检索结果-南通市图书馆

作者：徐茹西北大学

学位级别：硕士

本文主要对重组*** BL21补料-分批发酵生产类人胶原蛋白过程中补料过程（12中脉冲补料模式）进行优化。对发酵过程不同脉冲模式下菌体生长和目标蛋白表达的影响进行考察;结合质谱分析仪分析了脉冲补料下氧气摄取率（OUR）,二氧化碳释放... 详细信息

本文主要对重组*** BL21补料-分批发酵生产类人胶原蛋白过程中补料过程（12中脉冲补料模式）进行优化。对发酵过程不同脉冲模式下菌体生长和目标蛋白表达的影响进行考察;结合质谱分析仪分析了脉冲补料下氧气摄取率（OUR）,二氧化碳释放率（CER）和呼吸熵（RQ）的变化趋势;对类人胶原蛋白大肠杆菌在脉冲补料下不同阶段质粒稳定性进行初步探讨;基于脉冲补料条件下的恒速补料,恒溶氧脉冲补料和指数补料对细胞生长及类人胶原蛋白（HLC）表达的影响;以及基于细胞生长代谢下脉冲补料发酵碳回收率,细胞得率系数的研究,结果表明： 1.整个发酵阶段成分为三个阶段,即分批阶段,诱导前补料阶段和诱导补料阶段。诱导前不同脉冲补料模式对细胞的生长有着不同的影响;6种模式的生物量增加幅度相似,然而,在8-14h之间,几种补料模式的生物量增长趋势出现了一些差异。当t=14h,生物量分别为51.67g/L,49.88g/L,46.45g/L,66.85g/L,61.28g/L和57.22g/L（R1-R6）,相对于补料开始阶段,生物量增加分别是1.61倍,1.81倍,1.59倍,2.12倍,1.54倍和1.50倍,在诱导阶段细胞生长处于平衡期,脉冲补料对诱导阶段的影响不是很显著。在蛋白表达量方面,不同的脉冲模式下有明显的差异。在乙酸分泌方面,批示阶段积累的乙酸在葡萄糖消耗殆尽时作为碳源供细胞生长;诱导前补料阶段乙酸在葡萄糖存在的情况下同时作为碳源被细胞利用,主要因为脉冲补料为细胞提供了一个合适的“饥饿“时间,且整个阶段乙酸的浓度被控制在0.5g/L下;诱导补料阶段乙酸的积累量最终决定了蛋白的表达量,放罐时乙酸浓度分别达到：2.79g/L,2.31g/L,2.68g/L,2.55g/L,2.64g/L,2.79g/L。最终发现,当诱导前补料采用补料5.6ml/188s,诱导后采用每2.1ml/27s条件下,细胞干重和蛋白浓度达到最大,分别为75.46g/L和7.26g/L 2.通过研究恒定溶氧结合脉冲添加补料发酵方式,发现其既能满足发酵过程中菌体生长所需要的氧气,为细胞内新陈代谢提供能量,降低氧气含量过多对细胞毒性。同时也能使菌体不再处于较高的基质浓度范围内,减轻在诱导阶段细胞临界比摄氧率和临界比摄糖率下降时对乙酸积累的影响,以减少细胞分泌乙酸,发酵结束时乙酸浓度,细胞干重和类人胶原蛋白的浓度分别为1.72g/L,73.45g/L和7.89g/L。恒定底物浓度补料发酵展现了良好的实用性,但是其操作不易实现,最终乙酸积累量达到2.41g/L。相比恒定溶氧和恒定底物浓度补料策略,恒速补料在发酵初期能提供较多的营养物质,但在诱导前补料阶段乙酸的浓度增加较快,最终的乙酸浓度高达4.23g/L,细胞干重和类人胶原蛋白的浓度分别为48.62g/L和2.89g/L。 3.在脉冲补料操作R4中,从细胞得率系数发现分批阶段随着细胞快速增长Yx/s出现一个极大值,伴随着补料的开始和诱导阶段Yx/s出现下降,说明基质对细胞生长的贡献在减小,主要用于提供维持细胞自身生理活性和外源蛋白所需的能量。发酵结束后碳回收率达到90%,表明基质还是主要流向生物量的形成,此时也有除生物量和CO2等物质的产生,并以含碳有机化合物的形式溶解在培养液中。事实上,发酵液中乙酸,乳酸,甲酸和丙酸等物质中含有碳元素的质量仅占胞外碳元素质量很少部分。

关键词：乙酸高密度发酵类人胶原蛋白脉冲补料

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搅拌式光生物反应器培养海带配子体细胞：不同脉冲补料方式的研究(英文)

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中国生物工程杂志 2008年第1期28卷 36-43页

作者：陈思晔齐瀚实上海交通大学细胞工程中心上海200240

以批次培养为对照,研究了7种脉冲补料方式对搅拌式光生物反应器中培养大型褐藻海带配子体细胞生长和培养液内氮磷营养盐消耗的影响,并首次探讨了脉冲补料方式下不同补料时间点和补料量的影响作用。培养条件设定为50mgDCW(细胞干重)/L接... 详细信息

以批次培养为对照,研究了7种脉冲补料方式对搅拌式光生物反应器中培养大型褐藻海带配子体细胞生长和培养液内氮磷营养盐消耗的影响,并首次探讨了脉冲补料方式下不同补料时间点和补料量的影响作用。培养条件设定为50mgDCW(细胞干重)/L接种密度、培养液为改良的APSW人工海水、光强60μE/m2.s、光周期16/8hL/D、通气速率和搅拌速率分别为50ml/min和100r/min。结果表明少量补料利于细胞对氮磷的协同吸收,进而利于生物量扩增。当培养液内氮磷富足或耗尽时补料对于生物量大量生产效果甚微,可能由于氮磷吸收变缓、其储存现象显著,或是其吸收协同性降低。当细胞生长至对数中期开始频繁补加少量氮磷营养盐,即维持培养液内氮磷浓度在各自起始浓度的1/3至1/2之间,对生物量生产最有效,生物量增长倍数高达12.270倍。

关键词：脉冲补料海带配子体细胞搅拌式光生物反应器硝酸盐磷酸盐

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