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新型微管靶向化合物3r对高侵袭性脑胶质瘤的抑制作用及机制研究

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新型微管靶向化合物3r对高侵袭性脑胶质瘤的抑制作用及机制研究

作者：郑宗雪山东大学

学位级别：硕士

研究背景与目的脑肿瘤流行病学统计发现,原发性脑肿瘤约占所有癌症的2%,其发病随着年龄的增长而增加,其中32%为恶性脑肿瘤,68%为非恶性脑肿瘤。脑胶质瘤是最常见的原发性恶性肿瘤,产生于大脑及脊髓胶质细胞的癌变。因脑胶质瘤具有高发... 详细信息

研究背景与目的脑肿瘤流行病学统计发现,原发性脑肿瘤约占所有癌症的2%,其发病随着年龄的增长而增加,其中32%为恶性脑肿瘤,68%为非恶性脑肿瘤。脑胶质瘤是最常见的原发性恶性肿瘤,产生于大脑及脊髓胶质细胞的癌变。因脑胶质瘤具有高发病率、高复发率、高死亡率以及低治愈率等特点成为当下肿瘤领域研究的热点。目前脑胶质瘤的治疗过程中应用的一线药物主要为替莫唑胺,还有其他治疗方案如PCV化疗方案(甲基苄肼(Procarbazine,PCZ),长春新碱(vincristine,VCR),洛莫司汀(lomustine,CCNU))。针对脑胶质瘤的治疗药物缺乏,患者愈后差、生存期短等问题,寻找新的药物具有很重要的治疗意义。研究发现吲哚类化合物在对抗肿瘤中是通过影响多种靶点来发挥作用的,包括影响蛋白质、核酸、血管生成、侵袭转移、同时可以调控多种信号转导通路等,具有重要的研究意义及广阔的应用前景,在抗癌药开发中也一直深受关注,且已有研究发现吲哚类药物也可透过血脑屏障作用于脑瘤。因此本文选择了实验室中吲哚类系列活性化合物进行筛选,发现化合物3r具有较好的抗脑胶质瘤作用,并深入研究化合物3r在体内外对脑胶质瘤增殖、侵袭、迁移、血管生成的影响,探讨了化合物3r对脑胶质瘤的潜在治疗作用及作用机制。实验方法和结果1.采用MTT方法,顺铂(Cisplatin,DDP)作为阳性对照药,筛选抗脑胶质瘤活性化合物及脑胶质瘤敏感细胞株。结果发现化合物3r活性最强,对U87和U251细胞的抑制作用优于C6细胞。2.采用MTT方法,顺铂作为阳性对照药,检测了化合物3r对多种人正常细胞(HUVECs、bEnd.3、NHA)的细胞毒性,结果发现化合物3r具有较低的细胞毒性。3.在倒置荧光显微镜下观察化合物3r对U87和U251细胞形态的影响。结果发现,化合物3r可改变细胞的形态,使细胞由扁平变圆,且碎片化增多。4.采用克隆形成实验检测化合物3r对U87和U251细胞增殖及克隆形成能力的影响,结果发现化合物3r浓度依赖性地抑制克隆形成能力。5.采用Transwell实验、划痕实验检测化合物3r对U87和U251细胞侵袭、细胞迁移能力的影响,Western blot方法研究了相关蛋白表达水平的变化。结果发现化合物3r浓度依赖性地降低细胞内N-cadherin、MMP9和MMP2蛋白表达,增加E-cadherin蛋白表达,显著抑制细胞EMT过程,从而抑制侵袭迁移能力。6.采用血管生成拟态(vasculogenicmimicry,VM)实验,检测化合物3r对U87和U251细胞拟态血管生成能力的影响。实验表明,化合物3r对U87和U251细胞的拟态血管生成具有明显抑制作用。7.通过计算机模拟技术、分子模拟软件Schrodinger将化合物3r与多种相关蛋白进行分子模拟对接,发现化合物3r与微管蛋白以及GSK3β结合。8.采用Western blot方法检测化合物3r抑制U87和U251细胞侵袭、迁移能力的分子机制。结果发现,化合物3r通过调控GSK3β/β-catenin信号通路,使GSK3β蛋白表达水平降低,β-catenin表达下降,进而减少β-catenin入核影响EMT过程抑制细胞侵袭迁移。9.通过免疫荧光实验检测化合物3r对U87和U251细胞微管组织的影响。化合物3r对细胞周期及周期相关蛋白的变化采用PI染色法,流式细胞仪和Western blot方法检测。结果显示,化合物3r能够浓度依赖性地抑制U87和U251细胞的微管形成,可以将细胞阻滞在G2/M期,其作用与降低G2/M期蛋白Cyclin B1、CDK1的表达水平有关。10.通过Hoechst 33342染色法定性,AnnexinV-FITC/PI双染法定量检测化合物3r对脑胶质瘤细胞U87和U251细胞凋亡的影响,Western blot方法检测了细胞凋亡蛋白表达水平的变化。Hoechst 33342染色法、AnnexinV-FITC/PI双染法检测表明,化合物3r可以促进U87和U251细胞的凋亡,增加Bax表达水平,使Bcl-2表达水平下调。11.采用吖啶橙(acridineorange,AO)染色法,检测化合物3r对脑胶质瘤细胞U87和U251细胞自噬的影响。结果发现,化合物3r对U87和U251细胞自噬的影响不明显。12.采用Chemdraw及ADMET软件预测化合物3r透过BBB的动力学性质。通过体外细胞摄取实验,质谱成像代谢组学检测化合物3r透过血脑屏障(BBB)的能力。结果发现,化合物3r具有透过BBB的动力学性质,在体外可以被脑微血管内皮细胞及脑胶质瘤细胞所摄取,同时化合物3r可透过血脑屏障分布在脑内,积累于脑肿瘤部位。13.建立裸鼠U87细胞原位脑胶质瘤的模型,通过小动物活体成像系统检测化合物3r对裸鼠U87细胞原位脑胶质瘤生长的影响。实验结果证实,随着化合物3r浓度的增加,对脑内肿瘤的抑制作

关键词：吲哚类化合物3r 脑胶质瘤细胞微管 GSK3β 分子机制

自噬性死亡在塞来昔布对SHG-44细胞辐射增敏效应中作用的初步探讨

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自噬性死亡在塞来昔布对SHG-44细胞辐射增敏效应中作用的初步探讨

作者：聂斌苏州大学

学位级别：硕士

目的:观察塞来昔布的辐射增敏效应,探讨自噬和自噬性死亡在塞来昔布对脑胶质瘤细胞SHG-44辐射增敏效应中的作用。方法:选择脑胶质瘤细胞株SHG-44作为研究对象,以不同浓度塞来昔布(0、30、50、100μM)设立药物组(D组),以不同剂量6MV-X... 详细信息

目的:观察塞来昔布的辐射增敏效应,探讨自噬和自噬性死亡在塞来昔布对脑胶质瘤细胞SHG-44辐射增敏效应中的作用。方法:选择脑胶质瘤细胞株SHG-44作为研究对象,以不同浓度塞来昔布(0、30、50、100μM)设立药物组(D组),以不同剂量6MV-X线照射(0、1、2、4、6、8Gy)设立辐射组(R组),两者交互设立联合组(D+R组)。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验检测塞来昔布对SHG-44细胞增殖抑制作用;集落形成法检测塞来昔布对SHG-44辐射增敏作用;流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡;吖啶橙染色、绿色荧光FITC- LC3-Ⅱ抗体和电镜共同检测细胞内自噬体的分布和数量。结果: 1. MTT检测显示:塞来昔布抑制SHG-44细胞增殖,与浓度和时间相关,随药物浓度增加以及作用时间延长细胞活性越低(P细胞存活曲线相关参数显示:塞来昔布增加SHG-44细胞的辐射敏感性,放射增敏比SERD0=1.20。 2.流式细胞仪对细胞周期和凋亡的检测显示:塞来昔布30μM诱导肿瘤细胞G2/M期阻滞,并延长辐射8Gy诱导的细胞G2/M期阻滞时间(C、D、R和D+R组的G2/M分别为:9.87±1.34%,20.14±2.52%,29.15±1.99%,34.26±2.20%,P细胞凋亡(R:8.24±0.93%,D+R:9.71±1.24%,P=0.158)。随着辐射剂量增加,G2/M期细胞比例增多(2Gy、6Gy和8Gy G2/M:14.06±1.37%、18.72±3.77%、29.15±1.99%,P细胞自噬的检测:①细胞自噬形态学的电镜观察发现塞来昔布组、辐射组和联合组的细胞胞浆内可见不同阶段自噬小体,而无明显的核浓缩和核碎片;②细胞吖啶橙染色发现塞来昔布30μM联合辐射8Gy组细胞胞质内染成红色的酸性囊泡结构数量高于对照组、塞来昔布30μM组和辐射8Gy组(6.19±0.56 vs. 1.08±0.21、1.94±0.06、2.71±0.14,P细胞胞质形成绿色小点,联合组阳性细胞比例高于对照组、药物组和辐射组(43.51±3.26% vs. 9.34±1.05%、18.46±2.67 %、24.81±2.04%, P细胞比例增多,同时细胞自噬水平也相应增加,统计软件对细胞自噬水平和细胞G2/M期比例行相关性分析,显示二者呈线性相关(相关系数r=0.97,P细胞自噬水平增加,细胞的克隆源性存活呈指数性递减。统计软件分析,显示细胞存活分数与细胞自噬水平成指数性负相关(相关指数R=0.98 P脑胶质瘤细胞株SHG-44的辐射敏感性。 2.塞来昔布增强辐射诱导SHG-44细胞G2/M期阻滞,促进细胞自噬。诱导细胞自噬性死亡,可能是塞来昔布增强脑胶质瘤细胞辐射敏感性机制之一。 3.细胞自噬和自噬性死亡可能与细胞G2/M期阻滞有关。

关键词：自噬脑胶质瘤细胞辐射塞来昔布凋亡

艾迪注射液对不同恶性肿瘤细胞放射增敏作用及机制研究

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艾迪注射液对不同恶性肿瘤细胞放射增敏作用及机制研究

作者：宋瑶苏州大学

学位级别：硕士

目的:观察艾迪注射液对三种恶性肿瘤细胞的辐射增敏效应,并探讨它对脑胶质瘤细胞SHG44的辐射增敏作用机制。方法:MTT法测定艾迪注射液对脑胶质瘤细胞株SHG44、非小细胞肺癌细胞株H460、肝癌细胞株HepG2的抑制作用;应用成克隆法观察艾... 详细信息

目的:观察艾迪注射液对三种恶性肿瘤细胞的辐射增敏效应,并探讨它对脑胶质瘤细胞SHG44的辐射增敏作用机制。方法:MTT法测定艾迪注射液对脑胶质瘤细胞株SHG44、非小细胞肺癌细胞株H460、肝癌细胞株HepG2的抑制作用;应用成克隆法观察艾迪注射液对三种细胞的放射增敏作用;流式细胞仪分析艾迪注射液对SHG44细胞株周期分布及凋亡率的影响;Western印迹法检测CyclinB1及Wee1蛋白在SHG44细胞株中表达的变化,利用Quantity One软件定量分析。结果: 1.不同浓度的艾迪注射液(3-192mg/ml)对三种肿瘤细胞作用48h后均有增殖抑制作用,且随着浓度的增加细胞活性降低;2.艾迪注射液对三种肿瘤细胞均有明显的放射增敏作用。SHG44细胞株中,单纯照射组平均致死剂量(D)、准阈剂量(D)分别为2.14及1.58;15mg/ml艾迪注射液作用细胞48h后行照射组D、D值分别为1.50及1.09,辐射增敏比(SER)、SER分别为1.43及1.45;H460细胞株中,单纯照射组D、D值分别为2.02及1.72;12mg/ml艾迪注射液作用细胞48h后行照射组D、D值分别为1.72及1.26,SER、SER分别为1.17及1.37;HepG2细胞株中,单纯照射组D、D分别为2.02及0.74;12mg/ml艾迪注射液作用细胞48h后行照射组D、D分别为1.75及0.62,SER、SER分别为1.15及1.20;3.流式细胞仪对SHG44细胞周期和凋亡的检测结果显示:15mg/ml艾迪注射液增强6Gy辐射诱导的SHG44细胞G2/M期阻滞(R和D+R组的G2/M期比例分别为16.77%±1.10和26.86%±1.37,P细胞后,细胞中CyclinB1蛋白表达量与对照组比较明显降低,Wee1蛋白表达量与对照组比较明显增高;药物与放射联合作用SHG44细胞后,CyclinB1蛋白表达量与放射组比较明显降低,Wee1蛋白表达量与对照组比较明显增高;Weel蛋白表达量与细胞G2/M期比例成正相关(r=0.941,P细胞G2/M期比例成负相关(r=-0.945,P细胞、H460细胞、HepG2细胞放射敏感性,艾迪注射液对恶性肿瘤的放射增敏作用可能具有普遍性;2.艾迪注射液对SHG44细胞的放射增敏作用可能与增强细胞G2/M期阻滞,促进细胞凋亡,降低CyclinB1蛋白表达和增加Wee1蛋白表达有关;3.艾迪注射液增强SHG44细胞G2/M期阻滞可能与降低CyclinB1蛋白表达和增加Wee1蛋白表达有关。

关键词：艾迪注射液脑胶质瘤细胞非小细胞肺癌细胞肝癌细胞放射增敏

逆转录酶抑制剂对胶质瘤干细胞端粒酶活性和细胞增殖影响的实验研究

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逆转录酶抑制剂对胶质瘤干细胞端粒酶活性和细胞增殖影响的实验研...

作者：黄金昆明医学院

学位级别：硕士

目的：探讨逆转录酶抑制剂(AZT)对脑胶质瘤干细胞端粒酶活性和细胞增殖的影响,为应用其治疗脑胶质瘤提供实验依据。方法： 1.从新鲜脑肿瘤标本中分离培养脑胶质瘤干细胞和脑胶质瘤细胞。 2.细胞免疫荧光检测脑肿瘤干细胞特异性标志物CD... 详细信息

目的：探讨逆转录酶抑制剂(AZT)对脑胶质瘤干细胞端粒酶活性和细胞增殖的影响,为应用其治疗脑胶质瘤提供实验依据。方法： 1.从新鲜脑肿瘤标本中分离培养脑胶质瘤干细胞和脑胶质瘤细胞。 2.细胞免疫荧光检测脑肿瘤干细胞特异性标志物CD133和nestin。 3.实验分成AZT实验组(0.5mol/L、0.25mol/L、0.125mol/L)和空白对照组。MTT法检测AZT对细胞生长增殖的影响。流式细胞仪检测细胞凋亡和周期的改变。TRAP-PCR-ELISA法检测端粒酶活性的变化。结果： 1.少数肿瘤细胞能够在无血清培养基中存活并悬浮增殖,形成克隆性脑胶质瘤干细胞球。传代后脑胶质瘤干细胞仍保持很强的自我更新和增殖能力,表达特异性标志物CD133和nestin。 2.AZT作用24h后,0.25mol/L组脑胶质瘤干细胞生长增殖受抑制(P脑胶质瘤细胞生长增殖受抑制(P脑胶质瘤干细胞出现显著性差异(P脑胶质瘤干细胞端粒酶活性降低(P脑胶质瘤细胞端粒酶活性降低(P脑胶质瘤干细胞的凋亡峰为4.21%(0.25mol/L)、10.6%(0.50mol/L),脑胶质瘤细胞的凋亡峰为6.75%(0.25mol/L)、14.3%(0.50mol/L)。结论： 1.本实验初步证实了人脑多形性胶质母细胞瘤中存在有脑肿瘤干细胞,可以通过无血清培养方法获得。 2.神经干细胞的标记物CD133和nestin可以用来鉴定脑肿瘤干细胞。 3.逆转录酶抑制剂对脑胶质瘤干细胞和脑胶质瘤细胞都有明显的抑制作用,脑胶质瘤干细胞药物敏感性低于脑胶质瘤细胞。

关键词：脑胶质瘤干细胞脑胶质瘤细胞逆转录酶抑制剂端粒酶

缝隙连接蛋白介导的细胞间通讯与胶质瘤自杀基因治疗

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中华神经外科杂志 2007年第2期23卷 156-157页

作者：苑玉清游潮南充东方医院神经外科四川省南充市637000 四川大学华西医院神经外科

1967年Kevel首次在大鼠心肌细胞问和肝细胞问发现了一种构造精妙的连接方式，并将之命名为“缝隙连接”（gap junction，GJ）。中枢神经系统细胞问存在有多种特异性连接蛋白（connexin，CX）的分布和表达并与中枢神经系统多种疾病的发... 详细信息

1967年Kevel首次在大鼠心肌细胞问和肝细胞问发现了一种构造精妙的连接方式，并将之命名为“缝隙连接”（gap junction，GJ）。中枢神经系统细胞问存在有多种特异性连接蛋白（connexin，CX）的分布和表达并与中枢神经系统多种疾病的发生、发展密切相关，如胶质细胞瘤、脑膜瘤、癫痫、脑缺血缺氧性损伤及Alzheimer病等。CX、GJ及由此构成的细胞内信号转导（gap junction intercellular communication，GJIC）通路在肿瘤自杀基因治疗“旁观者效应”（bystandereffect，BE）中发挥着极为重要的作用。GJ及GJIC的生理病理变化直接影响脑胶质瘤细胞的增殖、浸润及凋亡。

关键词：缝隙连接蛋白自杀基因治疗脑胶质瘤细胞细胞间通讯 Alzheimer 中枢神经系统缺血缺氧性损伤细胞内信号转导

苯丁酸钠对人脑胶质细胞瘤株SHG44细胞的抗肿瘤作用及机理研究

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苯丁酸钠对人脑胶质细胞瘤株SHG44细胞的抗肿瘤作用及机理研究

作者：潘碧云浙江大学

学位级别：硕士

肿瘤细胞分化诱导剂的研究和开发是目前抗癌药研究发展的一个热点。肿瘤的分化诱导是指恶性肿瘤细胞在体内外分化诱导剂的作用下，重新向正常细胞方向分化、逆转的现象。如目前应用于治疗白血病的维甲酸，就是一类分化诱导剂。但许多分... 详细信息

肿瘤细胞分化诱导剂的研究和开发是目前抗癌药研究发展的一个热点。肿瘤的分化诱导是指恶性肿瘤细胞在体内外分化诱导剂的作用下，重新向正常细胞方向分化、逆转的现象。如目前应用于治疗白血病的维甲酸，就是一类分化诱导剂。但许多分化诱导剂在诱导肿瘤细胞分化、逆转的同时，对正常细胞也有一定的毒性，且长期应用细胞易产生抗药性。目前人们正积极寻找更高效无毒或低毒以及作用于新靶点的分化诱导剂。苯丁酸钠是一类新型的分化诱导剂。其半衰期短，渗透性强，对正常细胞基本无毒副作用。已有的研究表明苯丁酸钠具有广谱抗肿瘤作用，除了体外对常见白血病细胞株的生长有抑制作用外，对前列腺癌、黑色素瘤等实体瘤细胞的生长亦有不同程度的抑制作用。因为它易透过浙江大学ZboZ年硕土学位论文血脑屏障，故本文将重点研究苯丁酸钠对脑胶质瘤细胞的抗肿瘤作用，并探讨其作用机理。关于苯丁酸钠的抗肿瘤作用及机理研究的文献目前报道不多。国外的研究仍处于临床前期研究，而国内的研究报道更少。目的： l、观察苯丁酸钠对人脑胶质细胞瘤株SHG．44 细胞的体外生长抑制及细胞形态分化逆转。 2、观紊苯丁酸钠分别与常用抗癌药鬼臼喳吩成（VM26）、顺铂（DDP）、阿霉素及卡氮芥（BCNU）联合应用对人脑胶质细胞瘤株SHG．44细胞生长的影响和相互作用。方法： l、MTT显色法在 96孔细胞培养板上加一定密度（lxlo’／ml）的对数生长期细胞悬液，180 VI，过夜后加入不同浓度的苯丁酸钠，20 VI／孔，均设6复孔，另设一个调零孔和9复孔VM26。培养48、72、96 ／J’时后，加入 MTT溶液（sing／ml）50 un孔;继续培养 4 ’J’时后，加入三联溶解液（10％SDS．5％异丙醇．OO12mmol／L HCL（w／v八）以水溶解） 100PI／孔。于 37’C下半小时后，在酶标仪 570 urn波长下测定各光密度值，计算生长抑制率。二、细胞形态学观察药物作用72小时后，直接在倒置显微镜下观察其形态变化并拍照。 3、联合用药效果观察在 96孔细胞培养板上加一定密度（lxlo’lml）的对数生长期细胞悬液 180 DI，过夜，将试验设为两组：A组先加苯丁 3 渐江大学2002年硕士学位论文酸钠，4 ，J、时后再分别加 VM26、顺铂、阿霉素及卡氮芥;B组先分别加入VM26、顺铂、阿霉素及卡氮芥，4小时后再加苯丁酸钠。两组均培养 48小时后用饲TT显色法测定光密度值，计算生长抑制率。联合用药效果评价用金氏公式判断：Q＝E．＋。／（巳＋Ek－E．＊E。），其中 E．＋。为合并用药抑制率，E。和E。分别为A药和B药单用的抑制率。式中分于代表“实测合并效应”，分母是“期望合并效应”，Q是两者之比。Q值 0．85－1．15为单纯相加卜），＞1．15－2．0 为增强（＋＋），＜0．85－0．55 为桔抗（－），＜0．55 为明显桔抗（一）。结果：一、苯丁酸钠单独用药对脑胶质瘤细胞SHG－44 的体外抑瘤作用及分化诱导 1、细胞生长半数抑制浓度（IC50）：通过 MTT显色法求得不同浓度及不同时间的苯丁酸钠作用后细胞的生长抑制率，计算出各时间段的 IC50。从药物作用48h、72h、96h的IC50来看，苯丁酸钠对脑胶质瘤细胞SHG－44的半数抑制浓度（IC50）分别为：112202ndml、84043 ug／ml、68077 ng／mlo 说明苯丁酸钠对脑胶质瘤细胞 SHG－44的抑制作用存在时效关系。另外，从同一时间段的量效曲线来看，随着苯丁酸钠浓度的增加，药物的抑制作用加强，其抑制作用呈浓度依赖性。 2、苯丁酸钠对

关键词：苯丁酸钠 SHG44 脑胶质细胞瘤细胞毒作用脑胶质瘤细胞肿瘤性卡氮芥诱导剂白血病细胞株芳香化酶抑制剂

LRIG1基因特异性RNA干扰表达载体的构建、鉴定和稳定株的筛选

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肿瘤防治研究 2010年第3期37卷 274-277页

作者：谢蕊繁陈如东徐钰郭东生雷霆华中科技大学同济医学院附属同济医院神经外科武汉430030

目的构建针对LRIG1LRIG1(leucine-rich repeats andi mmunoglobulin-like domains1,LRIG1)基因的特异性RNA干扰质粒,稳定转染人胶质瘤GL15细胞系,观察其对目的基因LRIG1表达的影响,为探讨LRIG1基因沉默对人脑胶质瘤细胞的生物学行为调... 详细信息

目的构建针对LRIG1LRIG1(leucine-rich repeats andi mmunoglobulin-like domains1,LRIG1)基因的特异性RNA干扰质粒,稳定转染人胶质瘤GL15细胞系,观察其对目的基因LRIG1表达的影响,为探讨LRIG1基因沉默对人脑胶质瘤细胞的生物学行为调控奠定基础。方法根据GenBank提供的LRIG1基因序列设计2条RNA干扰序列,命名为LRIG1-shRNA1、LRIG1-shRNA2,并设计1条非特异性序列作为阴性对照,命名为pGenesil2-negativesh RNA。合成各自的寡核苷酸链,退火后与pGenesil2质粒载体连接,转化扩增后测定序列。用不同浓度的G418作用于GL15细胞确定G418对GL15的筛选浓度。将3种重组表达载体转染GL15细胞,G418筛选后挑单克隆并扩增获得稳定株。Western印迹法在蛋白水平上检测LRIG1的表达。结果重组pGenesil2-LRIG1-sh RNA质粒经限制性酶切及DNA测序分析证明序列插入正确。G418对GL15细胞的筛选浓度为600mg/L,筛选出稳定转染三种质粒的GL15细胞,转染pGenesil2-LRIG1-sh RNA1组细胞LRIG1蛋白表达明显低于转染pGenesil2-negativesh RNA组。结论成功构建了针对LRIG1基因的特异性shRNA表达载体(pGenesil2-LRIG1-sh RNA1),转染细胞后可抑制LRIG1基因表达,为下一步研究其功能奠定基础。

关键词： LRIG1 RNA干扰脑胶质瘤细胞

胰岛素生长因子结合蛋白-2 siRNA表达载体的构建及鉴定

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中国老年学杂志 2014年第19期34卷 5507-5509页

作者：许淑芬王英凯刘磊孙牧男马寅芙方艳秋谭岩吉林省人民医院中心实验室吉林长春130021 吉林大学第一医院胃肠内科

目的构建针对胰岛素生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)的小干扰RNA(siRNA)表达载体,研究载体介导的RNAi技术对人U251脑胶质瘤细胞株中IGFBP-2表达的抑制作用。方法根据GenBank提供的IGFBP-2基因(NM-000597)核苷酸序列及siRNA的设计原则,设计... 详细信息

目的构建针对胰岛素生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)的小干扰RNA(siRNA)表达载体,研究载体介导的RNAi技术对人U251脑胶质瘤细胞株中IGFBP-2表达的抑制作用。方法根据GenBank提供的IGFBP-2基因(NM-000597)核苷酸序列及siRNA的设计原则,设计合成4对带有BamHⅠ、HindⅢ酶切位点的发夹结构寡核苷酸序列,筛选得到576~594 nt、908~926 nt、938~956 nt 3个19 bp片段靶序列,同时随机组合出一条无关序列,应用限制性内切酶酶切和测序技术鉴定重组克隆。用脂质体介导转染人U251胶质瘤细胞株,采用RT-PCR和Western印迹方法检测细胞IGFBP-2 mRNA和蛋白表达。结果酶切筛选得到4个目的片段的阳性克隆,测序证实重组表达载体中插入序列与设计一致。RT-PCR和Western印迹检测显示构建的siRNA表达载体可显著降低U251细胞中IGFBP-2 mRNA和蛋白表达水平。结论成功构建载体介导的IGFBP-2靶向RNA干扰重组体,并能有效抑制U251细胞中IGFBP-2基因的表达。

关键词：胰岛素生长因子结合蛋白-2 RNA干扰脑胶质瘤细胞

脑胶质瘤中环氧化酶-2和血管内皮生长因子的表达及作用

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中华实验外科杂志 2005年第3期22卷 338-340,i011页

作者：沈剑峰曹浩强周永庆詹仁雅黄琼徐庆生马廉亭浙江大学医学院附属第一医院神经外科杭州310003 浙江省嘉兴市第二医院外科浙江大学医学院病理和法医学研究所广州军区武汉总医院神经外科

目的研究62例脑胶质瘤细胞中环氧化酶(COX)2、血管内皮生长因子(VEGF)和第八因子相关抗原(ⅧRAg)的表达,探讨COX2在脑胶质瘤中的作用。方法运用免疫组织化学方法研究COX2、VEGF和Ⅷ因子相关抗原在脑胶质瘤中的表达。结果COX2在脑胶质瘤... 详细信息

目的研究62例脑胶质瘤细胞中环氧化酶(COX)2、血管内皮生长因子(VEGF)和第八因子相关抗原(ⅧRAg)的表达,探讨COX2在脑胶质瘤中的作用。方法运用免疫组织化学方法研究COX2、VEGF和Ⅷ因子相关抗原在脑胶质瘤中的表达。结果COX2在脑胶质瘤细胞中的胞浆染色阳性,和胶质瘤的病理级别正相关(r=0.874,P瘤细胞积聚;肿瘤组织中的血管周围有COX2染色阳性的肿瘤细胞聚集。脑胶质瘤中COX2和VEGF的表达(r=0.4578),COX2的表达和MVD之间(r=0.3918)呈正相关性,差异有统计学意义(P脑胶质瘤的病理分级成正相关,和脑胶质瘤的发生和发展有关系;COX2的表达和VEGF成正相关,COX2和微血管密度成正相关,COX2的表达可促进肿瘤组织新生血管的生成;COX2可作为判断脑胶质瘤恶性度的辅助生物学标志。

关键词： COX-2 脑胶质瘤细胞高表达血管内皮生长因子 VEGF 环氧化酶-2 阳性聚集积聚坏死