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脊髓压迫性损伤神经纤维溃变及其机制初步探讨

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脊髓压迫性损伤神经纤维溃变及其机制初步探讨

作者：伍修宇重庆医科大学

学位级别：硕士

目的：研究脊髓压迫性损伤（compression spinal cord injury,CSCI）脊髓白质神经纤维溃变的时空规律;观察CSCI中髓鞘蛋白MBP表达及少突胶质细胞凋亡变化，以对CSCI神经纤维溃变机制进行初步探讨。方法： 1.利用课题组自行设计... 详细信息

目的：研究脊髓压迫性损伤（compression spinal cord injury,CSCI）脊髓白质神经纤维溃变的时空规律;观察CSCI中髓鞘蛋白MBP表达及少突胶质细胞凋亡变化，以对CSCI神经纤维溃变机制进行初步探讨。方法： 1.利用课题组自行设计的大鼠压迫器制作大鼠脊髓压迫模型;70只成年SD大鼠随机分成三组，分别为模型组、假手术组和正常组。假手术组大鼠组仅手术不做压迫，正常组不做任何处理。 2.采用HE、LFB和透射电镜观察压迫后脊髓神经纤维形态变化;免疫荧光和Western blot检测压迫后蛋白MBP表达变化;TUNEL和APC免疫荧光双标法检测少突胶质细胞凋亡。结果： ***染色显示，脊髓受压7d后，白质纤维明显肿胀，轴突间隙增宽，呈疏网状改变;LFB染色显示，脊髓受压后，白质神经纤维髓鞘肿胀，间隙增宽的同时，髓鞘化纤维数随着压迫时间延长进行性减少，以腹侧索变化最为明显;透射电镜显示，脊髓受压迫脊髓受压7d后，神经纤维轴突肿胀，髓鞘板层分离断裂缺失。 ***免疫荧光显示MBP阳性纤维随着压迫时间逐渐缺失，Western blot结果显示，蛋白MBP随着压迫时间推移进行性下降，压迫1d、3d和7d后相对吸光度值分别为：0.76±0.15,0.65±0.14，0.26±0.02。 ***检测发现脊髓受压中少突胶质细胞呈现凋亡，凋亡的少突胶质细胞主要分布于白质;随着压迫时间推移，其凋亡数量逐渐增加。结论：CSCI可导致白质神经纤维溃变，其溃变的神经纤维的数量随着压迫时间延长逐渐增加。在CSCI中，髓鞘碱性蛋白MBP的表达逐渐下降和少突胶质细胞凋亡逐渐增多，其可能是引起神经纤维溃变病理机制之一。

关键词：脊髓压迫性损伤神经纤维溃变髓鞘碱性蛋白少突胶质细胞细胞凋亡

电针联合雪旺氏细胞移植对脊髓压迫性损伤后脊髓内CD4、CD8表达及髓鞘修复的影响

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针刺研究 2019年第6期44卷 391-398页

作者：谭程方黄思琴唐成林张安宁赵丹丹吴梦佳安荟羽邱丽代妮代攀重庆医科大学中医药学院

目的:观察电针联合雪旺氏细胞(SCs)移植对脊髓压迫性损伤(CSCI)后损伤部位CD4、CD8表达的影响及髓鞘修复的程度,探讨电针联合SCs移植对CSCI后髓鞘修复的作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、电针组、雪旺氏细胞组、联合组,每... 详细信息

目的:观察电针联合雪旺氏细胞(SCs)移植对脊髓压迫性损伤(CSCI)后损伤部位CD4、CD8表达的影响及髓鞘修复的程度,探讨电针联合SCs移植对CSCI后髓鞘修复的作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、电针组、雪旺氏细胞组、联合组,每组9只。采用自制脊髓压迫装置制备CSCI大鼠模型。电针组造模后次日予电针大鼠双侧"足三里""三阴交"穴,留针10min,每日1次,治疗3周。雪旺氏细胞组造模后1周进行SCs移植治疗。联合组给予电针和SCs移植治疗。BBB评分评定各组大鼠解压后不同时间的运动功能。HE染色观察损伤脊髓局部病理变化,LFB染色和免疫荧光法观察髓鞘的修复和SCs移植后的存活情况及髓鞘碱性蛋白(MBP)、外周髓磷脂P0蛋白(P0)表达,Western blot法检测大鼠损伤脊髓局部CD4、CD8、P0的相对表达量。结果:与正常组比较,模型组各时点BBB评分显著降低(P脊髓损伤区域白质纤维排列紊乱,髓鞘脱失,有髓神经纤维减少;电针组和雪旺氏细胞组脊髓损伤区域白质纤维排列紊乱减轻,有髓神经纤维增多;联合组脊髓损伤区域白质纤维排列紊乱及髓鞘丢失改善,有髓神经纤维增多。HE染色显示:模型组脊髓形态结构不完整,脊髓组织中可见大量缺损空洞,大量神经元核固缩;电针组和雪旺氏细胞组脊髓结构排列紊乱和破坏减轻,损伤区域较多神经元核固缩;联合组脊髓组织结构较清晰,正常神经细胞增多,神经元核固缩减少。免疫荧光显示:与正常组比较,模型组MBP显著减少(P<0.001)、P0显著增加(P<0.001);与模型组比较,电针组、雪旺氏细胞组、联合组MBP、P0表达均明显增多(P<0.01,P<0.001);与电针组和雪旺氏细胞组比较,联合组MBP、P0表达均明显增多(P<0.001)。与雪旺氏细胞组比较,联合组Hoechst33342标记的SCs显著增多(P<0.05)。Western blot显示:与模型组比较,雪旺氏细胞组CD4、CD8蛋白表达显著升高(P<0.05);与雪旺氏细胞组比较,联合组CD4、CD8蛋白表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,电针组、雪旺氏细胞组、联合组P0的表达均显著升高(P<0.05);与电针组和雪旺氏细胞组比较,联合组P0的表达均显著升高(P<0.05)。结论:电针联合SCs移植治疗可减少SCs移植后的免疫排斥反应,提高SCs的存活率,提高SCs的成髓鞘化功能,改善CSCI神经运动功能。

关键词：脊髓压迫性损伤电针雪旺氏细胞移植髓鞘免疫排斥反应

适合磁共振成像的羊颈脊髓压迫性损伤模型的建立与病理学观察

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中国医学影像技术 2009年第5期25卷 719-722页

作者：宗会迁刘怀军刘记存耿左军李英尚华河北医科大学第二医院影像科河北石家庄050000 河北医科大学第三医院CT室河北石家庄050051

目的探讨建立一种新的适合MRI研究的羊颈髓压迫损伤模型,并对其进行影像学和神经功能评价。方法12只20～25kg山羊随机分为实验组和对照组,每组6只,通过椎间孔把导管球囊插入羊颈髓的硬膜外腔。手术10天后,实验组注入0.2ml生理盐水,持续... 详细信息

目的探讨建立一种新的适合MRI研究的羊颈髓压迫损伤模型,并对其进行影像学和神经功能评价。方法12只20～25kg山羊随机分为实验组和对照组,每组6只,通过椎间孔把导管球囊插入羊颈髓的硬膜外腔。手术10天后,实验组注入0.2ml生理盐水,持续压迫40天,对照组不注生理盐水。利用MRI、运动功能评分和病理学检查对模型进行评价。结果实验组MR影像表现为脊髓受压变扁,运动功能评分下降。病理学显示神经元变性,胶质细胞增生,炎性细胞浸润,有髓神经髓鞘部分板层状结构紊乱,部分明显分层。对照组各项检查未见明显异常。结论经颈椎间孔置入导管球囊制作的羊颈髓压迫性损伤的动物模型适合进行急性和慢性脊髓压迫性损伤的研究,为利用MR深入研究颈髓压迫症的病理生理变化奠定了基础。

关键词：磁共振成像模型,动物脊髓压迫性损伤球囊导管

大鼠脊髓压迫性损伤解压后pEGFR的表达变化

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中国临床解剖学杂志 2017年第2期35卷 166-171页

作者：龚睿孙善全钟源张威赵琪牟科杰薛军重庆医科大学神经科学研究中心重庆40016 重庆医科大学附属第一医院璧山医院神经外科重庆402762

目的探讨大鼠脊髓压迫性损伤(compressed spinal cord injury,CSCI)解压后表皮生长因子受体(phosphorylated epidermal growth factor receptor,pEGFR)、pAkt1的表达变化及其与神经功能、有髓神经纤维数量变化的相关性,为CSCI解压后治疗策略的制定和药物的研发提供实验基础。方法采用自行设计的方法制作SD大鼠CSCI模型,造模成功后解压。运用BBB(Basso Beattie Bresnahan)评分观察动物解压后神经功能的恢复情况;通过Luxol fast blue(LFB)染色检测解压后1、7、14、21 d有髓神经纤维数量变化;运用免疫荧光双标(Double-labeling immunoflurescence)、免疫印迹(western blotting,WB)检测pEGFR、pAkt1的表达变化。结果 CSCI解压后,BBB评分和有髓神经纤维数量随时间延长而逐渐增加;与此同时,pEGFR、pAkt1表达亦上调且与BBB评分、有髓神经纤维数量增加趋势一致。结论CSCI解压后,神经功能有一定改善、有髓神经纤维数量有一定增加,这些变化与pEGFR表达上调有关,提示EGFR的活化参与了CSCI解压后的内源性修复。

关键词：脊髓压迫性损伤髓鞘脱髓鞘 EGFR pAkt1

BDNF在大鼠脊髓压迫性损伤脱髓鞘病变中的作用

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中国临床解剖学杂志 2016年第2期34卷 186-190页

作者：余海军孙善全重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016

目的观察脊髓压迫性损伤后脑源性神经生长因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的表达变化与有髓神经纤维脱髓鞘病变之间的关系,以阐明BDNF对神经纤维脱髓鞘病变的作用。方法 SD雄性大鼠60只,将其均分成3组:模型组、假手术组... 详细信息

目的观察脊髓压迫性损伤后脑源性神经生长因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的表达变化与有髓神经纤维脱髓鞘病变之间的关系,以阐明BDNF对神经纤维脱髓鞘病变的作用。方法 SD雄性大鼠60只,将其均分成3组:模型组、假手术组和正常组,用自行设计的压迫器制作大鼠脊髓压迫模型。模型组作脊髓压迫24 h,假手术组仅作脊髓显露,不作压迫。锇酸和LFB(luxol fast blue)染色观察有髓神经纤维变化情况;Western blot检测髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)和BDNF的表达。结果 24 h后,与假手术组比较,模型组压迫前段(T11)有髓神经纤维无明显肿胀和数量变化,MBP表达未见变化(P>0.05),但BDNF的表达量升高(P压迫段(T12)和压迫后段(L1)有髓神经纤维肿胀并伴有数量降低(P压迫段(T12)脱髓鞘病变更为严重,BDNF降低也更为明显(P脊髓压迫性损伤BDNF表达减少可导致脊髓脱髓鞘病变的发生,而BDNF表达量升高可能对脊髓脱髓鞘病变具有保护作用。

关键词：脊髓压迫性损伤脱髓鞘脑源性神经生长因子髓鞘碱性蛋白大鼠

大鼠脊髓压迫性损伤后脱髓鞘病变及MBP、Id2的表达变化

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第三军医大学学报 2013年第5期35卷 381-384页

作者：黄思琴漆伟孙善全汪克建卓飞蒋锦重庆医科大学中医药学院重庆400016 重庆医科大学神经科学研究中心重庆400016

目的分析脊髓压迫性损伤(compressed spinal cord injury,CSCI)后脱髓鞘病变与髓鞘碱性蛋白(myelinbasic protein,MBP)、DNA结合抑制物2(inhibitor of DNA binding2,Id2)的表达变化之间的关系,以探讨CSCI脱髓鞘病变机制。方法采用自行设计的方法制作SD大鼠CSCI模型,通过锇酸染色检测CSCI后1、3、7 d有髓神经纤维变化;运用免疫荧光双标和免疫印迹(Western blot)检测MBP及Id2的表达变化。结果 CSCI后出现脱髓鞘病变,并随着压迫时间延长,髓鞘逐渐发生水肿、变性、崩解;脊髓损伤后MBP表达下调,其表达趋势与脱髓鞘溃变的严重程度一致;CSCI后,Id2广泛分布于白质,随着压迫时间延长,其表达逐渐上调。结论 Id2表达上调,并负向调控MBP基因启动子的活性,使MBP的表达下降,是CSCI后神经纤维脱髓鞘病变的机制之一。

关键词：脊髓压迫性损伤脱髓鞘病变髓鞘碱性蛋白 DNA结合抑制物2

半胱氨酸蛋白酶-12表达与细胞色素C释放在脊髓压迫性损伤后少突胶质细胞凋亡中的作用

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重庆医科大学学报 2013年第6期38卷 587-591页

作者：黄思琴漆伟孙善全汪克建陆蔚天卓飞伍修宇重庆医科大学中医药学院针灸推拿教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院解剖学教研室重庆400016 湖南省怀化医学高等专科学校解剖学教研室怀化418000

目的:探讨半胱氨酸蛋白酶-12(Caspase-12)表达与细胞色素C(cytochrome-C,Cyto-C)释放在脊髓压迫性损伤(compressed spinal cord injury,CSCI)后少突胶质细胞凋亡中的作用。方法:采用自行设计的方法制作脊髓压迫模型,通过原位细胞凋亡染... 详细信息

目的:探讨半胱氨酸蛋白酶-12(Caspase-12)表达与细胞色素C(cytochrome-C,Cyto-C)释放在脊髓压迫性损伤(compressed spinal cord injury,CSCI)后少突胶质细胞凋亡中的作用。方法:采用自行设计的方法制作脊髓压迫模型,通过原位细胞凋亡染色于压迫后1、3、7 d检测CSCI后少突胶质细胞凋亡;运用Western blot技术从分子水平分别检测与细胞凋亡有关的Caspase-12和Cyto-C的表达。结果:不同组别凋亡的少突胶质细胞数目不全相同(F=30.946,P=0.000),LSD-t法两两比较,1、3、7 d模型组凋亡的少突胶质细胞数目均高于正常组(P=0.000)。与对照组、1 d组、3 d组相比,7 d组凋亡的少突胶质细胞数目最多,组间比较,差异有统计学意义(P=0.000)。不同组别Caspase-12和Cyto-C蛋白表达不全相同(F分别等于1 402.646和326.638,P=0.000),LSD-t法两两比较,1、3、7 d模型组的Caspase-12和Cyto-C蛋白表达均高于正常组(P=0.000),与对照组、1 d组、3 d组相比,7 d组的Caspase-12和Cyto-C蛋白表达水平均最高,组间比较,差异有统计学意义(P=0.000)。结论:CSCI后出现了少突胶质细胞凋亡,其凋亡机制可能与Caspase-12表达增强及Cyto-C释放共同作用有关。

关键词：脊髓压迫性损伤细胞色素C 半胱氨酸蛋白酶-12 少突胶质细胞凋亡

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电针对大鼠脊髓压迫性损伤后髓鞘再生的影响

中华物理医学与康复杂志 2013年第3期35卷 161-166页

作者：黄思琴漆伟孙善全汪克建卓飞重庆医科大学中医药学院重庆400016 重庆医科大学中医药学院解剖学教研室重庆400016

目的观察电针对大鼠脊髓压迫性损伤（CSCI）后DNA结合抑制物2（Id2）和髓鞘碱性蛋白（MBP）的表达变化，探讨髓鞘再生的机制。方法将54只SD大鼠分为对照组和治疗组，每组27只，再根据取材时间点的不同各分为3d、7d和14d三个亚组，每个亚... 详细信息

目的观察电针对大鼠脊髓压迫性损伤（CSCI）后DNA结合抑制物2（Id2）和髓鞘碱性蛋白（MBP）的表达变化，探讨髓鞘再生的机制。方法将54只SD大鼠分为对照组和治疗组，每组27只，再根据取材时间点的不同各分为3d、7d和14d三个亚组，每个亚组9只大鼠。治疗组采用自行设计的大鼠脊髓压通器制作脊髓压通性损伤模型，针刺脊髓损伤节段局部夹脊穴、双侧足三里和双侧太溪穴，并于双侧足三里和太溪穴进行电针刺激（连续波，输出频率为2Hz，电压1．5V，30min）。对照组只造模，不治疗。2组大鼠均于对应时间点取材，运用电镜观察脊髓损伤节段髓鞘的超微结构；采用免疫印迹技术和免疫荧光双标从分子水平检测Id2及MBP的表达变化。结果CSCI后，荧光双标结果显示，造模后第3天，对照组大鼠的Id2免疫阳性少突胶质细胞数目为（20±2）个／高倍镜视野，并在造模后第14天下降至（164-1）个／高倍镜视野，组内各时间点Id2免疫阳性少突胶质细胞数目比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。造模后第3天，治疗组大鼠Id2免疫阳性少突胶质细胞为（13±1）个／高倍镜视野，造模后第14天降至（7±1）个／高倍镜视野，组内各时间点ld2免疫阳性少突胶质细胞数目比较，差异有统计学意义（P〈0．05），并与同时间点的对照组比较，差异亦有统计学意义（P〈0．05）。Western结果显示，造模后第3天，对照组和治疗组Id2蛋白表达分别为（1．12±0．12）和（0．67±0．01），造模后第14天，对照组和治疗组Id2蛋白表达分别下降至（0．86±0．02）和（0．25±0．01），与组内造模后第3天比较，差异均有统计学意义（P〈0．05），2组相同时问点Id2蛋白表达组间比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。造模后第3天，对照组和治疗组的MBP蛋白表达分别为（0．44±0．02）和（0．67±O．04），造模后第14天，对照组和治疗组MBP蛋白表达均分别上调至（0．95±0．04）和（1．74±0．09），与组内造模后第3天比较，差异均有统计学意义（P〈0．05），2组相同时间点的MBP蛋白表达比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论电针刺激可调节Id2的表达从而负向调控MBP的表达。

关键词：脊髓压迫性损伤脱髓鞘病变电针超微结构髓鞘碱性蛋白

pEGFR的表达与大鼠脊髓压迫性损伤后神经功能恢复的关系

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中国临床解剖学杂志 2022年第3期40卷 297-302,308页

作者：张敏李兴琼晏四斤李腊梅杜瑶曾庆盈潘利锋龚睿重庆医科大学附属永川医院内分泌科重庆永川402160 重庆市永川区中医院推拿科重庆永川402160

目的探讨大鼠活化型表皮生长因子受体(phosphorylated epidermal growth factor receptor,pEGFR)表达与脊髓压迫性损伤(compressed spinal cord injury,CSCI)后神经功能恢复的关系及可能的机制。方法制备大鼠脊髓压迫性损伤模型,运用BBB... 详细信息

目的探讨大鼠活化型表皮生长因子受体(phosphorylated epidermal growth factor receptor,pEGFR)表达与脊髓压迫性损伤(compressed spinal cord injury,CSCI)后神经功能恢复的关系及可能的机制。方法制备大鼠脊髓压迫性损伤模型,运用BBB(Basso Beattie Bresnahan)评分观察动物解压后神经功能的恢复情况,免疫印迹(Western blotting,WB)检测pEGFR、total-caspase-3、active-caspase-3的表达变化,免疫荧光双标(double-labeling immunoflurescence)检测pEGFR-NG2+、active-caspase-3-NG2+细胞的变化。结果CSCI解压后,BBB评分随时间延长而逐渐增加;pEGFR的表达、pEGFR-NG2+细胞的数量随时间延长而逐渐增加并于解压后14 d达到高峰,而total-caspase-3、active-caspase-3的表达和activecaspase-3-NG2+细胞的数量在解压后即达到高峰并随时间延长逐渐降低。腹腔注射pEGFR抑制剂14 d后,pEGFR的表达、大鼠BBB评分较未注射pEGFR抑制剂组明显降低;total-caspase-3、active-caspase-3的表达和active-caspase-3-NG2+细胞显著增加。结论大鼠pEGFR的表达与CSCI解压后神经功能的恢复有关,其机制可能在于pEGFR参与了Caspase-3信号通路的调节。

关键词：脊髓压迫性损伤神经功能恢复 pEGFR Caspase-3