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基因组步移技术扩增嗜水气单胞菌J-1株脂酶基因全长及原核表达

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动物医学进展 2010年第9期31卷 1-6页

作者：巢伟刘永杰陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室江苏南京210095

根据已发表的引物序列合成一对引物,以嗜水气单胞菌J-1株基因组为模板扩增脂酶基因,得到一个保守的383 bp基因片段。进一步应用基因组步移技术扩增其两侧未知序列,分别以DraⅠ,EcoRⅤ,PvuⅡ,ScaⅠ,StuⅠ,SmaⅠ6个内切酶酶切的基因组构建... 详细信息

根据已发表的引物序列合成一对引物,以嗜水气单胞菌J-1株基因组为模板扩增脂酶基因,得到一个保守的383 bp基因片段。进一步应用基因组步移技术扩增其两侧未知序列,分别以DraⅠ,EcoRⅤ,PvuⅡ,ScaⅠ,StuⅠ,SmaⅠ6个内切酶酶切的基因组构建6个不同的基因组步移文库,再以基因组步移文库为模板,设计引物向已获得的保守片段两侧进行PCR扩增,将扩增到的两侧序列与保守片段拼接后得到一个3 476 bp的片段,通过DNA Star软件分析,找到一个2 415 bp的开放阅读框,经Blast软件分析,其与嗜水气单胞菌ATCC 7966脂酶、嗜水气单胞菌AH-3磷脂酶A1、嗜水气单胞菌H3脂酶、嗜水气单胞菌Mcc-2脂酶、嗜水气单胞菌J MP636磷脂酶C的序列同源性分别为97%、97%、88%、83%和82%。将DNA序列翻译成氨基酸序列后,发现其包含一个多肽序列(VHFLGHSLGA),这个序列在脂酶中高度保守。

关键词：嗜水气单胞菌基因组步移脂酶

不同饲料对银鲳幼鱼增重率、肝脏脂酶及抗氧化酶活性的影响

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水产学报 2010年第6期34卷 949-954页

作者：彭士明尹飞孙鹏施兆鸿王建钢中国水产科学研究院东海水产研究所

利用营养学与生物化学的方法,研究分析了不同饲料对银鲳幼鱼增重率、饲料系数、肝脏脂酶及抗氧化酶活性的影响。试验共设4组不同饲料,依次为饲料1(新鲜鱼肉糜)、饲料2(新鲜鱼肉糜+饲料)、饲料3(新鲜鱼肉糜+饲料+蛏子肉糜)和饲料4(新鲜... 详细信息

利用营养学与生物化学的方法,研究分析了不同饲料对银鲳幼鱼增重率、饲料系数、肝脏脂酶及抗氧化酶活性的影响。试验共设4组不同饲料,依次为饲料1(新鲜鱼肉糜)、饲料2(新鲜鱼肉糜+饲料)、饲料3(新鲜鱼肉糜+饲料+蛏子肉糜)和饲料4(新鲜鱼肉糜+饲料+蛏子肉糜+桡足类)。试验用银鲳幼鱼的平均体重为(4.80±0.11)g,每组饲料设3重复,试验周期为9周。研究结果显示,不同饲料可显著影响银鲳的增重率,各饲料组中以饲料1组的增重率最低,并显著低于其它各饲料组;饲料4组的增重率最高,并显著高于饲料2、3组的增重率(P0.05)。饲料1组肝脂酶与总脂酶活性均显著低于其它3组饲料组(P脂蛋白脂酶、肝脂酶和总脂酶活性均未有显著性差异(P>0.05)。各组间肝脏超氧化物歧化酶(SOD)与谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性均未有显著性差异(P>0.05),但均以饲料1组最低、饲料4组最高;饲料1、2、3组间肝脏过氧化氢酶(CAT)活性未有显著性差异(P>0.05),但饲料4组CAT活性显著高于饲料1组的CAT活性(P<0.05)。分析结果表明,单纯利用鱼肉糜作为饲料不利于银鲳的生长;饲料中添加桡足类不但有助于促进银鲳的生长,也可提高其抗氧化能力。

关键词：银鲳饲料生长脂酶抗氧化酶

脂酶催化的3,3’-联二噻吩衍生物的不对称合成

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上海应用技术学院学报（自然科学版） 2013年第3期13卷 201-203,215页

作者：殷燕刘希晨张恒上海应用技术学院化学与环境工程学院上海201418

3,3’-联二噻吩是一类重要的结构单元,广泛应用于不对称催化、有机电子材料和药物化学等领域。利用脂酶催化的不对称乙酰化反应实现了手性3,3’-联二噻吩衍生物的合成,制备了(S)-4,4’-二溴-2,2’-二羟甲基-3,3’-联二噻吩,对映体过量(... 详细信息

3,3’-联二噻吩是一类重要的结构单元,广泛应用于不对称催化、有机电子材料和药物化学等领域。利用脂酶催化的不对称乙酰化反应实现了手性3,3’-联二噻吩衍生物的合成,制备了(S)-4,4’-二溴-2,2’-二羟甲基-3,3’-联二噻吩,对映体过量(ee)值为94%。该不对称合成方法具有无毒、操作方便和易分离提纯等优点。

关键词： 3,3’-联二噻吩不对称合成脂酶乙酰化反应

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脂酶催化下选择性合成单酸甘油酯的研究

辽宁师范大学学报（自然科学版） 2007年第3期30卷 343-347页

作者：洪哲杜春霖辽东学院装备与材料学院辽宁丹东118003 辽东学院化工与材料学院辽宁丹东118003

脂酶存在下,在有机溶剂中进行甘油和硬脂酸甲酯的酯交换反应,以60%以上的转换率合成出单酸甘油酯(MG),而甘油二酯(DG)的生成率抑制在2%以下.经多种脂酶的对比试验,证明porcine胰脂酶(PPL)最适于本反应.通过改变基质、PPL浓度、反应温度... 详细信息

脂酶存在下,在有机溶剂中进行甘油和硬脂酸甲酯的酯交换反应,以60%以上的转换率合成出单酸甘油酯(MG),而甘油二酯(DG)的生成率抑制在2%以下.经多种脂酶的对比试验,证明porcine胰脂酶(PPL)最适于本反应.通过改变基质、PPL浓度、反应温度等,从反应活性及反应选择性两方面选定了最佳条件.通过将多种脂肪酸甲酯运用于本反应,发现反应活性与脂肪酸的结构紧密相关,链愈短向MG的初始反应速度加快,但向DG的转换亦加快,结果MG的选择性下降.

关键词：单酸甘油酯脂酶酯交换作用甘油硬脂酸甲酯

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游离DHA酯化富集的脂酶催化工艺研究

食品工业科技 2010年第2期31卷 229-232页

作者：高巍乙引杨立昌宋庆发贵州师范大学生命科学学院贵州贵阳550001

研究了脂酶催化游离DHA和甘油酯化的工艺。结果表明:以Rhizomucor miehei脂酶催化的一步法工艺的最适条件为FFA∶甘油=1∶3、脂酶量1%和水分5%,其酯化率、三酰甘油(TAG)含量和TAG中DHA富集量分别为71.6%、22.98%和47.53%;以Rhizomucor m... 详细信息

研究了脂酶催化游离DHA和甘油酯化的工艺。结果表明:以Rhizomucor miehei脂酶催化的一步法工艺的最适条件为FFA∶甘油=1∶3、脂酶量1%和水分5%,其酯化率、三酰甘油(TAG)含量和TAG中DHA富集量分别为71.6%、22.98%和47.53%;以Rhizomucor miehei脂酶催化的二步法工艺和以Rhizomucor miehei脂酶、Alcaligenes sp.脂酶共同催化的混合酶法工艺不能改变TAG中DHA的百分含量,但可显著提高反应的酯化率和TAG含量。其中,二步法工艺可将酯化率和TAG含量分别提高到84.66%和91.86%,而混合酶法工艺则可分别将其进一步增加到97.68%和93.39%。

关键词：脂酶 DHA Rhizomucor miehei Alcaligenes sp. 酯化富集生产工艺

运动和限食对食源性肥胖大鼠脂联素、脂酶影响的研究

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运动和限食对食源性肥胖大鼠脂联素、脂酶影响的研究

作者：胡戈北京体育大学

学位级别：硕士

目的:通过探讨运动及限食对于肥胖大鼠血脂、脂联素及总脂酶（脂蛋白脂酶和肝脂酶）的影响,从相关指标变化入手,分析运动及限食对肥胖大鼠脂代谢的影响。方法:从87只雄性SD大鼠中随机抽取7只作为安静对照组,剩余80只建立肥胖模型。安静... 详细信息

目的:通过探讨运动及限食对于肥胖大鼠血脂、脂联素及总脂酶（脂蛋白脂酶和肝脂酶）的影响,从相关指标变化入手,分析运动及限食对肥胖大鼠脂代谢的影响。方法:从87只雄性SD大鼠中随机抽取7只作为安静对照组,剩余80只建立肥胖模型。安静对照组用普通饲料喂养,建模组用高脂饲料喂养,共11周。模型建立后按体重随机分为肥胖安静对照组、肥胖限食组、肥胖运动组和肥胖运动限食组。肥胖安静对照组、肥胖运动组继续喂饲高脂饲料,限食组喂饲量为肥胖安静对照组喂饲量的80%,每天调整。自由饮水,每周称重1次。运动形式采用游泳,5周,6天/周,首次运动30分钟,此后增加10分钟/天,直到维持90分钟。最后一次运动结束后60小时宰杀大鼠,观察大鼠体重、体长、Lee’s指数,检测血清脂联素、TG、TC、HDL-C、LDL-C浓度,LPL、HL和总脂酶活性等指标。结果:①肥胖限食组、运动组和运动限食组大鼠体重与肥胖安静对照组相比显著下降（P＜0.05）,其中肥胖运动组和运动限食组有非常显著性差异（P＜0.01）。②肥胖运动和运动限食组血清脂联素水平显著高于肥胖安静对照组（P＜0.05）。③肥胖限食组血清TG显著低于肥胖安静对照组（P＜0.05）,肥胖运动组和运动限食组血清TG非常显著低于肥胖安静对照组（P＜0.01）。肥胖限食组、运动组和运动限食组血清TC和LDL-C均非常显著低于肥胖安静对照组（P＜0.01）,肥胖运动限食组血清LDL-C非常显著低于肥胖运动组和限食组（P＜0.01）。肥胖运动限食组血清HDL-C非常显著高于肥胖安静对照组（P＜0.01）。④肥胖运动组和运动限食组LPL活性显著高于肥胖安静对照组（P＜0.05）。肥胖限食组、运动组和运动限食组血清HL活性显著低于肥胖安静对照组（P＜0.05）。各组间总脂酶活性没有显著差异。结论:通过11周的高脂饲料饲养,成功建立了肥胖大鼠模型,在此基础上得出以下结论:①运动与限食能显著升高肥胖大鼠血清脂联素浓度。②运动与限食能显著升高血清LPL活性,降低血清HL活性。③运动与限食能改善肥胖大鼠血脂水平,显著降低肾脏周围和附睾周围脂肪组织重量。

关键词：肥胖大鼠运动限食脂联素脂酶

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槐糖内酯的脂酶修饰

有机化学 1999年第2期19卷 181-183页

作者：施邑屏李江云李祖义中国科学院上海有机化学研究所上海200032

槐糖内酯是一种生物表面活性剂,槐糖内酯经脂酶修饰后,并未得到断裂内酯键的槐糖脂开环衍生物,而是有选择性地水解掉糖上的一个乙酰基。

关键词：脂酶槐糖内酯结构改性修饰表面活性剂

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抗大鼠肝脏脂酶抗血清的制备及应用

北京大学学报（自然科学版） 1998年第6期34卷 759-764页

作者：余瑞元北京大学生命科学学院澳大利亚墨尔本大学

按照ＲＨＬｃＤＮＡ核苷酸序列所预示肽链的氨基酸序列，化学合成了与肽链Ｎ端、Ｃ端和中部相对应的３个肽段ＨＬ１、ＨＬ２和ＨＬ３，并将它们分别偶联上载体蛋白ＫＬＨ，以偶联蛋白为免疫原免疫家兔，获得了抗血清。经ＥＬＩＳＡ检测... 详细信息

按照ＲＨＬｃＤＮＡ核苷酸序列所预示肽链的氨基酸序列，化学合成了与肽链Ｎ端、Ｃ端和中部相对应的３个肽段ＨＬ１、ＨＬ２和ＨＬ３，并将它们分别偶联上载体蛋白ＫＬＨ，以偶联蛋白为免疫原免疫家兔，获得了抗血清。经ＥＬＩＳＡ检测表明，抗血清的滴度为１：５１２００～１０２４００。用所制备的抗血清进行Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析。

关键词：肝脏脂酶抗血清 RHL 生化药物动脉粥样硬化

辐照诱导的新雄性不育系过氧化物酶和脂酶同工酶分析

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核农学报 2005年第4期19卷 304-306页

作者：林宝刚张明龙王桂荣浙江大学原子核农业科学研究所浙江杭州310029

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳法,对甘蓝型油菜细胞质雄性不育系Polima、Shan2A、Ogu和辐照处理的新雄性不育系Xin1和Xin2及其保持系Shan2B的种子进行了脂酶和过氧化物酶分析,结果表明:5个细胞质雄性不育系比保持系Shan2B多1条迁移率为0... 详细信息

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳法,对甘蓝型油菜细胞质雄性不育系Polima、Shan2A、Ogu和辐照处理的新雄性不育系Xin1和Xin2及其保持系Shan2B的种子进行了脂酶和过氧化物酶分析,结果表明:5个细胞质雄性不育系比保持系Shan2B多1条迁移率为0.45的脂酶(EST)谱带;Xin1、Shan2A和Polima各有4条过氧化物酶(POD)谱带,保持系缺少1条迁移率为0.61的POD谱带,推测这一同工酶的表达可能与雄性不育相关。

关键词：甘蓝型油菜细胞质雄性不育脂酶过氧化物酶过氧化物酶(POD) 细胞质雄性不育系同工酶分析辐照诱导聚丙烯酰胺凝胶甘蓝型油莱