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UPLC-MS/MS测定醒脑静口服制剂中3种环烯醚萜在大鼠脑中含量及其脑药动力学研究

中国中药杂志 2014年第12期39卷 2351-2355页

作者：徐攀杜守颖陆洋白洁刘慧敏杜秋陈振振王振北京中医药大学北京100102

为了建立UPLC-MS/MS同时测定大鼠脑中栀子苷、京尼平龙胆双糖苷、栀子苷酸灵敏可靠的分析方法，并对这3种环烯醚萜苷在脑中风大鼠口服醒脑静后的脑药动力学进行研究。该实验中脑浆样品沉淀蛋白2次；采用Acquity BEH C18柱，流动相为乙腈... 详细信息

为了建立UPLC-MS/MS同时测定大鼠脑中栀子苷、京尼平龙胆双糖苷、栀子苷酸灵敏可靠的分析方法，并对这3种环烯醚萜苷在脑中风大鼠口服醒脑静后的脑药动力学进行研究。该实验中脑浆样品沉淀蛋白2次；采用Acquity BEH C18柱，流动相为乙腈-1%甲酸-水梯度洗脱，质谱采用电喷雾电离源（ESI），多反应监测（MRM）进行负离子检测，样品分析时间为3.5 min。结果表明3种环烯醚萜苷成分在大鼠脑中的线性关系良好，提取回收率在99.6%~114.3%，日内、日间精密度和准确度良好，稳定性等均符合要求。各物质在中风大鼠脑中的t1/2和MRT相似，栀子苷与京尼平龙胆双糖苷有双峰现象，而栀子苷酸为单峰。表明该方法特异灵敏、准确可靠，可用于醒脑静口服制剂的脑药动力学研究。

关键词： UPLC—MS MS 栀子苷京尼平龙胆双糖苷栀子苷酸醒脑静脑药动力学脑中风

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通窍散瘀方经不同途径给药血药和脑药动力学的比较研究

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中华中医药杂志 2014年第8期29卷 2668-2672页

作者：陈晓兰陆洋杜守颖赵雪姣李鹏跃贵阳中医学院贵阳550002 北京中医药大学中药学院北京100102

目的:通过比较通窍散瘀(TQSY)方经不同途径给药后血药及脑药动力学,评价通窍散瘀方治疗脑中风的最佳给药途径。方法:通窍散瘀方经不同途径给予小鼠后于不同时间点取血和全脑,以甲醇沉淀血浆蛋白质,反相高效液相色谱测定葛根素在小鼠血... 详细信息

目的:通过比较通窍散瘀(TQSY)方经不同途径给药后血药及脑药动力学,评价通窍散瘀方治疗脑中风的最佳给药途径。方法:通窍散瘀方经不同途径给予小鼠后于不同时间点取血和全脑,以甲醇沉淀血浆蛋白质,反相高效液相色谱测定葛根素在小鼠血浆和脑组织中的浓度,用Kinetica程序软件计算药代动力学参数和生物利用度,并计算脑靶向系数(Re)和药物脑靶向指数(DTI)。结果:鼻腔给药后脑药Re为132.25%,DTI为2.70,要显著高于注射组。灌胃组DTI为0.50。结论:TQSY方鼻腔给药后脑靶向性要高于注射组和灌胃给药组,显示出了鼻腔给药"引药入脑"的优势。

关键词：通窍散瘀方血药动力学脑药动力学脑靶向系数药物靶向指数

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蒙药苏格木勒-3中环氧型单萜类成分桉油精透过血脑屏障及其脑药动力学研究

蒙药苏格木勒-3中环氧型单萜类成分桉油精透过血脑屏障及其脑药动...

引用

作者：道力格玛内蒙古医科大学

学位级别：硕士

目的:本课题旨在研究苏格木勒-3挥发油及其环氧型单萜类成分桉油精对血脑屏障(Blood-brain barrier,BBB)通透性的影响,建立桉油精大鼠脑组织内含量测定方法,并对其进行方法学验证。基于已建立的体内含量测定方法,完成其脑内药物动力学研... 详细信息

目的:本课题旨在研究苏格木勒-3挥发油及其环氧型单萜类成分桉油精对血脑屏障(Blood-brain barrier,BBB)通透性的影响,建立桉油精大鼠脑组织内含量测定方法,并对其进行方法学验证。基于已建立的体内含量测定方法,完成其脑内药物动力学研究,探究蒙药苏格木勒-3作用于神经系统的物质基础,揭示蒙药苏格木勒-3中环氧型单萜类成分桉油精潜在的药用价值。方法:***大鼠随机分为空白对照组、PCPA模型组、苏格木勒-3挥发油低剂量(13 mg/kg)、中剂量(130 mg/kg)、高剂量(260 mg/kg)及桉油精低剂量(6.5 mg/kg)、中剂量(65 mg/kg)和高剂量(130 mg/kg),共8组。除空白对照组外,其余各组大鼠均连续2天给予300 mg/kg对氯苯丙氨酸(4-Chloro-DL-phenylalanine,PCPA)制备失眠模型,模型成立后给予相应干预药物,连续7天。末次给药后,通过尾静脉注射伊文氏蓝(Evans blue,EB)染料,采集大鼠脑组织并利用荧光分光光度法测定脑组织内EB含量,评估BBB的开放作用。利用透射电镜(transmission electron microscopy,TEM)观察大鼠大脑皮质区BBB的超微结构变化,揭示苏格木勒-3挥发油及其环氧单萜成分桉油精对BBB超微结构的作用。2.采用GC-MS/MS分析技术,建立桉油精大鼠脑组织内含量测定方法,并对其进行方法学验证。色谱条件:Agilent J&W HP-5ms色谱柱(30m×0.25 mm,0.25μm);载气为高纯氦气,流速为2.25 m L/min;碰撞气为高纯氮气,流速为1.5 m L/min。升温程序:100℃1.5 min;以25℃/min升温至280℃,1.5 min;总运行23.7 min。前进样口温度为250℃;分流比为5∶1,进样量为1μL。质谱条件:离子源温度230℃,四极杆温度150℃,电子电离(electron ionization,EI)电压70e V,溶剂延迟时间9 min,数据采集采用多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式。以丁香酚为内标法定量并对其进行方法学验证。***大鼠给予单剂量32.5 mg/kg桉油精后分别于0.05、0.5、1、2.5、5、10、15 h采集大脑,从而完成桉油精脑药动力学。结果:1.蒙药苏格木勒-3挥发油各剂量组大鼠脑组织中EB渗出量均高于空白对照组(P脑组织中EB渗出量显著高于空白对照组(P脑皮质毛细血管管腔不规则,内皮细胞连接疏松,基底膜外星形胶质细胞肿胀。SHG组与AG组显著增加了内皮细胞间紧密连接疏松状态和吞饮小泡数量。2.采用乙腈沉淀蛋白法,作为脑组织含量测定前处理方法。大鼠脑组织中桉油精于1～50000 ng/m L浓度范围内,具有良好的线性关系,相关系数r>0.999,定量下限为1 ng/m L,提取回收率为66.7%～73.4%,日内精密度小于6.33%,日间精密度小于11.03%。4°C下,24 h内稳定性RSD小于5.33%,自动进样器12 h内稳定性RSD小于9.15%,-20℃条件下冷冻30天稳定性RSD小于9.21%,3次冷冻-解冻循环条件下稳定性RSD小于8.63%,结果提示,稳定性良好,稳定性RSD均在10%以内。3.建立大鼠脑组织内桉油精含量测定方法后,进行单次剂量灌胃桉油精,完成其脑药动力学研究。桉油精脑药代动力学参数:C为3702±400.39 ng/m L,AUC_((0→t))为10238±516.69,t为3.06±0.25 h,t为0.5±0.0 h。结论:本实验证实了苏格木勒-3挥发油及其环氧性单萜类化合物桉油精能够提高BBB通透性。本研究所建立的脑组织内桉油精GC-MS/MS含量测定的方法,简便、准确、灵敏,为后期测定单萜类挥发性化合物提供了实验依据。桉油精口服后,脑内具有快速分布和代谢的特点。此特点揭示了桉油精潜在的药用价值,为中枢神经系统疾病候选药物开发提供了实验数据。

关键词：桉油精苏格木勒-3挥发油血脑屏障通透性气相色谱-串联质谱法脑药动力学

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