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华支睾吸虫囊蚴脱囊的超微结构观察

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2023年第5期41卷 601-608页

作者：李晓芹赖雅诗陈豫吕嘉慧韦帅张立林何姗姗石云良李艳文广西医科大学基础医学院寄生虫学教研室南宁530021 广西高校区域性疾病基础研究重点实验室(广西医科大学) 南宁5300213 广西横州市疾病预防控制中心横州530300 广西河池市人民医院医学检验科河池547000

目的利用扫描电子显微镜和透射电子显微镜对华支睾吸虫囊蚴脱囊的超微结构进行观察和分析。方法取华支睾吸虫阳性麦穗鱼,去除头、鱼鳞和内脏,称重后绞碎,按1 g∶10 ml比例加入人工消化液(成分为0.6 g胃蛋白酶,100 ml生理盐水,1 ml浓盐... 详细信息

目的利用扫描电子显微镜和透射电子显微镜对华支睾吸虫囊蚴脱囊的超微结构进行观察和分析。方法取华支睾吸虫阳性麦穗鱼,去除头、鱼鳞和内脏,称重后绞碎,按1 g∶10 ml比例加入人工消化液(成分为0.6 g胃蛋白酶,100 ml生理盐水,1 ml浓盐酸),于37℃消化过夜后反复过滤,体视显微镜下分离成熟囊蚴。加入0.025%胰蛋白酶溶液(pH=7.4),37℃孵育约3 min,将脱囊后尾蚴、未完全脱出后尾蚴、外形较完整囊蚴及脱下空囊分开收集,使用3%戊二醛与1%四氧化锇固定制样。样品使用50%、70%、80%、90%、100%乙醇逐级浸泡脱水(每级10 min,100%乙醇脱水重复3次),100%六甲基二硅烷浸泡3次(每次10 min),干燥后镀膜喷金,使用扫描电子显微镜观察样品;按50%、70%、90%乙醇、1∶1混合液(90%乙醇∶90%丙酮)、90%、100%丙酮逐级脱水(每级10 min,100%丙酮脱水重复3次),依次于丙酮与包埋剂(环氧树脂618)1∶1、1∶3混合液与全包埋剂中浸泡后聚合处理,修块、切片、醋酸铀⁃柠檬酸铅双重染色,使用透射电子显微镜观察样品。结果扫描电镜下可见囊蚴外观出现了局部膨胀或凹陷、褶皱及塌陷、囊壁内外层分离;脱囊形成的线状裂口长、边缘平整,未能脱出的后尾蚴被软塌的囊壁包裹,其上皮棘刺穿囊壁;脱囊后尾蚴背、腹面遍布体棘,腹吸盘明显大于口吸盘,口、腹吸盘内壁结构不同;排泄囊内填满大小不一圆球形排泄颗粒。透射电镜下显示,脱囊后尾蚴体壁为合胞体结构,由外向内可见皮层外质膜下为电子致密的颗粒状基质,基质向表面形成突起,基质内含许多分泌颗粒及大小不等囊泡;皮棘根部从基质膜发出,穿过基质从皮层表面穿出;基层厚度差异较大,内含多个高电子密度分泌小体;外环肌和内纵肌发达,深入到细胞层,经胞质管运送的物质在远端形成囊泡;皮层细胞间物质发达,充满杂乱分布的管状、大小不等的囊泡结构及线粒体。结论囊蚴凭借发达的肌肉组织剧烈运动,在脱囊中起积极作用;皮棘有助于后尾蚴尽快摆脱软化囊壁的包裹;囊内后尾蚴可能借助运动触碰囊壁方式使皮层分泌物可直接作用于内壁,发挥化学性软化内壁作用来协助脱囊。

关键词：华支睾吸虫脱囊超微结构扫描电子显微镜透射电子显微镜

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肝片形吸虫囊蚴脱囊条件及脱囊蚴形态观察

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2023年第2期41卷 198-201页

作者：方文杨敬王海英陈绍荣刘榆华李天美大理州血吸虫病防治研究所云南大理671000

目的观察肝片形吸虫囊蚴脱囊所需条件及脱囊蚴的形态。方法收集牛源肝片形吸虫虫卵,28℃水浴10~11 d后,将孵化出的毛蚴感染小土蜗,感染后35~40 d收集囊蚴。将囊蚴分为3组,每组30个囊蚴,分别置于50%、75%和100%胆汁中,每组囊蚴再均分为... 详细信息

目的观察肝片形吸虫囊蚴脱囊所需条件及脱囊蚴的形态。方法收集牛源肝片形吸虫虫卵,28℃水浴10~11 d后,将孵化出的毛蚴感染小土蜗,感染后35~40 d收集囊蚴。将囊蚴分为3组,每组30个囊蚴,分别置于50%、75%和100%胆汁中,每组囊蚴再均分为2个小组,分别于37、39℃水浴,每隔30 min观察后尾蚴逸出情况,以选择最适脱囊温度。另设15个实验组,每组取10个囊蚴,囊蚴经人工胃液处理10 min、30 min、1 h、1.5 h和2 h后,分别加至50%、75%和100%胆汁中,用最适脱囊温度孵育6 h,每隔30 min观察脱囊蚴逸出情况,并镜下观察脱囊蚴形态。以蒸馏水、生理盐水、人工胃液以及50%、 75%和100%胆汁直接处理为对照组。未孵育出脱囊蚴的囊蚴继续观察至24 h。结果经不同温度孵育24 h后,39℃下脱囊蚴逸出数量最多,50%、 75%、 100%胆汁中分别逸出9、 12和4条,因此最适水浴温度为39℃。不同实验组中,最早观察到脱囊蚴的为人工胃液处理2 h+100%胆汁组,共耗时3 h (胆汁孵育1 h);逸出数量最多的为人工胃液处理1 h+100%胆汁组,胆汁孵育6 h内共逸出8条脱囊蚴。6个对照组在观察时间内均未见脱囊蚴,但不同浓度胆汁处理24 h后可见已死亡的脱囊蚴。镜下可见,脱囊蚴呈长椭圆形,与尾蚴体部形态相似,为成虫的雏形,大小为(228.0~361.0)μm×(114.0~209.0)μm,平均291.0μm×163.9μm。口腹吸盘清晰可见;肠管呈黄褐色,自口吸盘后、咽及食管下,分两支盘曲重叠,充满虫体两侧直至尾部。结论肝片形吸虫囊蚴不会自行脱囊,脱囊过程需要胃肠消化液等因素的共同作用。脱囊蚴与尾蚴体部形态、大小相似。

关键词：肝片形吸虫囊蚴脱囊脱囊蚴

华支睾吸虫囊蚴在小鼠体内脱囊时间与部位的观察

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2015年第3期33卷 232-233页

作者：孙艳宏刘继鑫齐齐哈尔医学院病原生物学教研室齐齐哈尔161006

用华支睾吸虫囊蚴灌胃感染昆明小鼠(20个/鼠)。于感染后0.5、1、2、4、8、16、32和64 h处死小鼠。发现小鼠的胃和小肠均有囊蚴脱囊,主要见于十二指肠。脱囊时间集中在感染后2、4、8和16 h。感染后0.5 h即在肝胆管发现童虫,随着感染时间... 详细信息

用华支睾吸虫囊蚴灌胃感染昆明小鼠(20个/鼠)。于感染后0.5、1、2、4、8、16、32和64 h处死小鼠。发现小鼠的胃和小肠均有囊蚴脱囊,主要见于十二指肠。脱囊时间集中在感染后2、4、8和16 h。感染后0.5 h即在肝胆管发现童虫,随着感染时间的延长,虫体数量也随之增多,但至32 h后肝胆管内虫数不再增多。

关键词：华支睾吸虫囊蚴脱囊

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不同条件对隐孢子虫卵囊体外脱囊的影响

中国人兽共患病学报 2010年第3期26卷 243-245,251页

作者：黄磊乔亚辉冯超梁鹏帅张素梅宁长申张龙现河南农业大学牧医工程学院郑州450002

目的分析隐孢子虫在体外不同条件下的脱囊率,以用于隐孢子虫体外培养及免疫学研究。方法以安氏隐孢子虫卵囊为模型,研究比较卵囊保存方法及时间、卵囊脱囊前处理过程、脱囊温度及时间、脱囊液选择等因素对隐孢子虫卵囊脱囊率的影响。结... 详细信息

目的分析隐孢子虫在体外不同条件下的脱囊率,以用于隐孢子虫体外培养及免疫学研究。方法以安氏隐孢子虫卵囊为模型,研究比较卵囊保存方法及时间、卵囊脱囊前处理过程、脱囊温度及时间、脱囊液选择等因素对隐孢子虫卵囊脱囊率的影响。结果0.5%次氯酸钠处理可提高卵囊脱囊率,但与未处理组相比差异不显著(P>0.05)。0.75%胆酸盐和0.1%胆汁溶液均可以促进卵囊脱囊,与仅仅使用0.25%胰酶或不使用任何脱囊液组相比差异显著(P囊在酸性条件下(pH=3)脱囊率略高于中性条件(pH=7.2),差异不显著(P>0.05),但均显著高于碱性条件(pH=9)(P囊脱囊对温度极敏感,24℃水浴卵囊脱囊率极低,显著低于37℃水浴(P囊脱囊率随脱囊时间而升高。结论温度、酸碱度、脱囊液是影响隐孢子虫卵囊脱囊率的重要因素,采用先将纯化后的卵囊置于0.5%次氯酸钠溶液4℃作用10min,然后在0.75%胆酸盐溶液中37℃孵育3h,可以得到较高的卵囊脱囊率。

关键词：隐孢子虫脱囊次氯酸钠脱囊液

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柔嫩艾美耳球虫脱囊过程的扫描电镜观察

动物学杂志 1990年第1期25卷 1-2页

作者：朱冠吴宝华浙江省医学科学院寄生虫病研究所杭州大学生物系

本文对柔嫩艾美耳球虫的体外脱囊过程进行了扫描电镜观察。结果表明该虫表面粗糙,无其他生物学结构。孢子囊呈橄榄状,斯氏体明显。在脱囊介质作用下,孢子囊壁强度发生变化,出现不同程度的塌陷和皱折。未观察到因斯氏体消失而直接留下的... 详细信息

本文对柔嫩艾美耳球虫的体外脱囊过程进行了扫描电镜观察。结果表明该虫表面粗糙,无其他生物学结构。孢子囊呈橄榄状,斯氏体明显。在脱囊介质作用下,孢子囊壁强度发生变化,出现不同程度的塌陷和皱折。未观察到因斯氏体消失而直接留下的开口。子孢子香蕉状,表面有数个微孔呈不规则排列,顶器短突状,无其他表面结构。

关键词：艾美耳球虫脱囊电镜

三种不同寄生部位隐孢子虫卵囊体外脱囊条件的比较

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中国兽医科学 2010年第7期40卷 692-695页

作者：黄磊梁鹏帅张素梅张云菅复春宁长申张龙现河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002

为研究不同寄生宿主及不同寄生部位隐孢子虫的生物学特性,以安氏隐孢子虫、贝氏隐孢子虫、微小隐孢子虫和人隐孢子虫为研究对象,分别选择在PBS和7.5g/L胆酸盐溶液中水浴脱囊的方法比较上述4种隐孢子虫卵囊脱囊率,并进一步比较贝氏隐孢... 详细信息

为研究不同寄生宿主及不同寄生部位隐孢子虫的生物学特性,以安氏隐孢子虫、贝氏隐孢子虫、微小隐孢子虫和人隐孢子虫为研究对象,分别选择在PBS和7.5g/L胆酸盐溶液中水浴脱囊的方法比较上述4种隐孢子虫卵囊脱囊率,并进一步比较贝氏隐孢子虫卵囊在不同温度及脱囊液中的脱囊率。结果显示,胃腺寄生类群安氏隐孢子虫在37℃PBS中即有较高脱囊率,与在37℃7.5g/L胆酸盐溶液中相比差异不显著(P>0.05)。肠道寄生类群微小隐孢子虫和人隐孢子虫在37℃PBS中脱囊率极低,而在37℃7.5g/L胆酸盐溶液中脱囊率显著升高(P脱囊率,与在37℃7.5g/L胆酸盐溶液中的脱囊率接近(P>0.05),提高脱囊温度至40℃,则脱囊率显著升高,并且在PBS和7.5g/L胆酸盐溶液中脱囊率差异显著(P脱囊率(P>0.05)。结果表明,胃腺寄生类群在合适温度即有较高脱囊率,而肠道寄生类群则不仅需要合适的温度还需要合适的脱囊液。贝氏隐孢子虫卵囊对脱囊条件要求更接近于胃腺寄生类群,这对进一步了解隐孢子虫生物学特性及体外培养研究有借鉴意义。

关键词：隐孢子虫卵囊脱囊寄生部位

斯氏艾美耳球虫体外脱囊过程中孢子囊余体的形态学和组织化学研究

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河南农业大学学报 1990年第3期24卷 327-331页

作者：李祥瑞汪志楷河南农业大学牧医系南京农业大学

本研究观察了斯氏艾美耳球虫Eimeria stiedai子孢子体外脱囊过程中孢子囊余体的变化,并用组织化学技术研究了其化学特性。发现在子孢子脱囊的初期,即斯氏体离去和子孢子脱出之前,孢子囊余体已分散到整个孢子囊内,呈颗粒状,运动性强。第... 详细信息

本研究观察了斯氏艾美耳球虫Eimeria stiedai子孢子体外脱囊过程中孢子囊余体的变化,并用组织化学技术研究了其化学特性。发现在子孢子脱囊的初期,即斯氏体离去和子孢子脱出之前,孢子囊余体已分散到整个孢子囊内,呈颗粒状,运动性强。第1个子孢子脱出后,余体颗粒密集于第2个子孢子周围,活动剧烈。脱囊完成后,余体颗粒向一起集中,在孢子囊钝端形成圆球状体,周围似乎有膜包围,此时巳失去运动性。组织化学研究证明,斯氏艾美耳球虫孢子囊余体含有多量的多糖、脂肪及蛋白质。同时还发现,孢子囊余体内有较强的酸性磷酸酶活性。

关键词：艾美耳球虫形态学组织化学脱囊

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次氯酸钠对隐孢子虫卵囊在体外脱囊的影响

中国人兽共患病杂志 1998年第5期14卷 53-55页

作者：张健騑杨世广 MarkC.Healey 广东农科院兽医研究所广州五山510640 美国犹他州立大学

隐孢子虫卵囊的无菌化及体外脱囊是进行虫体体外细胞培养不可缺少的环节，本试验通过使用不同浓度次氯酸钠提前处理卵囊，在不同脱囊液的条件下比较各处理组的脱囊率。试验结果表明，未经任何处理的卵囊，在37C的温度下可发生脱囊，但... 详细信息

隐孢子虫卵囊的无菌化及体外脱囊是进行虫体体外细胞培养不可缺少的环节，本试验通过使用不同浓度次氯酸钠提前处理卵囊，在不同脱囊液的条件下比较各处理组的脱囊率。试验结果表明，未经任何处理的卵囊，在37C的温度下可发生脱囊，但脱囊率只有15．5％（脱囊时间90min）；经100％bleach（含5．25％次氨酸钠）作用30min，对卵囊的活性有很大的影响，在T＋TDC（Trypsin＋taurodeoxycholicacid）脱囊液中，其脱囊率只有17％（约正常卵囊的20％）；5％～20％的bleach对卵囊的活性没有明显的影响，反而有很强的刺激脱囊作用，卵囊经这一浓度范围的bleach处理后．即使没有酶的存在，其脱囊率也可达到80％以上。单独使用酶或bleach均有很好的脱囊作用，但两者合并使用，并不能提高新鲜卵囊的脱囊率。对用于细胞培养的卵囊，推荐用10％～20％bleach处理30min，这一处理，既可得到无菌化的卵囊，又有高的脱囊率。

关键词：隐孢子虫脱囊次氯酸钠体外脱囊

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华支睾吸虫囊蚴在大鼠不同消化液的脱囊试验

中国人兽共患病学报 2008年第9期24卷 868-869页

作者：叶春艳吴秀萍刘明远杨秀云李玉香王学林王峰吉林大学第一医院感染科长春130021 吉林大学人兽共患病教育部重点实验室长春130062

目的研究华支睾吸虫在大鼠不同部位消化液内的脱囊情况。方法以大鼠的新鲜胃液、十二指肠液、小肠上段液、小肠中段液、小肠下段液和大肠液作为脱囊液,模拟体内消化道环境,观察华支睾吸虫囊蚴在30min后的脱囊情况。如果脱囊率小于10%,... 详细信息

目的研究华支睾吸虫在大鼠不同部位消化液内的脱囊情况。方法以大鼠的新鲜胃液、十二指肠液、小肠上段液、小肠中段液、小肠下段液和大肠液作为脱囊液,模拟体内消化道环境,观察华支睾吸虫囊蚴在30min后的脱囊情况。如果脱囊率小于10%,重复试验,把作用时间延长为4h,其他条件相同。结果华支睾吸虫囊蚴在胃液中30min不能脱囊,延长时间至4h仍未见脱囊;在十二指肠液、小肠上段液、小肠中段液、小肠下段液和大肠液中30min均能大量脱囊,脱囊率分别在97.7%、94.6%、95.9%、91.7%、93.8%,各组间没有显著性差异;脱囊的幼虫活力较好。结论华支睾吸虫囊蚴在胃液中4h内不能脱囊,能在肠液中30min内成功脱囊,脱囊幼虫活力较好;采用新鲜肠液模拟体内环境也是华支睾吸虫囊蚴体外脱囊的一种好方法。

关键词：华支睾吸虫囊蚴脱囊