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中药复方三痛乐中总生物碱和脂溶性生物碱的测定

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药物分析杂志 1995年第A1期15卷 384-385页

作者：李兰芳赵淑云

金钗石斛脂溶性生物碱提取物诱导人结肠癌 HT-29 细胞凋亡

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食品工业科技 2017年第3期38卷 170-174,191页

作者：和磊罗婧王亚芸石玉杰任建武北京林业大学生物科学技术学院北京100083 北京大学医学部药学院北京100191

目的:研究金钗石斛脂溶性生物碱提取物对人结肠癌HT-29细胞生长的抑制作用及其诱导细胞凋亡的分子机制。方法:MTT法检测金钗石斛脂溶性生物碱提取物对HT-29细胞存活率的影响,Hoechst33342染色法观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测胞内... 详细信息

目的:研究金钗石斛脂溶性生物碱提取物对人结肠癌HT-29细胞生长的抑制作用及其诱导细胞凋亡的分子机制。方法:MTT法检测金钗石斛脂溶性生物碱提取物对HT-29细胞存活率的影响,Hoechst33342染色法观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测胞内活性氧水平、线粒体膜电位、细胞周期和细胞凋亡率变化;蛋白免疫印迹检法测蛋白Caspase-3,9和胞内细胞色素C的表达。结果:金钗石斛脂溶性生物碱提取物能降低HT-29结肠癌细胞存活率,呈剂量和时间效应,48 h半数抑制浓度(IC50)为0.72 mg/m L;金钗石斛脂溶性生物碱提取物能诱导HT-29细胞凋亡,并诱导细胞周期阻滞于G2期;金钗石斛脂溶性生物碱提取物诱使线粒体膜电位降低,胞内活性氧浓度升高;激活型Caspase-9,3与胞内细胞色素C表达水平增高。结论:金钗石斛脂溶性生物碱提取物对HT-29结肠癌细胞的生长具有抑制作用并诱导细胞凋亡,其可能通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡。

关键词：金钗石斛脂溶性生物碱 HT-29细胞细胞凋亡活性氧

基于血浆代谢组学的附子脂溶性生物碱对佐剂性关节炎模型大鼠的毒性作用机制研究

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中国药房 2019年第1期30卷 78-83页

作者：谢运飞李芸霞刘美辰周忆梦王彪彭成成都中医药大学药学院/中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地成都611137 四川省医学科学院/四川省人民医院核医学科成都610072

目的:研究附子脂溶性生物碱对佐剂性关节炎(AIA)模型大鼠的毒性作用机制。方法:将40只大鼠随机分为空白组(超纯水)、模型组(超纯水)和附子脂溶性生物碱低、高剂量组(12.5、35 mg/kg),每组10只。除空白组外,其余各组大鼠均于右后足垫部... 详细信息

目的:研究附子脂溶性生物碱对佐剂性关节炎(AIA)模型大鼠的毒性作用机制。方法:将40只大鼠随机分为空白组(超纯水)、模型组(超纯水)和附子脂溶性生物碱低、高剂量组(12.5、35 mg/kg),每组10只。除空白组外,其余各组大鼠均于右后足垫部位注射0.1 m L完全弗氏佐剂复制AIA模型。造模19 d后开始灌胃给药,每天1次。连续给药14 d后,采用超高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱结合高分辨质谱技术分离并鉴定血浆中内源性代谢物,然后对数据进行主成分分析(PCA)和偏最小二乘判别分析(PLS-DA),通过变量投影重要度值(VIP)>1和P值(脂溶性生物碱对AIA大鼠的毒性作用机制。结果:共鉴定出57个血浆代谢物,并确定了L-脯氨酸、6-羟基烟酸、腺苷等11个差异代谢物。AIA造模后可引起大鼠血浆中L-脯氨酸和尿苷酸含量显著降低(P脂溶性生物碱给药后可使模型大鼠血浆中腺苷和L-脯氨酸含量显著降低(P脂溶性生物碱给药后可使模型大鼠血浆中6-羟基烟酸、腺苷、肉碱、L-脯氨酸、N-甲酰氨基苯甲酸含量显著降低(P脂溶性生物碱对AIA模型大鼠的毒性较小;高剂量附子脂溶性生物碱对AIA模型大鼠的毒性作用可能与其引起胆汁分泌异常及赖氨酸生物合成及嘌呤、嘧啶、色氨酸、脯氨酸、精氨酸代谢紊乱有关。

关键词：附子脂溶性生物碱代谢组学佐剂性关节炎毒性机制大鼠

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臭常山理化特征及其脂溶性生物碱的提取工艺

江苏农业科学 2016年第1期44卷 279-282页

作者：吕庆银赵伟李岑李雄张振贵州大学酿酒与食品工程学院贵州贵阳550025 贵州理工学院制药工程学院贵州贵阳550025

先对臭常山的水分、总灰分、醇浸出物及其TLC、HPLC指纹图谱进行研究,明晰试验药料的理化特征,然后采用超声波辅助乙醇提取法对臭常山脂溶性生物碱的提取工艺进行正交优化。结果表明,本试验材料臭常山的水分、醇溶性浸出物、总灰分含量... 详细信息

先对臭常山的水分、总灰分、醇浸出物及其TLC、HPLC指纹图谱进行研究,明晰试验药料的理化特征,然后采用超声波辅助乙醇提取法对臭常山脂溶性生物碱的提取工艺进行正交优化。结果表明,本试验材料臭常山的水分、醇溶性浸出物、总灰分含量分别为8.21%、6.22%、6.20%;在单因素的基础上,正交试验确定的最佳提取工艺条件为臭常山粗粉400 g,料液比1 g∶20 m L,65%乙醇超声提取80 min/次,超声提取3次,脂溶性生物碱的提取率为0.385%。

关键词：臭常山指纹图谱脂溶性生物碱正交试验

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藏族药甘青乌头脂溶性生物碱分析

中国实验方剂学杂志 2016年第10期22卷 32-36页

作者：杨丽华李春林丽美王智民李钟中国中医科学院中药研究所中药质量控制技术国家工程实验室北京100700 广东药科大学广州510006 湖南中医药大学长沙410208

目的：对藏族药甘青乌头全草的脂溶性生物碱进行研究。方法：采用多种现代色谱技术进行分离纯化,并通过理化性质、波谱分析（1D,2D-NMR和MS）,X射线单晶衍射等方法确定化合物结构。结果：从甘青乌头的脂溶性生物碱部位分离并鉴定了10个... 详细信息

目的：对藏族药甘青乌头全草的脂溶性生物碱进行研究。方法：采用多种现代色谱技术进行分离纯化,并通过理化性质、波谱分析（1D,2D-NMR和MS）,X射线单晶衍射等方法确定化合物结构。结果：从甘青乌头的脂溶性生物碱部位分离并鉴定了10个化合物,它们的结构分别为tanaconitine（1）,heteratisine（2）,11α,13α-dihydroxyhetisinone（3）,guan-fu base H（4）,β-谷甾醇（5）,苯甲酰胺（6）,邻苯二甲酸正丁基异丁基酯（7）,dihydroatisine（8）,hetisine（9）和对羟基苯乙醇（10）。结论：化合物1-4,8和9为二萜生物碱,化合物3,6-8为首次从甘青乌头中分离得到,本文首次对化合物3和4做了X射线单晶衍射数据分析。

关键词：甘青乌头化学成分脂溶性生物碱

附子脂溶性生物碱治疗类风湿性关节炎的细胞学机制研究

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附子脂溶性生物碱治疗类风湿性关节炎的细胞学机制研究

作者：郭朝成成都中医药大学

学位级别：硕士

目的:人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(human fibroblast-like synoviocytes of rheumatoid arthritis,HFLS-RA)介导的滑膜炎症和滑膜组织增生,在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的发生和持续过程中起着非常重要的作用。附... 详细信息

目的:人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(human fibroblast-like synoviocytes of rheumatoid arthritis,HFLS-RA)介导的滑膜炎症和滑膜组织增生,在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的发生和持续过程中起着非常重要的作用。附子脂溶性生物碱(Aconiti Lateralis Radix Praeparata lipid-soluble alkaloids,FLA)是从传统中药附子中提取的主要生物活性成分,具有良好的镇痛和抗炎作用。课题组前期研究发现,FLA对佐剂型关节炎大鼠有显著的治疗作用。然而,FLA治疗RA的作用及其机制尚不清楚。因此,本文以HFLS-RA为研究对象,探讨FLA对RA的治疗作用及其潜在机制。方法:1.使用不同浓度的IL-1β刺激HFLS-RA,通过检测HFLS-RA活力和炎症介质的表达情况探讨建立体外RA模型的IL-1β浓度。2.将FLA和IL-1β与HFLS-RA共孵育。采用MTT法检测HFLS-RA活力;采用ELISA和RT-q PCR法分析炎症介质TNF-α、IL-6、MMP-1、MMP-3、PGE2和COX-2的表达水平。3.采用分子对接技术模拟FLA中的三种代表性生物碱,乌头碱、新乌头碱及次乌头碱分别与NF-κB、MAPKs和线粒体凋亡信号通路上的主要蛋白,包括NF-κB-p65、IκBα、JNK、ERK1/2、p38、Bax、Bcl-2的结合情况,预测FLA治疗RA的潜在靶点。4.采用Annexin V-FITC/PI双染法结合流式细胞仪检测HFLS-RA凋亡情况;采用Western Blot法检测NF-κB、MAPKs和线粒体凋亡信号通路相关蛋白,包括NF-κB-p65、IκBα、p-IκBα、JNK、p-JNK、ERK1/2、p-ERK1/2、p38、p-p38、Bax、Bcl-2、Cytochrome C、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9和Cleaved PARP的表达水平;采用免疫荧光法检测NF-κB-p65的核移位情况。结果:1.10 ng/m L的IL-1β能够通过诱导HFLS-RA增殖以及炎症介质的过表达,成功建立体外RA模型。***对IL-1β诱导的HFLS-RA增殖有显著的抑制作用,并且显著下调了HFLS-RA中TNF-α、IL-6、MMP-1、MMP-3、COX-2和PGE2的表达水平。3.乌头碱、新乌头碱及次乌头碱与各靶点蛋白之间存在较强的亲和力,提示NF-κB-p65、IκBα、JNK、ERK1/2、p38、Bax、Bcl-2可能为FLA治疗RA的潜在靶点。***能够诱导HFLS-RA凋亡;FLA能够显著抑制IL-1β诱导的HFLS-RA中NF-κB-p65的核移位以及IκBα的磷酸化和降解;FLA能够显著降低ERK1/2、JNK和p38的磷酸化水平;FLA能够显著下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,并显著上调促凋亡蛋白Bax及其下游蛋白Cytochrome C、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9和Cleaved PARP的表达。结论:***可以通过抑制IL-1β诱导的HFLS-RA中NF-κB和MAPKs信号通路的激活,从而下调炎症介质的表达,发挥治疗RA患者滑膜炎症的作用。***可以通过激活线粒体凋亡信号通路来诱导HFLS-RA凋亡,从而抑制HFLS-RA的类肿瘤样异常增殖,发挥改善RA患者滑膜组织增生症状的作用。

关键词：附子脂溶性生物碱类风湿性关节炎人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞炎症细胞凋亡

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杜仲雄花脂溶性生物碱的镇静催眠作用研究

包装与食品机械 2011年第5期29卷 9-12,40页

作者：李欣刘严樊金玲罗磊郭菡河南科技大学食品与生物工程学院河南洛阳471003

目的:研究不同剂量杜仲雄花脂溶性生物碱的镇静催眠作用。方法:采用酸水提取法提取杜仲雄花中脂溶性生物碱。观察不同剂量杜仲雄花脂溶性生物碱对小鼠自主活动的影响以及直接镇静催眠作用,与戊巴比妥钠的协同作用和抗惊厥作用。结果:杜... 详细信息

目的:研究不同剂量杜仲雄花脂溶性生物碱的镇静催眠作用。方法:采用酸水提取法提取杜仲雄花中脂溶性生物碱。观察不同剂量杜仲雄花脂溶性生物碱对小鼠自主活动的影响以及直接镇静催眠作用,与戊巴比妥钠的协同作用和抗惊厥作用。结果:杜仲雄花脂溶性生物碱能有效减少小鼠的自主活动数;与戊巴比妥钠有良好的协同作用,阈下剂量的戊巴比妥钠能增加小鼠睡眠率并延长睡眠时间;阈上剂量的戊巴比妥钠能显著延长睡眠时间并缩短睡眠潜伏期;杜仲雄花脂溶性生物碱还能有效地降低尼可刹米所致的小鼠惊厥率。结论:杜仲雄花脂溶性生物碱具有良好的镇静催眠作用。

关键词：杜仲雄花脂溶性生物碱镇静催眠

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苦木生物碱体外抑制大肠杆菌效果的研究

安徽农业科学 2008年第7期36卷 2777-2778页

作者：何颖刘伟陈忠伟赵武钟泽篪韦英益广西兽医研究所广西南宁530001 广西大学动物科学技术学院广西南宁530005

[目的]测定苦木生物碱对大肠杆菌C249、WM和YL株的体外抑菌效果。[方法]采用平板培养法制备菌液,用微量稀释法测定最小抑菌浓度,用杯碟法进行体外抑菌试验。[结果]脂溶性苦木生物碱在体外对大肠杆菌有较强的抑制作用,对大肠杆菌C249、WM... 详细信息

[目的]测定苦木生物碱对大肠杆菌C249、WM和YL株的体外抑菌效果。[方法]采用平板培养法制备菌液,用微量稀释法测定最小抑菌浓度,用杯碟法进行体外抑菌试验。[结果]脂溶性苦木生物碱在体外对大肠杆菌有较强的抑制作用,对大肠杆菌C249、WM、YL株的抑菌圈直径分别为19.07±0.232、0.77±0.59、23.00±0.21 mm,属高度敏感,最小抑菌浓度分别为3.2、1.6和1.6 mg/ml。水溶性苦木生物碱对上述菌株几乎无抑菌作用,其抑菌圈直径均小于13 mm,属低度敏感。[结论]脂溶性苦木生物碱对大肠杆菌标准强毒株的体外抑菌效果优于硫酸黄连素,与痢菌净和氧氟沙星相当,比氟苯尼考略差,但对在广西分离到的强毒株WM和YL株的体外抑菌效果也明显优于硫酸黄连素、痢菌净和氧氟沙星,与氟苯尼考相当。

关键词：苦木脂溶性生物碱水溶性生物碱

镰形棘豆抗肿瘤作用体内外活性部位筛选及基于TLRs/NF-κB信号通路的机制研究

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镰形棘豆抗肿瘤作用体内外活性部位筛选及基于TLRs/NF-κB信号通...

作者：李萌南京中医药大学

学位级别：硕士

现代研究表明炎症在肿瘤的发生发展中起着重要作用,近年来炎症与肿瘤的关系引起了人们的重视。藏药镰形棘豆因疗效突出享有草药之王的美誉。前期研究表明镰形棘豆除传统的镇痛抗炎功效外,还具有良好的抗肿瘤作用,但抗肿瘤机制如何,与抗... 详细信息

现代研究表明炎症在肿瘤的发生发展中起着重要作用,近年来炎症与肿瘤的关系引起了人们的重视。藏药镰形棘豆因疗效突出享有草药之王的美誉。前期研究表明镰形棘豆除传统的镇痛抗炎功效外,还具有良好的抗肿瘤作用,但抗肿瘤机制如何,与抗炎之间有何关联尚不明晰。本论文将镰形棘豆各成分进行化学分离后,进行体内体外抗肺癌活性最优部位筛选;通过蛋白免疫印迹法检测镰形棘豆有效部位脂溶性生物碱对TLRs/NF-κB信号通路的影响,为阐明镰形棘豆抗肿瘤的分子机制奠定基础。1.镰形棘豆各部位提取和体内抗A549细胞活性筛选将镰形棘豆用乙醇常温冷浸后的浸膏分离为脂溶性生物碱、黄酮提取物、挥发油、醇溶性生物碱、挥发性生物碱、挥发性结晶六个部分,95%乙醇提取物得率为9.86%,脂溶性生物碱得率为0.42%,黄酮提取物得率66.4%,挥发油、醇溶性生物碱、挥发性生物碱、挥发性结晶得率较低。采用CCK-8法筛选各提取部位对人肺腺癌细胞A549细胞株增殖有抑制作用的活性部位,脂溶性生物碱、黄酮提取物、挥发油、95%醇提物均具有显著的抑制A549细胞增殖的活性。其中脂溶性生物碱的IC50值最低,为232.9 μg·mL-1。表明脂溶性生物碱体外抗A549肺癌细胞的效果最佳,也为进一步的体内抗肿瘤实验提供了科学的依据和参考。2.镰形棘豆脂溶性生物碱部位、黄酮部位含量测定实验采用采用野决明碱为对照品,酸性染料比色法对镰形棘豆脂溶性生物碱的生物碱成分进行含量测定,标准曲线Y=0.0084X+0.032,相关系数R2=0.9996。结果表明,当野决明碱对照品浓度在20.06～100.03μg·mL-1范围内,对照品用量与吸光度之间呈良好的线性关系。实验以芦丁为对照品,采NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法测定镰形棘豆中总黄酮的含量,标准曲线Y=0.0004X-0.0043,相关系数R2=0.9999。结果表明,芦丁标准品溶液浓度在105～1260μg· mL-1范围内线性关系良好。分别对两种含量测定方法进行了方法学考察,两种方法均具有较好的精密度、稳定性、重复性、加样回收率,生物碱含量为生物碱的含量为0.9938 mg·mg-1;黄酮的含量为0.2053 mg·mg-1。3.优选提取部位的急性毒性试验和对Lewis肺癌小鼠的体内抗肿瘤作用.通过采用加权机率单位法(Bliss氏法),对95%醇提物、脂溶性生物碱、黄酮提取物进行急性毒性实验。镰形棘豆临床给药量为0.3～0.5 g,镰形棘豆95%醇提物最大耐受量为18000 mg·kg-1,为临床最大剂量的2808倍。脂溶性生物碱LD50 为 3856.2 mg·kg-1,为临床最大剂量的 141567 倍。LD50(Feiller 校正)95%的可信限为2683.8～5111.6 mg·kg-1。黄酮提取物急性半数致死量LD50为6707.5 mg·kg-1,为临床最大剂量的1569倍,LD50(Feiller校正)95%的可信限为5488.4～8354.2 mg·kg-1。说明镰形棘豆三种提取物在临床推荐用量下安全。选用C57BL/6小鼠,建立Lewis肺癌小鼠模型,接种后将Lewis肺癌荷瘤小鼠分为空白组、阳性组、模型组、95%醇提物高中低剂量组、脂溶性生物碱高中低剂量组、黄酮高中低剂量组。综合考察镰形棘豆醇提物各提取部位对小鼠肿瘤生长的影响,给药后计算抑瘤率、胸腺指数、脾指数,通过流式细胞术观察对肿瘤细胞凋亡的影响,并使用HE染色,在显微镜下观察各组肿瘤细胞的形态学状态,评价药物抑瘤作用的组织学变化。结果表明,镰形棘豆三个提取部位对Lewis肺癌荷瘤小鼠都具有抗肿瘤作用,其中以脂溶性生物碱的抑瘤作用最为显著,与空白组相比,三个剂量组均有显著性差异(P脂溶性生物碱组诱导凋亡比例较高,高剂量组达到55.3%。病理切片结果显示,模型组肿瘤细胞排列规则,核分裂常见,血管丰富;各给药组均具有不同程度的癌细胞坏死,纤维组织增生,脂溶性生物碱组癌细胞出现较大的坏死区域。实验结果显示其抗肿瘤机制与环磷酰胺的细胞毒不同,镰形棘豆脂溶性生物碱可以明显诱导Lewis肺癌细胞凋亡并将细胞周期停滞于S期,并且没有免疫抑制作用,其具体机制还有待进一步探索,以期开发出抗肿瘤的同时不抑制机体免疫反应的抗癌新药。4.脂溶性生物碱对小鼠肺癌细胞TLRs/NF-κB通路的影响将镰形棘豆中体外抗A

关键词：镰形棘豆脂溶性生物碱体内外筛选 TLRs/NF-κB