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南京农业大学学报 2017年第2期40卷 314-319页

作者：夏兵兵汪袁樊彦红李银环王晴晴孙卫东张海彬何成华南京农业大学动物医学院江苏南京210095 苏州市吴江区农业委员会江苏苏州215200

[目的]本试验旨在研究脱氧血腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的小鼠骨髓源性成熟树突状细胞(mature dendritic cell,m DC)的表型和吞噬功能的影响。[方法]体外培养小鼠骨髓细胞诱导分化成未成熟... 详细信息

[目的]本试验旨在研究脱氧血腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的小鼠骨髓源性成熟树突状细胞(mature dendritic cell,m DC)的表型和吞噬功能的影响。[方法]体外培养小鼠骨髓细胞诱导分化成未成熟的树突状细胞,分别用不同质量浓度的DON(0、125、250、500 ng·m L^(-1))处理DC 6 h后,再加入LPS刺激18 h。以仅用LPS处理的为阳性对照组。用流式细胞仪检测DC表型(CD80、CD86和MHC-Ⅱ)变化及吞噬右旋葡聚糖的能力;RTPCR检测细胞中细胞因子(IL-6、IL-0、IL-12和TNF-α)mRNA的相对表达。[结果]LPS刺激引起m DC表面的CD80、CD86和MHC-Ⅱ升高(P0.05),高浓度DON(500 ng·m L^(-1))引起m DC共刺激分子(CD80、CD86和MHC-Ⅱ)表达水平降低(P<0.05),同时细胞因子的mRNA表达降低(P<0.05),但吞噬能力提高12.2%。[结论]高浓度DON对LPS刺激的m DC表型和细胞因子表达具有一定的抑制作用。

关键词：脱氧血腐镰刀菌烯醇树突状细胞:脂多糖表型吞噬功能

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脱氧血腐镰刀菌烯醇在IPEC-J2细胞凋亡中的作用及机制研究

脱氧血腐镰刀菌烯醇在IPEC-J2细胞凋亡中的作用及机制研究

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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛

作者：张志岐苏晓鸥中国农业科学与农业质量标准与检测技术研究所国家饲料质量监督检验中心(北京)农业部农产品质量安全研究重点实验室

【目的】脱氧血腐镰刀菌烯醇（DON）是分布最广泛、污染最严重的霉菌毒素之一,其污染已成为饲料安全的重要问题,严重危害动物的健康,并给养殖业带来巨大的经济损失。阐明DON的毒性作用机制将有助于科学评价其对畜禽健康的影响。肠道上... 详细信息

【目的】脱氧血腐镰刀菌烯醇（DON）是分布最广泛、污染最严重的霉菌毒素之一,其污染已成为饲料安全的重要问题,严重危害动物的健康,并给养殖业带来巨大的经济损失。阐明DON的毒性作用机制将有助于科学评价其对畜禽健康的影响。肠道上皮细胞是机体摄入DON后穿过的第一道屏障。猪肠上皮细胞对DON非常敏感。DON可以诱导小肠上皮细胞凋亡,诱发炎症反应,但其潜在的机制和细胞内信号通路尚不清楚。本研究旨在探讨MAPK和JAK/Stat3信号通路在DON诱导猪肠上皮细胞凋亡毒性损伤中的作用。【材料和方法】运用MTT法检测了不同浓度DON（0、0.1、0.25、0.5、1、5、10和20μM）在不同时间点（4h、8h、16h、24h、36h和48h）对IPEC-J2增殖细胞活性的影响;利用AnnexinV与PI染色并通过流式细胞仪检测了IPEC-J2增殖细胞暴露不同浓度DON（1、5和10μM）24h后对细胞凋亡的影响;最后运用Western blot技术观察了不同浓度DON（1、5和10μM）对IPEC-J2增殖细胞在不同时间点（1h、2h、4h、8h、16h和24h）对信号通路蛋白Akt、Erk1/2、FoxO1及Stat3表达影响的剂量效应和时间效应。【结果】0.5、1、5、10和20μM DON在处理IPEC-J2细胞4h、8h、16h、24h、36h和48h后,均可以极显著抑制猪肠道上皮细胞增殖（p＜0.01）,并且具有浓度依赖效应和时间效应。流式细胞仪检测结果表明IPEC-J2生长细胞暴露5和10μM DON 24h后,细胞凋亡率分别达到30%和40%。IPEC-J2增殖细胞添加不同浓度DON后,在4h、8h、18h和24h时,10μM和20μM DON均可以显著提高Akt蛋白的磷酸化水平（P＜0.05）;在1h、2h和4h 10μM DON可以显著提高FoxO1蛋白的磷酸化水平（p＜0.05）,在8h对FoxO1蛋白的磷酸化水平无影响。而在18h和24h却显著降低了FoxO1蛋白的磷酸化水平（p＜0.05）;在1h、2h、4h、8h、18h和24h时,10和20μMDON均可以极显著降低Stat3蛋白的磷酸化水平（p＜0.01）;在1h、2h和4h时10和20μM DON可以显著提高Erk1/2蛋白的磷酸化水平（p＜0.05）,但在8h时10和20μM DON则可以极显著降低Erk1/2蛋白的磷酸化水平（p＜0.01）。【结论】上述结果提示,DON抑制IPEC-J2细胞增殖和诱导细胞凋亡可能与激活Akt→Erk1/2→FoxO1或Erk1/2→Stat3信号通路有关。但为了确认以上信号通路的作用,还需要用特定信号通路蛋白阻断剂来验证。

关键词：脱氧血腐镰刀菌烯醇肠上皮细胞细胞增殖细胞凋亡信号通路蛋白

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液相-电喷雾质谱法测定饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的残留量

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广东农业科学 2012年第11期39卷 185-187,193页

作者：沈祥广李维铖古小燕邓衔柏华南农业大学兽医学院广东广州515642

建立了液相-电喷雾串联质谱法检测饲料中的脱氧血腐镰刀菌烯醇（DON）。样品用磷酸盐缓冲液（pH7．0）提取，经cts固相萃取净化、5％甲醇再溶解后进行LC-MS／MS分析。质谱采用电喷雾离子源，正离子多重反应监测模式进行定量和定性分析... 详细信息

建立了液相-电喷雾串联质谱法检测饲料中的脱氧血腐镰刀菌烯醇（DON）。样品用磷酸盐缓冲液（pH7．0）提取，经cts固相萃取净化、5％甲醇再溶解后进行LC-MS／MS分析。质谱采用电喷雾离子源，正离子多重反应监测模式进行定量和定性分析。色谱柱采用PhenomenexLuna5μC18（2），流动相为甲醇-O．1％甲酸溶液（30：70）。方法的检测限为20μg，kg，定量限为50μg／kg；在50、250、500μg／kg等3个浓度水平．回收率为75．4％-93．2％，相对标准偏差为5．74％-7．62％。

关键词：脱氧血腐镰刀菌烯醇饲料固相萃取电喷雾串联质谱

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脱氧雪腐镰刀菌烯醇对体外培养人胃癌细胞增殖影响的研究

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对体外培养人胃癌细胞增殖影响的研究

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作者：邢欣河北医科大学

学位级别：硕士

目的:脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)是由禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)产生的单端孢霉烯族毒素,在世界许多国家的粮食和饲料中的污染均非常普遍,也是我国食管癌、胃癌高发区最常见污染真菌毒素之一。许多研究表明,DON可... 详细信息

目的:脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)是由禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)产生的单端孢霉烯族毒素,在世界许多国家的粮食和饲料中的污染均非常普遍,也是我国食管癌、胃癌高发区最常见污染真菌毒素之一。许多研究表明,DON可抑制细胞的分裂,抑制DNA和RNA的合成,抑制蛋白质等生物大分子的合成,对于原核细胞和真核细胞等均具有广泛的细胞毒性作用。目前,有关DON的研究多集中在其检测方法、免疫毒理学以及对正常细胞的影响方面,而对肿瘤细胞影响的研究国内外报道甚少。鉴于DON的上述作用,本研究选择两种人胃腺癌细胞株SGC-7901(高分化)和BGC-823(低分化),观察DON处理对细胞增殖、细胞周期分布及周期相关蛋白—细胞周期素CyclinE和细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白(CKIs)P21表达的影响,以期揭示DON对肿瘤细胞增殖的作用及其机理,全面了解DON的生物作用,为其可能应用提供试验依据。方法: 1细胞培养用含10%胎牛血清,10U/L青霉素,100mg/L链霉素的RPMI-1640培养基于37℃,5%CO条件温箱中体外培养SGC-7901和BGC-823细胞。随机分为对照组和处理组,处理组给予DON,使其终浓度分别为100μg/L、500μg/L及

关键词：脱氧血腐镰刀菌烯醇细胞周期噻唑蓝比色法流式细胞定量检测蛋白免疫印迹免疫细胞化学 CyclinE P21WAF/CIP1

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DON对小鼠骨髓源性树突状细胞的细胞表型和免疫功能的影响

DON对小鼠骨髓源性树突状细胞的细胞表型和免疫功能的影响

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作者：夏兵兵南京农业大学

学位级别：硕士

脱氧血腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)主要是由禾谷镰刀菌在生产过程中产生的有毒代谢产物,是食品和饲料中最常见的毒素之一。DON具有免疫毒性,人和家畜长期暴露DON毒素会导致免疫功能紊乱,对其健康造成极大的危害。树突状细胞(dendr... 详细信息

脱氧血腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)主要是由禾谷镰刀菌在生产过程中产生的有毒代谢产物,是食品和饲料中最常见的毒素之一。DON具有免疫毒性,人和家畜长期暴露DON毒素会导致免疫功能紊乱,对其健康造成极大的危害。树突状细胞(dendritic cell,DC)目前是体内最强的抗原提呈细胞,是特异性免疫应答的启动者,对细胞免疫和体液免疫都有着重要的调节作用。本论文以GM-CSF和IL-4联合培养的小鼠骨髓源性DC为基础,研究DON对LPS诱导小鼠骨髓源性DC的表型和免疫功能的影响,阐述DON引起机体免疫抑制的机制,为更进一步研究真菌毒素引起机体免疫抑制的机制提供试验依据。试验一体外诱导培养小鼠骨髓源性树突状细胞通过GM-CSF(10 ng·mL)和IL-4(10 ng·mL)联合诱导小鼠骨髓细胞,细胞培养至第7天,倒置显微镜观察可见几个或十几个细胞聚集形成大小不一的集落,集落周围可见树突状突起,经流式细胞仪检测,DC纯度达到80%左右,可以满足后续试验的要求。试验二DON对小鼠骨髓源性树突状细胞的形态及表型的影响本试验利用培养好的DC,进行染毒试验。试验分为为空白组、LPS组和DON组,其中DON组有三个浓度梯度,分别为125、250和500 ng·mL,每个组设置三个重复孔。LPS组:加1 μg·mL LPS培养24h,作为阳性对照组;DON组:先加DON培养6 h之后,再加LPS继续培养18 h。24 h后,用显微镜观察细胞的形态学变化,CCK-8法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞表型的变化。结果显示:显微镜镜下观察,LPS组形成较大的集落,周围有很长的毛刺状树突;在125和250 ng·mL DON组中,细胞形成集落并且周围有毛刺状树突;但是,在500 ng·mL DON组中,细胞形成集落,而周围没有毛刺状树突。LPS刺激组与空白组比较,细胞活性没有降低(p>0.05);在125和250 ng·mL DON组中,细胞活性也没有降低(p>0.05),然而在500 ng·mL DON组中,细胞活性降低(p0.05),而在500 ng·mL DON组中,对细胞表面上CD80、CD86和MHC-II表达显著性降低(P0.05),然而,在500 ng·mL DON 组中,IL-6、IL-10、IL-12 和 TNF-α 的 mRNA 表达量显著性降低(P<0.05)。125和250 ng·mL DON对DC吞噬右旋葡聚糖能力与LPS组比较,几乎没有变化,而在500 ng·mL DON吞噬右旋葡聚糖能力提高了 12.2%。

关键词：脱氧血腐镰刀菌烯醇树突状细胞脂多糖免疫毒性

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