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脊髓康含药血清联合SOX-2对星形胶质细胞重编程诱导为神经元细胞的影响

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中医杂志 2023年第3期64卷 288-294页

作者：王浩阗王建伟吴毛汪国澎李绍烁戎毅邵阳南京中医药大学江苏省南京市210023 江苏省无锡市中医医院

目的研究脊髓康联合SRY转录盒因子2(SOX-2)治疗脊髓损伤的作用机制。方法成年SD大鼠随机分为空白组和给药组各5只。给药组大鼠以生药量20 g/(kg·d)脊髓康灌胃,空白组给予16 ml/(kg·d)生理盐水灌胃,均连续灌胃3天后腹主动脉采血制备含... 详细信息

目的研究脊髓康联合SRY转录盒因子2(SOX-2)治疗脊髓损伤的作用机制。方法成年SD大鼠随机分为空白组和给药组各5只。给药组大鼠以生药量20 g/(kg·d)脊髓康灌胃,空白组给予16 ml/(kg·d)生理盐水灌胃,均连续灌胃3天后腹主动脉采血制备含药血清和空白血清。体外培养1~4日龄大鼠幼仔皮层脑组织三代星形胶质细胞,分为空白血清组、SOX-2组、SOX-2+脊髓康血清组。SOX-2组加入10 mmol/L SOX-2;SOX-2+脊髓康血清组加入2.5%脊髓康含药血清和10 mmol/L SOX-2,使培养基中血清终浓度为10%;空白血清组加入10%空白血清。诱导培养21天后,光镜下观察3组神经元样细胞形态改变,细胞免疫荧光检测神经元轴突标志物微管相关蛋白2(MAP2)的表达,Western-Blot检测细胞中下游代谢产物S腺苷甲硫氨酸(SAM)、乙酰辅酶A(acetyl-CoA)表达,PCR定量分析星形胶质细胞中糖酵解相关基因己糖激酶1(HK1)、己糖激酶2(HK2)、磷酸果糖激酶1(PFK1)、磷酸果糖激酶2(PFK2)、M2型丙酮酸激酶同工酶(PKM2)基因表达。细胞能量代谢分析仪比较SOX-2组、SOX-2+脊髓康血清组细胞外酸化率(EACR)和耗氧率(OCR)。结果光镜下见SOX-2+脊髓康血清组大量具有两极且长轴突的神经元样细胞,较SOX-2组明显增多;空白血清组见星形胶质细胞,未见神经元样细胞。与空白血清组和SOX-2组比较,SOX-2+脊髓康血清组MAP2、SAM、acetyl-CoA表达均升高,HK1、HK2、PFK1、PFK2、PKM2基因表达亦显著升高(P脊髓康血清组ECAR和OCR亦高于SOX-2组。空白血清组和SOX-2组MAP2、SAM、acetyl-CoA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论脊髓康含药血清联合SOX-2可以将星形胶质细胞重编程诱导为神经元细胞,其机制可能是通过提高糖酵解能力从而提升星形胶质细胞重编程。

关键词：脊髓损伤星形胶质细胞重编程神经元有氧糖酵解表观遗传学脊髓康

脊髓康通过激活星形胶质细胞的YAP/PKM2信号轴促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复

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南方医科大学学报 2024年第4期44卷 636-643页

作者：满豪王建伟吴毛邵阳杨俊锋李绍烁吕锦业周悦南京中医药大学江苏南京210023 无锡市中医医院江苏无锡214071

目的研究中药脊髓康含药血清联合SRY转录盒因子2(SOX2)诱导星形胶质细胞重编程为神经元的作用机制。方法将30只成年SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(SCI组)和治疗组,10只/组。SCI组和治疗组均采用改良Allen法构建脊髓损伤大鼠模... 详细信息

目的研究中药脊髓康含药血清联合SRY转录盒因子2(SOX2)诱导星形胶质细胞重编程为神经元的作用机制。方法将30只成年SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(SCI组)和治疗组,10只/组。SCI组和治疗组均采用改良Allen法构建脊髓损伤大鼠模型,于术后分别给予生理盐水、脊髓康等量灌胃。在术前1 d、术后3、7、14 d进行Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分和斜板实验。相同方法构建脊髓损伤大鼠模型,提取损伤部位组织进行单细胞RNA测序,再使用生物信息学对“脊髓康”、“脊髓损伤”、“糖酵解”关联基因进行靶点分析。成年SD大鼠以生药量15 g·kg^(-1)·d^(-1)脊髓康灌胃,连续3 d后腹主动脉采血制备脊髓康含药血清。体外培养大鼠幼仔皮层脑组织三代星形胶质细胞,分为SOX2组、SOX2+JSK组。SOX2组加入10 mmol/LSOX2;SOX2+JSK组加入10mmol/LSOX2、2.5%脊髓康含药血清。培养21d后,Westernblot检测细胞中丙酮酸激酶M2型(PKM2)、磷酸化丙酮酸激酶M2型(p-PKM2)、Yes-相关蛋白(YAP)表达,使用免疫荧光多标染色观测PKM2与YAP共定位情况。结果治疗组大鼠的BBB评分与斜板实验角度明显提升,且各时段均优于SCI组(P脊髓康含药血清联合SOX2可能通过提高糖酵解中PKM2与YAP共定位,从而将星形胶质细胞重编程诱导为神经元细胞,促进神经损伤修复。

关键词：脊髓损伤星形胶质细胞有氧糖酵解脊髓康 PKM2 YAP

脊髓康对脊髓损伤模型大鼠血清外泌体中miRNA表达的影响

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中医杂志 2021年第7期62卷 615-621页

作者：吴承杰马勇郭杨周雨昕涂鹏程杨光露孙杰潘娅岚南京中医药大学附属医院江苏省南京市210029 南京中医药大学骨伤修复与重建新技术实验室南京中医药大学慢性病中医护理干预实验室

目的探讨脊髓康治疗脊髓损伤的可能作用机制。方法将80只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、强的松组和脊髓康组,每组20只。除假手术组外其余各组大鼠采用改进Allen′s方法建立脊髓损伤模型,假手术组大鼠脊髓暴露但未受伤。造模后假手术... 详细信息

目的探讨脊髓康治疗脊髓损伤的可能作用机制。方法将80只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、强的松组和脊髓康组,每组20只。除假手术组外其余各组大鼠采用改进Allen′s方法建立脊髓损伤模型,假手术组大鼠脊髓暴露但未受伤。造模后假手术组和模型组大鼠给予生理盐水20ml/(kg·d)灌胃,强的松组大鼠给予强的松溶液60mg/(kg·d)灌胃,脊髓康组大鼠给予脊髓康溶液25g/(kg·d)灌胃。各组大鼠分别于术后7、14、21和28天进行指标观察,每个时间点5只。大鼠的运动功能采用双后肢运动功能评分(BBB评分)和斜板试验评价,采集血清后提取外泌体并用外泌体标志蛋白(Tsg101、CD63、CD9)进行鉴定,检测损伤区RhoA、ROCK蛋白及mRNA表达,并检测外泌体中miR-21、miR-126、miR-133b表达。结果与假手术组同时间比较,模型组大鼠斜板试验角度和BBB评分均降低,模型组在术后7、28天时RhoA蛋白及mRNA表达升高,术后28天时ROCK蛋白及mRNA表达升高,术后7、28天时外泌体中miR-21、miR-126、miR-133b表达降低(P脊髓康组和强的松组大鼠在术后21、28天时斜板试验角度和BBB评分增加,术后28天时RhoA、ROCK蛋白及mRNA表达均降低,外泌体中miR-21、miR-126、miR-133b表达均升高(P脊髓康可能通过促进急性脊髓损伤模型大鼠血清外泌体中miR-21、miR-126、miR-133b表达,进而抑制RhoA/ROCK通路,从而修复脊髓损伤,改善大鼠的运动功能,在28天时作用最明显。

关键词：脊髓损伤脊髓康运动功能外泌体微小RNA

基于16S rDNA分析脊髓康对脊髓损伤小鼠肠道菌群的影响

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中华中医药杂志 2023年第3期38卷 1009-1014页

作者：杨光露马勇郭杨潘娅岚刘孟敏吴承杰涂鹏程南京中医药大学附属医院骨伤科南京210029 南京中医药大学骨伤修复与重建新技术实验室南京210023 南京中医药大学中医学院·中西医结合学院南京210023 南京中医药大学中西医结合护理研究所南京210023

目的:探讨脊髓康对脊髓损伤(SCI)小鼠肠道菌群的影响。方法:将64只C57BL/6小鼠随机分为假手术+生理盐水组、假手术+脊髓康组、SCI+生理盐水组、SCI+脊髓康组;采用改良Allen’s法建立小鼠SCI模型;用后肢运动功能(BMS)评分及斜板试验评估... 详细信息

目的:探讨脊髓康对脊髓损伤(SCI)小鼠肠道菌群的影响。方法:将64只C57BL/6小鼠随机分为假手术+生理盐水组、假手术+脊髓康组、SCI+生理盐水组、SCI+脊髓康组;采用改良Allen’s法建立小鼠SCI模型;用后肢运动功能(BMS)评分及斜板试验评估小鼠后肢运动功能,HE染色观察脊髓组织形态;采集粪便进行16S rDNA测序分析。结果:BMS评分和斜板试验显示,脊髓康可促进小鼠运动功能恢复;HE染色显示脊髓康可改善受损脊髓组织形态。16S rDNA测序分析显示,SCI小鼠Verrucomicrobia、Elusimicrobia、Akkermansia、Barnesiella等占比显著下降(P脊髓康可逆转以上大部分菌群的占比趋势。结论:脊髓康可调节SCI小鼠肠道菌群结构,促进SCI修复,改善小鼠运动功能。

关键词：脊髓损伤脊髓康肠道菌群 16S rDNA测序

脊髓康通过IRE1-XBP1通路抑制内质网应激诱导的PC12细胞凋亡

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中国中西医结合杂志 2020年第8期40卷 972-978页

作者：涂鹏程郭杨马勇王磊黄桂成吴承杰潘娅岚南京中医药大学骨伤修复与重建新技术实验室南京210023 南京中医药大学附属医院骨伤科南京210029 南京中医药大学中医学院·中西医结合学院南京210023 南京中医药大学中西医结合护理研究所南京210029

目的基于IRE1-XBP1通路探究脊髓康(JSK)抑制内质网应激(ERS)诱导的PC12细胞凋亡的作用及机制。方法利用神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞为神经元样细胞并通过流式细胞技术鉴定;诱导后细胞分为空白组(无干预措施)、模型组[2μmol/L毒胡萝... 详细信息

目的基于IRE1-XBP1通路探究脊髓康(JSK)抑制内质网应激(ERS)诱导的PC12细胞凋亡的作用及机制。方法利用神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞为神经元样细胞并通过流式细胞技术鉴定;诱导后细胞分为空白组(无干预措施)、模型组[2μmol/L毒胡萝卜素(TG)]、脊髓康组(2μmol/L TG及0.0521 g/mL JSK水提物冻干粉,合生药0.625 g/mL);CCK8法检测各组细胞24、48、72 h增殖活性,流式细胞技术检测各组细胞凋亡状态,Western Blot与q-PCR检测1型内质网转膜蛋白激酶(IRE1)、X盒结合蛋白1(XBP1)、葡萄糖调节蛋白78(Grp78)及C/EBP同源蛋白(CHOP)的蛋白及mRNA表达情况,透射电镜扫描各组细胞观察细胞及内质网形态学特征。结果与空白组比较,模型组NGF诱导的神经元样PC12细胞增殖活性显著降低(P0.05);Grp78、CHOP、XBP1及IRE1 mRNA表达明显升高(P脊髓损伤后神经元功能修复的机制。

关键词：脊髓损伤脊髓康内质网应激 IRE1-XBP1信号通路神经元凋亡

脊髓康对脊髓损伤小鼠小胶质细胞活化及组蛋白乙酰化水平的影响

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时珍国医国药 2021年第4期32卷 790-794页

作者：吴承杰郭杨马勇郑苏阳涂鹏程杨光露潘娅岚孙杰米健国南京中医药大学附属医院江苏南京210029 南京中医药大学骨伤修复与重建新技术实验室江苏南京210023 南京中医药大学慢性病中医护理干预实验室江苏南京210023 广东江门中医药职业学院广东江门529000

目的从小胶质细胞活化及组蛋白乙酰化的角度观察脊髓康对脊髓损伤小鼠的影响,并探究其促进脊髓损伤修复的部分机制。方法采用改良A11en's法制备C57BL/6小鼠脊髓损伤模型,将实验分为假手术+生理盐水组、假手术+脊髓康组、脊髓损伤+生理... 详细信息

目的从小胶质细胞活化及组蛋白乙酰化的角度观察脊髓康对脊髓损伤小鼠的影响,并探究其促进脊髓损伤修复的部分机制。方法采用改良A11en's法制备C57BL/6小鼠脊髓损伤模型,将实验分为假手术+生理盐水组、假手术+脊髓康组、脊髓损伤+生理盐水组、脊髓损伤+脊髓康组。小鼠后肢运动功能的恢复情况采用BMS评分法和斜板试验评价,HE染色法观察脊髓切片病理情况,免疫组化法检测H3K27、H4K8、Iba1和TREM2蛋白的表达,免疫荧光多标染色法检测Iba1、NeuN、CD13、GFAP蛋白的表达。结果BMS评分法和斜板试验均表明脊髓康可促进小鼠后肢运动功能的恢复;HE染色结果表明脊髓康可改善脊髓组织的结构形态;免疫组化结果表明脊髓康可增加脊髓损伤小鼠Iba1和TREM2的表达,脊髓康可增加假手术小鼠H3K27表达并降低H4K8、Iba1表达(P脊髓康可提高脊髓损伤小鼠Iba1、NeuN、CD13、GFAP表达,并可增加假手术小鼠CD13的表达(P脊髓康可促进小胶质细胞的M1、M2型活化并可提高H3K27乙酰化水平、降低H4K8乙酰化水平,而且小胶质细胞的活化与组蛋白乙酰化存在一定关联。

关键词：脊髓康脊髓损伤小胶质细胞组蛋白乙酰化

基于NLRP3炎症小体途径探究脊髓康促进脊髓损伤大鼠修复的机制

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中华中医药杂志 2022年第9期37卷 5385-5389页

作者：周雨昕马勇吴承杰郭杨宋洁菲张宇潘娅岚杨光露南京中医药大学骨伤修复与重建新技术实验室南京210023 南京中医药大学第一临床医学院南京210023 南京中医药大学护理学院南京210023

目的:基于NLRP3炎症小体途径探究脊髓康对脊髓损伤大鼠炎症反应的影响,并揭示其改善脊髓损伤后运动功能的部分机制。方法:采用改良Allen’s法制备SD大鼠脊髓损伤模型,分为模型组、强的松组、脊髓康组、假手术组。使用BBB评分和斜板实验... 详细信息

目的:基于NLRP3炎症小体途径探究脊髓康对脊髓损伤大鼠炎症反应的影响,并揭示其改善脊髓损伤后运动功能的部分机制。方法:采用改良Allen’s法制备SD大鼠脊髓损伤模型,分为模型组、强的松组、脊髓康组、假手术组。使用BBB评分和斜板实验评价大鼠的运动功能,提取血清后通过ELISA法检测血清中IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α的表达,Western Blot检测脊髓损伤区域NLRP3、ASC、NF-κB、Caspase-1表达,qRT-PCR检测脊髓损伤区域NLRP3、ASC、Caspase-1表达。结果:与假手术组同期比较,模型组大鼠斜板实验角度和BBB评分均降低,模型组第7天时IL-18、IL-6、TNF-α含量显著升高,ASC蛋白及mRNA表达显著升高,第28天时NLRP3、Caspase-1蛋白及mRNA表达升高(P脊髓康组在第21、28天斜板实验角度和BBB评分显著增加,在第7天时IL-18、IL-6、TNF-α含量显著降低,ASC蛋白及mRNA表达显著降低,第28天时NLRP3蛋白及mRNA表达显著降低(P脊髓康可抑制NLRP3炎症小体途径,减轻脊髓损伤后炎症反应,从而改善脊髓损伤大鼠运动功能。

关键词：脊髓康脊髓损伤 NLRP3 炎症反应炎性因子运动功能

脊髓康含药血清对脂多糖诱导的小胶质细胞迁移功能的影响

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时珍国医国药 2019年第12期30卷 2882-2885页

作者：郭杨苑文超潘娅岚马勇徐桂华王磊刘家欢南京中医药大学骨伤研究所江苏南京210023 南京中医药大学中西医结合护理研究所江苏南京210023

目的观察中药复方脊髄康(JSK)含药血清对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞迁移功能的影响。方法采用摇床法提取原代小肢质细胞进行培养、鉴定;制备JSK含药血清;将小肢质细胞分为空白血清组、LPS组、JSK低、中、高剤量组、黄芪甲苷(AS-IV)组... 详细信息

目的观察中药复方脊髄康(JSK)含药血清对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞迁移功能的影响。方法采用摇床法提取原代小肢质细胞进行培养、鉴定;制备JSK含药血清;将小肢质细胞分为空白血清组、LPS组、JSK低、中、高剤量组、黄芪甲苷(AS-IV)组;选取细胞划痕实验、Transweil小室迁移实验、鬼笔环肽免疫荧光实验对LPS诱导后的原代小胶质细胞的迁移功能进行检测。结果空白血清组、JSK低、中、高剂量组、AS-IV组小胶质细胞的迁移能力均低于LPS组(P0.05)。结论中药复方脊髓康(JSK)含药血清对LPS诱导的小胶质细胞迁移功能具有一定的抑制作用,从抑制小肢质细胞迁移的角度为中医药治疗脊敌损伤提供一定的依据。

关键词：脊髓康含药血清小胶质细胞迁移划痕实验 Transwell小室迁移实验鬼笔环肽免疫荧光实验

脊髓康对自然混杂体系中小胶质细胞吞噬作用的影响

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中华中医药杂志 2018年第11期33卷 5137-5139页

作者：郭杨郑苏阳马勇周龙云苑文超黄桂成刘家欢南京中医药大学骨伤研究所南京210023 南京中医药大学附属医院骨伤科南京210029

目的:观察中药复方脊髓康对自然混杂体系中小胶质细胞吞噬神经元碎片的影响。方法:制备脊髓康含药血清;分离、培养原代神经细胞,建立混杂细胞体系;以谷氨酸诱导混杂体系中神经元损伤,以脊髓康含药血清干预混杂体系;免疫荧光染色法标记... 详细信息

目的:观察中药复方脊髓康对自然混杂体系中小胶质细胞吞噬神经元碎片的影响。方法:制备脊髓康含药血清;分离、培养原代神经细胞,建立混杂细胞体系;以谷氨酸诱导混杂体系中神经元损伤,以脊髓康含药血清干预混杂体系;免疫荧光染色法标记神经元骨架、碎片以及小胶质细胞膜蛋白,观察脊髓康对小胶质细胞吞噬功能的影响。结果:脊髓康中、高剂量组吞噬百分率及吞噬指数均高于空白组(P脊髓康可能通过促进小胶质细胞吞噬神经元碎片作用,改善神经元生长微环境,进而促进存活神经元的修复再生。

关键词：脊髓康原代小胶质细胞神经元神经元碎片吞噬