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lncRNA Meg3在全反式维甲酸和转化生长因子β3影响小鼠腭突间充质细胞增殖过程中的作用

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郑州大学学报（医学版） 2023年第6期58卷 763-769页

作者：刘小转张军喜余增丽王国旭何志东宋帅星李雪河南省人民医院临床医学研究中心郑州450003 国家卫生健康委员会出生缺陷预防重点实验室河南省人口缺陷干预技术研究重点实验室郑州450002 郑州大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室郑州450001

目的:探索长链非编码RNA(lncRNA)Meg3在全反式维甲酸(atRA)和转化生长因子β3(TGF-β3)影响胎鼠腭突间充质细胞增殖过程中的作用。方法:分离、培养妊娠13 d胎鼠腭突间充质细胞。EdU法检测对照组(未处理)、atRA组(5μmol/L atRA)和TGF-β... 详细信息

目的:探索长链非编码RNA(lncRNA)Meg3在全反式维甲酸(atRA)和转化生长因子β3(TGF-β3)影响胎鼠腭突间充质细胞增殖过程中的作用。方法:分离、培养妊娠13 d胎鼠腭突间充质细胞。EdU法检测对照组(未处理)、atRA组(5μmol/L atRA)和TGF-β3组(10μg/L TGF-β3)处理48 h腭突间充质细胞增殖能力的变化。荧光原位杂交和实时荧光定量PCR法检测上述3组Meg3的定位和相对表达量。利用EdU实验检测Meg3 siRNA转染前后atRA和TGF-β3对腭突间充质细胞增殖的影响。结果:与对照组相比,atRA处理48 h可抑制腭突间充质细胞的增殖,TGF-β3处理48 h可促进腭突间充质细胞增殖(P腭突间充质细胞中Meg3的表达,TGF-β3可抑制Meg3的表达(P腭突间充质细胞增殖能力均增强(P腭突间充质细胞的增殖抑制作用可能主要通过Meg3介导,而TGF-β3对腭突间充质细胞增殖的促进作用可能与Meg3基因无直接关系。

关键词：长链非编码RNA Meg3 腭裂腭突间充质细胞全反式维甲酸转化生长因子β3 小鼠

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TCDD对小鼠腭突间充质细胞增殖和凋亡的影响

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郑州大学学报（医学版） 2019年第4期54卷 504-508页

作者：刘蔓蔓陶宇昌刘小转高湛张秀丽谭雪梅余凯伦陈瑶余增丽郑州大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室郑州450001 河南省人民医院临床单细胞生物医学中心郑州450003 郑州大学第五附属医院妇产科郑州450052 郑州大学第一附属医院营养科郑州450052

目的:探讨2,3,7,8-四氯二苯并对二噁英(TCDD)对小鼠腭突间充质细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用随机数字表法将SPF级C57BL/6N孕鼠分为TCDD组和对照组,在妊娠第10天(GD10)分别以64μg/kgTCDD和等量玉米油灌胃,取GD13、GD14、GD15胚胎头部... 详细信息

目的:探讨2,3,7,8-四氯二苯并对二噁英(TCDD)对小鼠腭突间充质细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用随机数字表法将SPF级C57BL/6N孕鼠分为TCDD组和对照组,在妊娠第10天(GD10)分别以64μg/kgTCDD和等量玉米油灌胃,取GD13、GD14、GD15胚胎头部,行组织形态学观察。收集GD13正常胎鼠腭组织,分离腭突间充质细胞,用0.0、0.1、1.0、10.0nmol/LTCDD处理72h后,采用MTT法检测细胞增殖并计算增殖抑制率,检测Brdu阳性率,采用荧光定量RT-PCR和Westernblot法检测细胞中PCNA、Bax、Caspase-3mRNA和蛋白表达水平。结果:组织形态学显示TCDD组胎鼠双侧腭突未接触和融合。随着TCDD作用浓度的增加,小鼠腭突间充质细胞增殖抑制率逐渐增加,Brdu阳性率逐渐降低,细胞中Bax、Caspase-3mRNA和蛋白表达逐渐增加,而PCNAmRNA和蛋白表达逐渐降低(P腭突间充质细胞的增殖并促进其凋亡,导致腭裂的发生。

关键词：二噁英腭突间充质细胞腭裂小鼠

地塞米松对A系小鼠胚腭突间充质细胞增殖代谢的影响

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现代口腔医学杂志 2005年第3期19卷 291-293页

作者：孙晋虎石冰王大章广西医科大学口腔医学院南京530021 四川大学华西口腔医学院

目的　研究不同剂量地塞米松(DEX)对A系小鼠胚腭突间充质细胞增殖和DNA、蛋白质及PGE2 合成的影响。方法　实验分为9组,每组设平行4孔(瓶) ,每组分别加入DEX使其终浓度为0 .0 5ng/ml,0 .1ng/ml,0 .5ng/ml,1ng/ml,5ng/ml,1 0ng/ml,5 0ng/... 详细信息

目的　研究不同剂量地塞米松(DEX)对A系小鼠胚腭突间充质细胞增殖和DNA、蛋白质及PGE2 合成的影响。方法　实验分为9组,每组设平行4孔(瓶) ,每组分别加入DEX使其终浓度为0 .0 5ng/ml,0 .1ng/ml,0 .5ng/ml,1ng/ml,5ng/ml,1 0ng/ml,5 0ng/ml,1 0 0ng/ml,1 0 0 0ng/ml,每组均设空白对照,在实验后第1、3、5天分别检测细胞的OD值及PGE2 的含量,并在第3天时检测DNA、蛋白质的含量。结果　DEX可显著增加腭突间充质细胞的OD值,促进DNA及蛋白质合成,在含量0 .5ng/ml时DEX的促进生长作用最强。在培养早期DEX轻度降低腭突间充质细胞PGE2 的合成,而在培养后期则表现为显著抑制作用。结论　DEX显著促进腭突间充质细胞的增殖代谢,可能干扰腭突间充质细胞的正常生长代谢而影响了腭发育。

关键词：充质细胞增殖 A系小鼠地塞米松胚腭突腭突间充质细胞 PGE2 DEX 蛋白质合成 DNA 不同剂量空白对照生长作用抑制作用生长代谢 OD值 ml 含量腭发育实验检测培养

腭突间充质细胞中TGFβ1信号通路介导维甲酸致腭裂的实验研究

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中国实用医药 2016年第32期11卷 191-193页

作者：汤伟钳胡晓广州市从化区温泉镇卫生院 510976 广州市红十字会医院

目的探讨转化生长因子β1(TGFβ1)信号通路在维甲酸(RA)致腭裂过程中的作用。方法选取8~10周龄野生型小鼠,构建RA诱导腭裂的小鼠模型,分别取E13.5(E13.5组)、E15.5(E15.5组)和E17.5(E17.5组)的腭突,荧光定量PCR(q-PCR)检测TGFβ1基因的... 详细信息

目的探讨转化生长因子β1(TGFβ1)信号通路在维甲酸(RA)致腭裂过程中的作用。方法选取8~10周龄野生型小鼠,构建RA诱导腭裂的小鼠模型,分别取E13.5(E13.5组)、E15.5(E15.5组)和E17.5(E17.5组)的腭突,荧光定量PCR(q-PCR)检测TGFβ1基因的表达,信号通路检测法(Western blot)检测下游p-Smad2(S467)的表达;RA处理原代培养的腭突间充质细胞(MEPM),q-PCR检测TGFβ1基因的表达,Western blot检测下游p-Smad2(S467)的表达。RA和TGFβ1共同处理MEPM,CCK-8法检测细胞的增殖活性。结果 RA诱导的腭裂小鼠中,E13.5组和E15.5组腭突中TGFβ1的表达显著下降(P0.05)。p-Smad2(S467)的表达也呈现同样的趋势。RA显著抑制了MEPM中TGFβ1和p-Smad2(S467)的表达,且呈浓度依赖性。RA和TGFβ1共处理组的细胞增殖活性较RA单纯处理组显著上升,体外添加TGFβ1重组蛋白能有效逆转RA对MEPM增殖的抑制作用。结论 MEPM中TGFβ1信号通路在RA致腭裂过程中发挥着重要作用。

关键词：维甲酸腭裂转化生长因子β1 腭突间充质细胞

ARHGAP29调控小鼠腭突间充质细胞增殖能力的研究

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口腔医学研究 2022年第3期38卷 275-279页

作者：阮文彦侯宇转迟丹丹于丽丽段小红黄永清宁夏医科大学口腔医学院宁夏银川750004 军事口腔医学国家重点实验室口腔疾病国家临床医学研究中心陕西省口腔医学重点实验室第四军医大学口腔医学院口腔生物学教研室陕西西安710032 宁夏医科大学总医院口腔医院口腔颌面外科宁夏银川750004

目的:探讨ARHGAP29对小鼠腭突间充质细胞增殖能力的影响。方法:免疫组织化学染色确定ARHGAP29在腭突组织中的表达;体外培养GD13.5小鼠腭突间充质细胞,免疫荧光染色鉴定细胞来源;合成3条Arhgap29基因特异性小干扰RNA进行体外沉默实验,利... 详细信息

目的:探讨ARHGAP29对小鼠腭突间充质细胞增殖能力的影响。方法:免疫组织化学染色确定ARHGAP29在腭突组织中的表达;体外培养GD13.5小鼠腭突间充质细胞,免疫荧光染色鉴定细胞来源;合成3条Arhgap29基因特异性小干扰RNA进行体外沉默实验,利用Real-time PCR和Western blot检测沉默效率;CCK-8法检测Arhgap29基因沉默后腭突间充质细胞增殖能力的改变;实验结果采用GraphPad Prism 8.0.2软件进行统计学分析。结果:免疫组织化学结果示ARHGAP29在GD13.5小鼠腭突组织中显著表达;免疫荧光染色结果显示Vimentin染色的腭突间充质细胞包浆着色,绿色荧光表达强,Cytokeratin染色的细胞未见有阳性表达;Real-time PCR和Western blot结果显示,相较于阴性对照组和空白对照组,实验组ARHGAP29 mRNA和蛋白表达水平明显降低,其中Arhgap29-siRNA3的沉默效果最好(P腭突间充质细胞的增殖能力开始上升,转染72 h细胞的增殖能力显著增强(P腭突间充质细胞的增殖,在腭突发育阶段造成腭突与口腔上皮的黏连,从而影响腭部的正常发育。

关键词： ARHGAP29 腭突间充质细胞 RNA干扰细胞增殖

Arhgap29对小鼠腭突间充质细胞增殖、迁移和凋亡的影响

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Arhgap29对小鼠腭突间充质细胞增殖、迁移和凋亡的影响

作者：阮文彦宁夏医科大学

学位级别：硕士

腭部发育是一个涉及细胞增殖、迁移、凋亡和上皮间充质转化的精细调控过程,任何一个细胞活动受到干扰均有可能影响腭部的正常发育。NSCL/P是受环境和基因等多种因素影响的最常见的先天出生缺陷之一,目前发现的致病基因有数十种,研究较... 详细信息

腭部发育是一个涉及细胞增殖、迁移、凋亡和上皮间充质转化的精细调控过程,任何一个细胞活动受到干扰均有可能影响腭部的正常发育。NSCL/P是受环境和基因等多种因素影响的最常见的先天出生缺陷之一,目前发现的致病基因有数十种,研究较多的有IRF6、ABCA4、NTN1、MAFB、THADA等。ARHGAP29基因是近年来发现的NSCL/P的致病基因,虽然有很多研究表明ARHGAP29基因变异与NSCL/P的发生具有强相关性,但其对腭突细胞的影响及其在腭发育中的作用机制目前还不清楚。目的本研究拟通过小干扰RNA技术(si RNA)对小鼠胚胎腭突间充质细胞中的Arhgap29的表达进行敲降,探讨Arhgap29基因敲降后对小鼠胚胎腭突间充质细胞增殖、迁移及凋亡能力的影响,为后期该基因在腭发育中的作用机制研究奠定基础。方法 1.获取E13.5、E14.5的C57BL/6J胎鼠,经免疫组织化学染色确定ARHGAP29基因在腭突组织中的表达情况;2.E13.5小鼠胚胎腭突组织,经酶消化法获取E13.5小鼠腭突间充质细胞进行体外培养,通过免疫荧光染色鉴定细胞来源;3.合成3条Arhgap29基因特异性小干扰RNA进行体外敲降实验,利用q RTPCR和Western blot检测沉默效率;***8法检测Arhgap29基因敲降后小鼠胚胎腭突间充质细胞增殖能力的改变,划痕法和流式细胞仪分别检测细胞迁移能力和凋亡情况;5.实验数据采用Graph Pad Prism 8.0.2软件进行统计学分析。结果 1.免疫组织化学结果示ARHGAP29在E13.5、E14.5小鼠腭突组织中有显著表达;2.细胞免疫荧光染色结果显示Vimentin染色的小鼠胚胎腭突细胞包浆着色,绿色荧光表达强,Cytokeratin染色的细胞未见有阳性表达;***-time PCR和Western blot结果显示,相较于阴性对照组和空白对照组,实验组ARHGAP29 m RNA和蛋白表达水平明显降低,其中Arhgap29-si RNA3的沉默效果最好(P腭突间充质细胞的增殖能力开始上升,转染72h细胞的增殖能力显著增强(P细胞迁移实验结果显示,细胞划痕12h时,Arhgap29-siRNA3组的细胞愈合面积小于对照组(P细胞损伤划痕已趋向愈合,Arhgap29基因敲降组细胞仍可见明显的划痕损伤(P细胞凋亡检测结果示,空白对照组细胞早期凋亡和晚期凋亡比率总和为4.5%,阴性对照组的为5.3%,Arhgap29-si RNA3的为13.4%,为对照组的两倍多。结论本研究结果表明Arhgap29基因敲降可以促进小鼠胚胎腭突间充质细胞的增殖和凋亡,但对细胞的迁移起抑制作用。

关键词： Rho-GTP酶激活蛋白29 腭突间充质细胞细胞增殖细胞迁移细胞凋亡

叶酸拮抗维甲酸诱导对BALB/c小鼠腭突间充质细胞凋亡影响的机制研究

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叶酸拮抗维甲酸诱导对BALB/c小鼠腭突间充质细胞凋亡影响的机制研...

作者：闫星泉山西医科大学

学位级别：硕士

目的：从细胞水平对维甲酸致BALB/c小鼠腭裂畸形作用和叶酸是否有拮抗维甲酸的致畸作用及其机制进行研究。方法：本研究主要分为四部分进行，首先对三种检测BALB/c小鼠受孕方法进行比较研究，得到简便、可靠的判定小鼠受孕与否的方... 详细信息

目的：从细胞水平对维甲酸致BALB/c小鼠腭裂畸形作用和叶酸是否有拮抗维甲酸的致畸作用及其机制进行研究。方法：本研究主要分为四部分进行，首先对三种检测BALB/c小鼠受孕方法进行比较研究，得到简便、可靠的判定小鼠受孕与否的方法;其次对维甲酸诱导BALB/c小鼠建立腭裂模型的合适给药时间和剂量进行探索，获得一种稳定、可靠的小鼠腭裂模型;然后分离培养妊娠17天小鼠胚胎腭突间充质细胞（EPM cells），对其生物学性质进行研究;最后分别分离培养腭裂组和正常组小鼠相同孕期胚胎EPM cells，采用TUNEL法对两组加入不同浓度叶酸与未加入叶酸的细胞凋亡情况进行检测。结果：在对受孕10天（GD10）及后期孕鼠的检测方法中，称量体重的方法检测孕鼠受孕的灵敏度为0.96，特异度为0.94;在GD10天时给予BALB/c小鼠管饲50mg/kg维甲酸，活胎鼠中腭裂发生率高达93.59%;腭裂组小鼠EPEcells较正常组凋亡明显增多（P＜0.05）。对腭裂组EPEcells添加叶酸后细胞凋亡显著减少（P＜0.05）。对正常组EPEcells添加叶酸后细胞凋亡无明显变化（P＞0.05）。结论：维甲酸可以明显促进其诱导建立的BALB/c腭裂小鼠EPE cells凋亡，外源性补充叶酸可在一定程度上拮抗维甲酸这一作用。

关键词： BALB/c小鼠腭突间充质细胞叶酸维甲酸凋亡

TG-相互作用因子在维甲酸抑制腭突间充质细胞增殖过程中的作用

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郑州大学学报（医学版） 2020年第6期55卷 755-759页

作者：刘小转高素华余凯伦陈瑶陶宇昌何志东余增丽河南省人民医院临床单细胞生物医学中心郑州450003 郑州大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室郑州450001

目的:探索TG-相互作用因子(TGIF)在维甲酸抑制腭突间充质细胞增殖过程中作用。方法:分离、培养妊娠13 d胎鼠腭突间充质细胞。MTT实验检测0~10.0μmol/L全反式维甲酸(atRA)在不同时间点对胎鼠腭突间充质细胞增殖的影响。Western blot检... 详细信息

目的:探索TG-相互作用因子(TGIF)在维甲酸抑制腭突间充质细胞增殖过程中作用。方法:分离、培养妊娠13 d胎鼠腭突间充质细胞。MTT实验检测0~10.0μmol/L全反式维甲酸(atRA)在不同时间点对胎鼠腭突间充质细胞增殖的影响。Western blot检测对照组、5.0μmol/L atRA处理组细胞内TGIF蛋白的表达。TGIF siRNA和control siRNA分别转染胎鼠腭突间充质细胞,并设置空白对照组,Western blot检测TGIF siRNA转染胎鼠腭突间充质细胞后的基因沉默的效果;MTT实验检测TGIF siRNA转染后atRA对胎鼠腭突间充质细胞增殖的影响。结果:0.1~10.0μmol/L的atRA对不同时间点胎鼠腭突间充质细胞的生长均有抑制作用,呈时间-剂量依赖性;且在72 h时,5.0和10.0μmol/L的atRA对胎鼠腭突间充质细胞的增殖具有明显的抑制作用(P腭突间充质细胞增殖的抑制作用不明显(P>0.05)。结论:atRA对腭突间充质细胞增殖的抑制作用可能主要通过TGIF介导。

关键词：腭裂维甲酸腭突间充质细胞 TG-相互作用因子

地塞米松对小鼠胚胎腭突间充质细胞增殖的影响

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临床口腔医学杂志 2002年第1期18卷 10-12页

作者：李伯友李宏礼傅豫川王学斌武汉大学口腔医学院颌面外科

目的　探讨地塞米松对小鼠胚胎腭突间充质 (EPM )细胞增殖的影响。方法　在显微镜下解剖妊娠第 13d的鼠胚腭突 ,用 0 .2 5 %胰蛋白酶进行消化获得游离分散的EPM细胞 ,在DMEM培养基中进行培养 ,并采用反复贴壁法纯化EPM细胞。在培养基中... 详细信息

目的　探讨地塞米松对小鼠胚胎腭突间充质 (EPM )细胞增殖的影响。方法　在显微镜下解剖妊娠第 13d的鼠胚腭突 ,用 0 .2 5 %胰蛋白酶进行消化获得游离分散的EPM细胞 ,在DMEM培养基中进行培养 ,并采用反复贴壁法纯化EPM细胞。在培养基中加入 10 6M地塞米松 ,采用AgNOR染色、Feulgen染色及透射电子显微镜观察 ,检测地塞米松对EPM细胞增殖能力的影响。结果　地塞米松处理的EPM细胞银染颗粒数减少 (P 质网肿胀。结论　地塞米松对EPM细胞的增殖及生物合成有明显的抑制作用 ,影响腭突的正常发育。

关键词：腭突间充质细胞胚胎细胞培养腭裂地塞松细胞增殖 EPM 小鼠