因GlPNP提高灵芝腺苷的含量

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微生物学通报 2023年第10期50卷 4401-4412页

作者：朱亚婷肖郑鹏周佳丽余贞刘腾袁姣康信聪刘东波湖南农业大学园艺学院湖南长沙410128 国家中医药管理局亚健康干预技术实验室湖南长沙410128 湖南作物种质创新与资源利用重点实验室湖南长沙410128 植物功能成分利用省部共建协同创新中心湖南长沙410128

【背景】灵芝被纳入我国“药食同源”试点名单,腺苷作为其主要活性物质之一,在免疫调节、抗炎、抗癌等方面发挥着重要作用。【目的】调控腺苷生物合成关键酶基因的表达来提高灵芝腺苷产量。【方法】将不同培养时间阶段腺苷合成酶基因(包... 详细信息

【背景】灵芝被纳入我国“药食同源”试点名单,腺苷作为其主要活性物质之一,在免疫调节、抗炎、抗癌等方面发挥着重要作用。【目的】调控腺苷生物合成关键酶基因的表达来提高灵芝腺苷产量。【方法】将不同培养时间阶段腺苷合成酶基因(包括5-氨基咪唑-4-甲酰胺核糖核苷酸甲酰转移酶GlATIC、嘌呤核苷磷酸化酶GlPNP、腺苷激酶GlADK)的表达量与腺苷含量相关联,筛选出与灵芝腺苷含量呈正相关的关键酶基因。克隆关键酶基因并在灵芝中过表达,探究关键酶基因过表达对灵芝腺苷积累的影响。【结果】GlPNP的表达与灵芝腺苷含量呈正相关。GlPNP的cDNA全长为969 bp,预测GlPNP蛋白的相对分子量为34.6 kDa,呈三聚体的四元结构。研究结果表明,过表达菌株中GlPNP的表达量在第4天比野生型菌株(WT)上调了2.9-3.9倍,与含空载体的菌株(CK)相比,腺苷含量分别提高了78%和63%。【结论】过表达嘌呤核苷磷酸化酶是提高灵芝腺苷产量的一种有效手段。

关键词：灵芝腺苷嘌呤核苷磷酸化酶过表达

腺苷、AMP及AMPK对母猪胎盘及繁殖性能影响的研究进展

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饲料研究 2022年第14期45卷 136-141页

作者：梁华锦简仕燕邓百川华南农业大学动物科学学院广东广州510642

随着母猪产仔数增加,仔猪断奶前死亡率也在增加,严重降低了母猪的繁殖性能。仔猪初生重是影响仔猪断奶前死亡率的重要因素之一,而胎盘对调控仔猪初生重尤为重要。因此,加强对已有营养调控物质的探究、研发新的营养策略对提高母猪繁殖性... 详细信息

随着母猪产仔数增加,仔猪断奶前死亡率也在增加,严重降低了母猪的繁殖性能。仔猪初生重是影响仔猪断奶前死亡率的重要因素之一,而胎盘对调控仔猪初生重尤为重要。因此,加强对已有营养调控物质的探究、研发新的营养策略对提高母猪繁殖性能具有重要意义。文章综述腺苷、一磷酸腺苷(AMP)及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)作为动物特定生长阶段或应激状态下条件性必需营养素的研究进展,阐述上述3种物质对母猪胎盘及仔猪初生重的影响,为提高母猪繁殖性能提供参考。

关键词：腺苷 AMP AMPK 胎盘仔猪初生重母猪繁殖性能

麻疯树核糖体失活蛋白Curcin和Curcin C与腺苷及腺嘌呤的互作方式分析

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四川大学学报（自然科学版） 2022年第4期59卷 181-186页

作者：邓聿杉徐莺四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室成都610065

麻疯树核糖体失活蛋白Curcin和Curcin C均具N-糖苷酶活性,然而两者的体外翻译抑制能力却具有明显差异,这暗示着两者的N-糖苷酶活性也存在差异.为了探究造成这一差异的结构基础,本研究使用trRosetta对两种蛋白进行了三级结构的预测,通过P... 详细信息

麻疯树核糖体失活蛋白Curcin和Curcin C均具N-糖苷酶活性,然而两者的体外翻译抑制能力却具有明显差异,这暗示着两者的N-糖苷酶活性也存在差异.为了探究造成这一差异的结构基础,本研究使用trRosetta对两种蛋白进行了三级结构的预测,通过PROCHECK和Qmean对预测得到的三级结构模型进行了质量评估,利用Chem3D对小分子配体腺嘌呤和腺苷进行了结构优化,借助UCSF Chimera对Curcin及Curcin C活性位点的氨基酸组成进行了预测.最终使用分子对接软件AutoDock将预测得到的模型与小分子腺嘌呤及腺苷进行分子对接.对接结果显示,两种蛋白与腺嘌呤的相互作用模式具有较高的相似性,但Curcin的关键氨基酸Arg并未参与到与配体的相互作用.此外Curcin C与腺嘌呤和腺苷之间的结合能都低于Curcin,且其和腺苷与腺嘌呤之间结合能的差值也要高于Curcin.这一结果暗示着Curcin和Curcin C之间的活性差异与其活性位点处的结构特征有关,Curcin C中的关键氨基酸Arg与腺嘌呤及腺苷的结合位点更为靠近,从而导致Curcin C与底物之间的结合能更低,更有利于催化反应的进行.

关键词：麻疯树核糖体失活蛋白结构预测分子对接腺苷腺嘌呤

腺苷对大鼠脑缺血再灌注后基质金属蛋白酶9和闭锁连接蛋白1表达的影响

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中华老年心脑血管病杂志 2023年第5期25卷 528-531页

作者：刘坤吕欣张先龙赵莲辉杨晓霞沈阳医学院康复医学院 110034

目的观察腺苷预处理对大鼠脑缺血再灌注后基质金属蛋白酶9(MMP-9)和闭锁连接蛋白1(ZO-1)表达变化的影响。方法108只健康雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、腺苷组(n=36)。造模前腺苷组腹腔注射腺苷注射液,对照组和模型组大鼠在相同时... 详细信息

目的观察腺苷预处理对大鼠脑缺血再灌注后基质金属蛋白酶9(MMP-9)和闭锁连接蛋白1(ZO-1)表达变化的影响。方法108只健康雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、腺苷组(n=36)。造模前腺苷组腹腔注射腺苷注射液,对照组和模型组大鼠在相同时间点腹腔注射2 ml生理盐水。采用改良的线栓法栓塞右侧大脑中动脉阻断血流2 h后,将线拔出形成再灌注。再灌注24 h后,伊文思蓝(EB)渗透法测定血脑屏障通透性,检测MMP-9和ZO-1表达。结果模型组和腺苷组EB,脑含水量,MMP-9明显高于对照组,ZO-1明显低于对照组(P腺苷组MMP-9/β肌动蛋白(β-actin)表达明显高于对照组(0.563±0.054和0.377±0.080 vs 0.242±0.021,P腺苷组MMP-9/β-actin表达低于模型组,ZO-1/β-actin表达明显高于模型组(P腺苷预处理可以通过抑制MMP-9表达,增加ZO-1表达,改善血脑屏障完整性,减轻脑水肿与脑缺血再灌注后的神经损伤。

关键词：腺苷基质金属蛋白酶9 再灌注损伤闭锁小带蛋白-1

普通拟杆菌调控高血压小鼠小肠上皮细胞腺苷合成的机制探究

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食品与发酵工业 2023年第15期49卷 16-23页

作者：王一梁张安坤何冬旭江南大学食品学院江苏无锡214122

高血压是心血管疾病的主要危险因素,其分子和细胞机制仍有待阐明。大量研究显示,肠道内生菌调节血压稳态。前期实验室通过血浆代谢谱学测序发现了普通拟杆菌(Bacteroides vulgatus)可以增加高盐饮食高血压小鼠血浆中的腺苷含量,同时可... 详细信息

高血压是心血管疾病的主要危险因素,其分子和细胞机制仍有待阐明。大量研究显示,肠道内生菌调节血压稳态。前期实验室通过血浆代谢谱学测序发现了普通拟杆菌(Bacteroides vulgatus)可以增加高盐饮食高血压小鼠血浆中的腺苷含量,同时可能影响小鼠高血压进程。该研究首先验证B.vulgatus对血浆腺苷含量和高盐饮食小鼠血压的影响。随后,为了夯实谱学结果、寻找血浆中腺苷的来源并解析B.vulgatus促进腺苷合成的机制,研究对B.vulgatus灌胃小鼠机体合成腺苷的重要场所之一——小肠上皮细胞进行了基因表达谱分析。结果发现,B.vulgatus灌胃小鼠的小肠上皮细胞中一系列差异表达的基因与小鼠的核苷酸、能量、蛋白质等物质的代谢过程相关。从差异表达的基因中遴选了与腺苷合成紧密相关的基因,并验证了其蛋白质表达水平。结果发现,腺苷合成过程中的关键蛋白质CD39在B.vulgatus灌胃后的小鼠小肠上皮细胞中表达显著增加。更进一步,小鼠小肠上皮细胞中CD39表达的增加与小鼠血浆中腺苷含量呈正相关性。综上,B.vulgatus在调节高盐饮食小鼠的高血压进程中,升高了血浆腺苷的含量,并伴随着小肠上皮细胞CD39的表达上调,且二者存在相关性。该研究结果为阐明内生菌调节心血管健康的机理提供了一定的理论依据。

关键词：高血压腺苷普通拟杆菌小肠上皮细胞 CD39

腺苷激活A2A受体对血迷路屏障的保护作用及其机制研究

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腺苷激活A2A受体对血迷路屏障的保护作用及其机制研究

作者：范文雅郑州大学

学位级别：硕士

分泌性中耳炎是耳科常见的疾病之一。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作为革兰氏阴性细菌外膜的组成部分,常被用来诱导分泌性中耳炎模型的建立。大量研究已经证实LPS引发的分泌性中耳炎与炎性细胞因子的产生有关,这些炎性介质通过圆窗... 详细信息

分泌性中耳炎是耳科常见的疾病之一。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作为革兰氏阴性细菌外膜的组成部分,常被用来诱导分泌性中耳炎模型的建立。大量研究已经证实LPS引发的分泌性中耳炎与炎性细胞因子的产生有关,这些炎性介质通过圆窗或卵圆窗进入耳蜗,触发内耳结构和功能的改变,导致内耳微环境稳定的破坏。位于耳蜗外侧壁的血管纹血迷路屏障(blood labyrinth barrier,BLB)是调节内耳微环境稳定的基础。既往研究已经证实LPS诱发的分泌性中耳炎可影响血管纹血迷路屏障的通透性。内皮细胞(endothelial cell,ECs)和血管周围常驻黑色素样巨噬细胞(perivascular-resident melanin-like macrophages,PVM/Ms)作为血管纹血迷路屏障的组成部分已被证实在维护内耳稳态及血迷路屏障完整性方面至关重要。此外,内皮细胞与内皮细胞间的紧密连接蛋白ZO-1和Occludin在调控血迷路屏障的通透性方面发挥着重要作用。而PVM/Ms分泌的色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)也被证实可以通过调节内皮细胞间紧密连接蛋白的表达影响血迷路屏障完整性。腺苷作为一种嘌呤核苷,通过与胞膜相应的受体结合后发挥作用。腺苷受体广泛分布于哺乳动物的各种组织及器官中。目前已有大量关于腺苷及腺苷受体在炎症反应中作用机制的报道。血脑屏障及视网膜的相关研究发现,腺苷通过结合并激活腺苷受体A2AR可明显减轻LPS诱导的炎症反应。然而至今尚无腺苷在血管纹血迷路屏障中作用的研究。腺苷是否通过结合并激活A2AR影响LPS诱导的血管纹血迷路屏障损伤尚未见文献报道。本研究中,我们通过原代培养血管纹ECs和PVM/Ms,并在体外建立内皮细胞单层屏障模型、ECs-PVM/Ms共培养模型,分别结合荧光定量聚合酶链式反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR)、蛋白免疫印迹(western blot,WB),酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunoabsorbent assay,ELISA)、流式细胞仪、免疫荧光染色等方法研究腺苷对LPS造成的血迷路屏障完整性破坏的影响及作用机制。本研究分为两个部分:第一部分腺苷结合A2AR激活AMPK/AKT通路保护脂多糖破坏的血迷路屏障完整性目的:探讨腺苷对内皮细胞单层屏障模型完整性改变的影响及作用机制。方法:本实验采用原代培养的血管纹ECs,并培养ECs生长为内皮细胞单层形成紧密连接蛋白,利用LPS成功诱导内皮细胞单层屏障炎症模型,实验分为:control组、LPS组、腺苷组(即:腺苷+LPS处理)、以及A2AR受体抑制剂组(即:A2AR受体抑制剂SCH58261+腺苷+LPS处理)。首先,利用CCK8技术检测不同浓度的腺苷对内皮细胞活力的影响,并使用qPCR法及Western blot法检测不同浓度的腺苷处理后紧密连接蛋白ZO-1、Occludin在mRNA和蛋白水平的变化,并确定腺苷最佳作用浓度。其次,使用qPCR法、Western blot法以及流式细胞仪检测不同处理组ECs中紧密连接蛋白ZO-1、Occludin以及活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的变化。并在体外建立内皮细胞单层屏障模型,观察不同处理组中内皮细胞单层屏障通透性的变化。最后,使用Western blot法检测不同处理组中AMPK/AKT通路磷酸化的改变,并利用Compound C抑制AMPK后验证紧密连接ZO-1、Occludin的蛋白变化。结果:1.1、10、20 μM腺苷对ECs细胞活力无影响;较LPS组相比,腺苷处理组中紧密连接蛋白ZO-1和Occludin在mRNA水平和蛋白水平表达显著增加。2.较腺苷组相比,A2AR受体抑制剂组的ZO-1和Occludin在mRNA和蛋白水平表达明显降低。3.较LPS组相比,腺苷组的ROS水平明显降低,A2AR受体抑制剂组中ROS水平明显逆转。4.较LPS组相比,腺苷处理组的内皮细胞单层屏障渗透性显著降低,A2AR受体抑制剂组内皮细胞单层屏障渗透性则明显增加。5.腺苷处理组中磷酸化的p-AMPK和p-AKT增加,Compound C预处理后紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达下降。结论:1.腺苷可能通过结合并激活A2AR受体抑制LPS导致的内皮细胞单层屏障模型中ZO-1和Occludin的下调,并抑制ROS的升高,从而降低内皮细胞单层屏障的渗透性。2.腺苷结合并激活A2AR对内皮细胞单层屏障模型中紧密连接蛋白的保护作用可能通过调控AMPK和AKT信号通路实现。第二部分腺苷结合A2AR通过调节血管周围常驻黑色素样巨噬细胞的激活,减轻脂多糖诱导的血迷路屏障功能障碍目

关键词：腺苷血迷路屏障紧密连接蛋白内皮细胞(ECs) 脂多糖血管周围常驻黑色素样巨噬细胞(PVM/Ms)

B族维生素对枯草芽孢杆菌发酵生产腺苷的影响

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中国酿造 2022年第4期41卷 93-98页

作者：孙鹏杰余子辰徐庆阳天津科技大学生物工程学院天津300450

为了进一步提高发酵法生产腺苷的效率,该研究以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)XGL为供试菌株,通过单因素试验及正交试验探究VB_(1)、VB_(3)、VB_(5)、VB7、VB_(12)几种关键B族维生素对菌体生长及菌体产苷能力的影响。结果表明,VB_(1)... 详细信息

为了进一步提高发酵法生产腺苷的效率,该研究以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)XGL为供试菌株,通过单因素试验及正交试验探究VB_(1)、VB_(3)、VB_(5)、VB7、VB_(12)几种关键B族维生素对菌体生长及菌体产苷能力的影响。结果表明,VB_(1)、VB_(3)、VB_(5)、VB7、VB_(12)的最佳添加量分别为6.0 mg/L、5.2 mg/L、6.0 mg/L、2.4 mg/L、5.6 mg/L。此时的菌体生物量(OD_(600 nm)值)、腺苷产量和糖苷转化率分别为74.84、53.66 g/L、33.10%,较原始培养基分别增长了8.00%、19.35%和12.59%,说明B族维生素的这种复合添加量能够较好的提高腺苷的发酵生产能力,为枯草芽孢杆菌发酵法生产核苷类物质的培养基改良提供了一定的依据。

关键词：维生素B 腺苷发酵条件优化枯草芽孢杆菌

腺苷受体调节剂对丙泊酚依赖大鼠中脑边缘奖赏系统神经递质的影响

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腺苷受体调节剂对丙泊酚依赖大鼠中脑边缘奖赏系统神经递质的影响

作者：陈鹏丽新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:研究腺苷受体调节剂对丙泊酚依赖大鼠中脑边缘奖赏系统神经递质的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为外周激动剂组、外周拮抗剂组、外周空白组、中枢激动剂组,中枢拮抗剂组、中枢空白组(n=8)。激动剂组与空白对照:大鼠成功建立丙泊... 详细信息

目的:研究腺苷受体调节剂对丙泊酚依赖大鼠中脑边缘奖赏系统神经递质的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为外周激动剂组、外周拮抗剂组、外周空白组、中枢激动剂组,中枢拮抗剂组、中枢空白组(n=8)。激动剂组与空白对照:大鼠成功建立丙泊酚精神依赖模型后经中枢颅内导管或腹腔分别注射腺苷A2A受体激动剂或空白溶剂;拮抗剂组:在丙泊酚精神依赖的建立过程中,在丙泊酚注射前经中枢颅内导管或腹腔注射腺苷A2A受体拮抗剂。采集血液及脑组织标本,采用ELISA法检测血液及海马组织DA、谷氨酸及大脑皮层中5-HT的含量,Western-blot法检测大脑皮层中p-ERK1/2的表达。结果:建模后ic-C组、ic-CGS组、ip-C组和ip-CGS组CPP值升高,差异有统计学意义(P0.05);与造模后比较,干预后ic-C组和ip-C组CPP值差异无统计学意义(P>0.05),ic-CGS组和ip-CGS组CPP值升高,差异有统计学意义;海马组织中与ic-C组比较,ic-CGS组DA、Glu明显增加,ic-DMPX组明显减少(P腺苷与A2A受体的结合从而调节脑内神经递质表达水平使ERK发生磷酸化有关。

关键词：二异丙酚物质相关性障碍腺苷神经递质药