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胺脱氢酶的分子改造及用于大体积芳香酮的还原胺化

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胺脱氢酶的分子改造及用于大体积芳香酮的还原胺化

作者：汪东浩华东理工大学

学位级别：硕士

手性胺是许多药物、天然产物等生物活性分子的关键结构单元,也被用作手性拆分剂和手性配体合成各类精细化学品和农用化学品。胺脱氢酶是近几年开发出的一类催化酮不对称还原胺化合成手性胺的新型生物催化剂,它可利用廉价的无机氨水作为... 详细信息

手性胺是许多药物、天然产物等生物活性分子的关键结构单元,也被用作手性拆分剂和手性配体合成各类精细化学品和农用化学品。胺脱氢酶是近几年开发出的一类催化酮不对称还原胺化合成手性胺的新型生物催化剂,它可利用廉价的无机氨水作为氨基供体,且生成的副产物只有水,具有较好的原子经济性,在手性胺的合成中表现出良好的应用前景。但迄今为止,已报道的胺脱氢酶还不能还原胺化大体积的芳香酮类化合物。这里,我们拟通过蛋白质工程技术对实验室前期构建的胺脱氢酶Gk-AmDH进行分子改造,以实现其对大多数大体积芳香酮类化合物催化活性“从无到有”的突破,从而拓展其催化的底物谱,为大体积芳香族手性胺的合成提供一种有潜力的生物催化剂,拓宽其在手性胺合成中的应用范围。本研究的主要工作分为如下两个部分:第一部分:针对目前胺脱氢酶不能催化大体积芳香酮类化合物的难题,我们以实验室前期构建的胺脱氢酶Gk-AmDH作为研究对象,利用生物信息学的方法对其进行同源建模和结构分析。以大体积的苄基丙酮作为模式底物,与Gk-AmDH进行分子对接,根据对接结果我们推测底物结合口袋末端的氨基酸残基(L50、V144、V309和A310)可能对苄基丙酮与酶的结合产生一定的空间阻碍。因此,我们将其突变为具有较小侧链的丙氨酸或甘氨酸,考察这些氨基酸对酶催化的影响。在此基础上,我们将三个有益突变位点进行组合,最终获得了对模式底物苄基丙酮催化效率提升10倍的胺脱氢酶突变体Gk-AmDH-M3,其催化活力达0.65 U mg-1,远高于目前文献已报道的最高值(8.8 mU mg-1)。随后,我们对最优突变体Gk-AmDH-M3的蛋白熔解温度进行了测定,其Tm值高达68.6℃,表现出优良的热稳定性。此外,通过对底物结合口袋体积的计算,我们发现最优突变体Gk-AmDH-M3的口袋体积相较于母本扩大了44 (?)3,表现出可进一步结合催化其它大体积底物的潜力。第二部分:在获得了底物结合口袋体积明显增加的突变体Gk-AmDH-M3后,我们考察了它对多种大体积芳香酮类化合物的催化能力,以探索其底物谱的变化。研究结果表明:母本对考察的大多数大体积芳香酮类底物都不能催化,而最优突变体Gk-AmDH-M3则能够实现对它们的转化。此外,基于反应结果与结构分析,我们发现S156位点可能与底物苯环上邻位取代基团存在相互作用,从而影响该类化合物的催化效率,因此,我们对其进行了定点饱和突变研究,结果发现该位点与底物苯环上邻位基团之间存在氢键相互作用,为后续胺脱氢酶的研究提供了一个良好的基础。最后,在验证了突变体Ck-AmDH-M3对各种大体积芳香酮均具有较好催化能力后,我们通过偶联甲酸脱氢酶(FDH)辅酶循环体系,以甲酸铵作为反应的氨基供体和辅酶循环供体,进行了各手性胺产物的酶法制备,过程中形成的副产物仅为水与二氧化碳。结果表明:酶促反应可合成R构型的手性胺产物且产品的光学纯度均在99%以上(>99%ee)。上述这些结果证实了胺脱氢酶在大体积手性胺催化合成中的可行性。

关键词：生物催化还原胺化胺脱氢酶蛋白质工程底物谱拓展手性胺

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工程化胺脱氢酶辅酶结合域的分子改造

工程化胺脱氢酶辅酶结合域的分子改造

作者：李佳琳江南大学

学位级别：硕士

NADH依赖型胺脱氢酶(Am DH)催化前手性酮和游离氨的不对称还原胺化途径具有反应条件温和、绿色高效及产物光学纯度高等优点,广泛应用于重要结构砌块和医药中间体手性胺的合成。对于底物结合域和辅酶结合域相互独立的Am DH,近年来主要的... 详细信息

NADH依赖型胺脱氢酶(Am DH)催化前手性酮和游离氨的不对称还原胺化途径具有反应条件温和、绿色高效及产物光学纯度高等优点,广泛应用于重要结构砌块和医药中间体手性胺的合成。对于底物结合域和辅酶结合域相互独立的Am DH,近年来主要的研究集中在对Am DH底物结合口袋关键位点的分子改造,提高Am DH底物催化活力或者拓宽其底物谱,但对辅酶结合域的改造报道较少。本研究通过对Am DH辅酶结合域进行分子改造,获得高辅酶亲和力的Am DH,提高不对称还原胺化的催化效率进而降低工业生产成本,为Am DH的工业化应用奠定基础。本论文的具体研究内容如下:(1)通过将源于Bacillus cereus的亮氨酸胺脱氢酶(L-Bc Am DH)的高辅酶亲和力辅酶结合域替换源于Bacillus badius的苯丙氨酸胺脱氢酶(F-Bb Am DH)辅酶结合域,构建获得一种新的嵌合胺脱氢酶c FLF-Am DH。使用自诱导培养基可使c FLF-Am DH实现可溶性高效表达。c FLF-Am DH辅酶亲和力(K)较F-Bb Am DH的提高了2倍,对于天然底物对氟苯基丙酮(p FPA)的活性提高了150%。c FLF-Am DH酶学性质研究结果表明,其最适反应p H为10.0,最适反应温度为60℃。与亲本F-Bb Am DH相比,c FLF-Am DH的热稳定性提高了160%。(2)分子对接研究表明c FLF-Am DH对于底物p FPA作用的关键位点残基作用力的距离缩短,是催化活力提高的主要原因。分子动力学模拟(MD)和结合能结果表明,c FLF-Am DH与NADH复合物的RMSD的波动范围较F-Bb Am DH与NADH复合物小,并且c FLF-Am DH的RMSF值比F-Bb Am DH低,说明c FLF-Am DH的结构较亲本F-Bb Am DH更稳定。不对称还原胺化反应结果表明,当辅酶浓度为0.5 m M时,c FLF-Am DH可达到99%的转化率。(3)基于与高辅酶亲和力的亮氨酸胺脱氢酶(L-Bc Am DH和L-Es Am DH)的序列比对,选择对辅酶结合口袋附近的2个氨基酸残基(D155和K193)分别进行饱和突变和组合突变,最终获得一个辅酶亲和力和催化效率显著提高的突变株F-Bb Am DH(D155L/K193N),突变株F-Bb Am DH(D155L/K193N)对辅酶NADH的K值为0.01 m M。(4)分子对接和酶与NADH复合物的分子动力学模拟结果表明,F-Bb Am DH的D155位点被亮氨酸(L)取代后影响了相邻残基间接改变酶与NADH之间的相互作用,K193位点被天冬酰胺(N)取代后与NADH的焦磷酸盐部分形成了更紧密的氢键。不对称还原胺化反应结果表明,当辅酶浓度为0.1 m M时,突变株F-Bb Am DH(D155L/K193N)在1 h内可达到99%的转化率。综上所述,针对工程化Am DH具有两个独立的结构域的特点,对工程化Am DH的辅酶结合域进行分子改造可获得对辅酶亲和力显著提高的突变株,进而提高催化效率,降低生产成本。

关键词：胺脱氢酶辅酶亲和力嵌合酶辅酶结合域分子改造

半理性设计胺脱氢酶不对称还原胺化合成手性氨基醇

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半理性设计胺脱氢酶不对称还原胺化合成手性氨基醇

作者：明辉中国科学技术大学

学位级别：硕士

光学纯胺醇化合物是多种生物活性分子中非常重要的手性砌块。其中(R)-3-氨基丁醇是抗艾滋病药物度鲁特韦的关键手性中间体,现阶段主要通过化学法制备,但化学催化存在对环境不太友好、反应路线长、产物选择性差等缺点。因此,开发高效廉价... 详细信息

光学纯胺醇化合物是多种生物活性分子中非常重要的手性砌块。其中(R)-3-氨基丁醇是抗艾滋病药物度鲁特韦的关键手性中间体,现阶段主要通过化学法制备,但化学催化存在对环境不太友好、反应路线长、产物选择性差等缺点。因此,开发高效廉价的(R)-3-氨基丁醇生物合成方法具有重要的基础研究和应用价值。实验室前期工作中已经筛选得到多个胺脱氢酶(amine dehydrogenase,AmDH),这些酶可以催化4-羟基-2-丁酮(1a)不对称还原胺化合成(R)-3-氨基丁醇((R)-1b),但其催化活性较低。其中源于嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)的胺脱氢酶GsAmDH(mh13)表现出最高的催化效率。本课题以mh13作为出发模板,采用迭代饱和突变的半理性设计策略构建突变体文库,并对获得的优势突变体进行了基础酶学表征和底物谱拓展等研究。主要研究内容如下:(1)胺脱氢酶的设计改造及基础酶学表征经条件优化后,确定最适反应条件分别为氨离子浓度1 M、pH9.0、温度40℃,在此基础上mh13催化30mM1a,反应24h时,转化率达到45%。但GsAmDH经过条件优化后,催化1a不对称还原胺化的催化效率依旧较低,因此,我们采用组合活性位点饱和测试(CAST)策略,偶联葡萄糖脱氢酶-NAD+辅酶再生体系,对GsAmDH进行设计改造和筛选。经过三轮的组合迭代,最终获得的最优突变体mh174(E114V/T134C/P146V/H187D/V294C)在反应24h时转化率≥99%,产物ee≥99%(R)。对于酶的催化性能,与起始模板mh13相比,最优突变体mh174的Km降低了 3.2倍,kcat提高了 1.6倍,kcat/Km提高了 5.0倍左右。对于酶的热稳定性,通过圆二色光谱测定每一轮中优势突变体的Tm值没有表现出较大波动,说明酶活性的提升并未导致热稳定性下降。(2)胺脱氢酶的放大反应、底物谱拓展研究及分子对接分析在10mL放大体系,100 mM的1a负载量下对最优突变体mh174进行测试,以探究突变体是否具有工业应用潜力,发现其反应36h时转化率可达99%,并且经过离子交换层析分离得到纯化后(R)-1b,分离收率高达90%。为了进一步拓展新获得的胺脱氢酶突变体的底物特异性,对10种羟基酮底物进行了测试。结果显示所有底物均可以转化为具有高ee值(≥ 99%)的相应产物。此外,通过同源建模和分子对接分析来深入阐明最优突变体mh174活性提高的机制,发现mh174上关键位点突变后新形成的一些额外相互作用,会对胺脱氢酶不对称还原胺化的活性产生影响。本研究改造实验室前期基因挖掘得到的可催化合成(R)-3-氨基丁醇的胺脱氢酶,为工业化手性胺醇化合物的合成拓展了高效生物催化剂的工具箱,并为类似高附加值医药中间体的生物合成提供了指导意义。

关键词：胺脱氢酶不对称还原胺化半理性设计 (R)-3-氨基丁醇酶学表征

苯丙胺脱氢酶的创制及其在手性胺合成中的应用

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苯丙胺脱氢酶的创制及其在手性胺合成中的应用

作者：柳磊华东理工大学

学位级别：硕士

手性胺是合成许多药物、天然产物、精细化学品及生物活性分子的关键中间体,同时它也是一种高效的手性拆分剂。目前,工业上主要利用酸碱和过渡金属催化烯酰胺和烯胺等中间体不对称还原的方法制备手性胺。化学法制备手性胺存在能耗大、反... 详细信息

手性胺是合成许多药物、天然产物、精细化学品及生物活性分子的关键中间体,同时它也是一种高效的手性拆分剂。目前,工业上主要利用酸碱和过渡金属催化烯酰胺和烯胺等中间体不对称还原的方法制备手性胺。化学法制备手性胺存在能耗大、反应步骤多和最终得率较低等诸多不足,因此研究开发更加绿色高效的手性胺合成工艺显得尤为重要。胺脱氢酶可利用无机氨作为氨基供体,催化酮不对称胺化还原制备手性胺。该反应具有反应条件温和、原子经济性高、水是唯一的副产物等优点,因此胺脱氢酶是手性胺不对称合成的理想催化剂,在国际学术界和工业界引起广泛关注。目前,已报道的大部分胺脱氢酶是由L-氨基酸脱氢酶进化而来,其数量有限且底物谱窄;此外,酶的热稳定性也是影响其实际应用的关键因素。因此,本研究的主要目的是通过基因组数据库挖掘和分子改造手段,创制热稳定性好、催化效率高的苯丙胺脱氢酶,拓展其底物谱,促使其在手性胺合成中得到广泛应用。本文首先通过数据库挖掘法克隆得到4个苯丙氨酸脱氢酶,经过蛋白可溶性表达情况分析、活力及热稳定性表征,最终我们筛选得到一个来自于嗜热菌Geobacillus kaustophilus的苯丙氨酸脱氢酶GkPheDH。GkPheDH的热稳定性好（T5015为78℃）,对天然底物苯丙酮酸的催化效率高,因此将其作为后续研究的对象。其次,我们对GkPheDH中与底物苯丙酮酸羧基结合的两个氨基酸残基Lys78和Asn276进行定点突变,获得具有催化酮不对称胺化还原功能的双突变体K78S/N276L（GkAmDH）。酶学性质研究表明,GkAmDH的最适pH和最适温度分别为9.0和55℃,其热稳定性好,蛋白解链温度高达71℃;GkAmDH在NH3·H2O/NH4COOH缓冲液中的操作稳定性好,可高效催化酮不对称胺化还原合成手性胺,其对映体选择性高达99%;此外,我们发现GkAmDH可利用有机伯胺作为氨基供体不对称合成手性仲胺。最后,我们尝试通过分子改造,提高GkAmDH的催化效率,通过几轮定点饱和突变和随机突变库的筛选,最终获得一个催化效率（kcat/KM）提高2.3倍的双突变体T129L/K282N。此外,为进一步拓展苯丙胺脱氢酶的底物谱,我们对GkPheDH中与天然底物苯丙酮酸羧基相结合的两个氨基酸残基进行定点饱和突变和组合突变,筛选得到一系列可高效催化邻位羟基酮不对称胺化还原的苯丙胺脱氢酶变种,从而实现了手性氨基醇的高效绿色生物合成。

关键词：生物催化胺脱氢酶蛋白质工程氨基供体手性胺氨基醇

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胺脱氢酶在手性胺生物合成中的研究进展

杭州师范大学学报（自然科学版） 2021年第3期20卷 230-238页

作者：郑晨妮吴刚贺瑾陈蕊蕊王志国陈振明杭州师范大学生命与环境科学学院浙江杭州311121 浙江海森药业股份有限公司浙江东阳322100 杭州师范大学医学部浙江杭州311121

手性胺化合物广泛存在于自然界各种天然产物中,具有易形成氢键和功能多样性的特点,是多种药物活性物质和农药的合成前体.酶法是手性胺的主要合成方法之一,近年来以其高产率、高手性选择性和环境友好等优势成为手性胺研究领域关注的焦点... 详细信息

手性胺化合物广泛存在于自然界各种天然产物中,具有易形成氢键和功能多样性的特点,是多种药物活性物质和农药的合成前体.酶法是手性胺的主要合成方法之一,近年来以其高产率、高手性选择性和环境友好等优势成为手性胺研究领域关注的焦点.文章系统总结了胺脱氢酶在手性胺合成反应中的循环方式,从反应机制和动力学角度阐述了不同类型胺脱氢酶催化合成手性胺的反应特性,并展望了其在工业生产领域的应用前景.

关键词：手性胺胺脱氢酶手性选择性生物合成

胺脱氢酶底物特异性的改造及其在手性胺合成中的应用

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胺脱氢酶底物特异性的改造及其在手性胺合成中的应用

中国生物工程学会第十三届学术年会暨2019年全国生物技术大会

作者：汪东浩郑高伟许建和华东理工大学

手性胺广泛存在与天然活性分子中,也是许多医药中间体和精细化学品的关键结构砌块。使用化学法和酶法的不对称酮胺化反应合成手性胺近年来逐渐成为手性胺合成的研究热点。胺脱氢酶以其可利用无机氨作为氨基供体,水为唯一的副产物等优点... 详细信息

手性胺广泛存在与天然活性分子中,也是许多医药中间体和精细化学品的关键结构砌块。使用化学法和酶法的不对称酮胺化反应合成手性胺近年来逐渐成为手性胺合成的研究热点。胺脱氢酶以其可利用无机氨作为氨基供体,水为唯一的副产物等优点,表现出极高的原子经济性且对环境友好,吸引了大量研究者参与探索。苯丙胺脱氢酶作为胺脱氢酶的一种,在前期的报道中表现出较好的立体选择性、活力和稳定性,但其可催化的底物范围较为受限,仅能较为高效地催化苯基丙酮类化合物,对于较大体积底物则难以实现催化甚至完全不能催化。在本研究中,我们通过生物信息学和蛋白质工程的手段,对已挖掘改造得到的苯丙胺脱氢酶Gk-AmDH进行结构分析,选取影响酶与底物结合催化的潜在关键位点并进行修饰,探究其结构变化与催化功能变化的之间关系,并以此结构功能关系为指导,对目标蛋白的底物结合口袋进行改造,最终获得优良突变体Gk-AmDH-M3。在对其表征后,结果表明其对大体积模式底物苄基丙酮的催化能力相较改造之前提高10倍以上,活力最高可达300mU/mgprotein。在此基础上,我们继续探究了突变体Gk-AmDH-M3可催化的底物范围,以考察改造效果的普适性,结果表明突变体Gk-AmDH-M3对底物苄基丙酮拓展出的各类大体积底物均表现出较好的催化性能,实现了苯丙胺脱氢酶对多种大体积底物催化能力的从无到有的突破,丰富了酶催化合成手性胺的工具箱,为其后续研究和应用提供了良好的基础。

关键词：手性胺胺脱氢酶蛋白质工程底物特异性

来源： cnki会议评论

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分子改造提高胺脱氢酶催化效率研究

分子改造提高胺脱氢酶催化效率研究

作者：曲金丰江南大学

学位级别：硕士

手性胺是诸多药物生产中重要的中间化合物,化学合成存在光学纯度低,污染严重,可催化底物范围小等缺点。胺脱氢酶能够催化酮的不对称还原胺化反应获得光学纯产物,且反应的副产物仅有水,是催化酮的不对称还原胺化生产手性胺最优秀的生物... 详细信息

手性胺是诸多药物生产中重要的中间化合物,化学合成存在光学纯度低,污染严重,可催化底物范围小等缺点。胺脱氢酶能够催化酮的不对称还原胺化反应获得光学纯产物,且反应的副产物仅有水,是催化酮的不对称还原胺化生产手性胺最优秀的生物催化剂。但其较低的活性与有限的可催化底物范围是工业应用中难以突破的桎梏。本研究在课题组前期研究的基础上,使用位点饱和诱变、高通量筛选、迭代饱和突变、复合突变等方法对胺脱氢酶TM＿phe DH进行分子改造,提高了其对苄基丙酮的催化效率及稳定性,并增强了其对其他几种底物的催化活性。主要研究内容如下:(1)对底物结合关键位点Q66与C262周围5?范围内的19个氨基酸残基分别进行单点饱和突变,高通量筛选获得1个具有高酶活力的突变体TM＿phe DH/A62M。纯化后TM＿phe DH/A62M的比酶活力和催化效率常数k值分别提高至TM＿phe DH的1.12和1.16倍,并基于三级结构同源建模解析了酶突变体催化效率提高的机理。采用突变体TM＿phe DH/A62M催化底物苄基丙酮生产产物(R)-1-甲基-3-苯基丙胺,其转化率由TM＿phe DH的95%提高至96%。突变体TM＿phe DH/A62M对其他4种底物的转化率与热稳定性均出现了提升,且产物的光学纯度没有降低。分子动力学模拟计算获得TM＿phe DH/A62M的均方根偏差(RSMD)值和均方根波动(RSMF)值,进一步解析了突变体热稳定性提高的机理。(2)在筛选获得的TM＿phe DH/A62M的基础上,结合前期获得的突变体TM＿phe DH/S189H与TM＿phe DH/V264Q,分别进行了迭代饱和突变与复合突变,得到了4个高活性突变体TM＿phe DH/A62M/S189H/V264I、TM＿phe DH/A62M/S189H/V264Q、TM＿phe DH/S189H/V264I、TM＿phe DH/S189H/V264Q,其比酶活力分别提高至出发酶TM＿phe DH/A62M的1.12倍、1.47倍、1.33倍、1.2倍;这些突变体的k值也分别提高至TM＿phe DH/A62M的1.72倍、2.0倍、1.98倍、1.63倍。各突变体的热稳定性都得到了不同程度的提升,对于对溴苯乙酮、间氯苯乙酮、对氯苯乙酮、2-四氢萘酮等几种底物的胺化转化率也出现了一定的提升,且产物的对映选择性均为(R)型,ee值均>98%。基于酶三级结构建模与分子动力学建模,解析了酶突变体酶活力及稳定性提高的机理。(3)以对溴苯乙酮为底物,针对底物周围5?范围内的19个氨基酸残基分别进行单位点饱和诱变,高通量筛选获得6个具有高酶活力的突变体TM＿phe DH/A62M/M63T/S189H/V264Q、TM＿phe DH/A62M/M67T/S189H/V264Q、TM＿phe DH/A62M/T115D/S189H/V264Q、TM＿phe DH/A62M/G116P/S189H/V264Q、TM＿phe DH/A62M/D118R/S189H/V264Q、TM＿phe DH/A62M/D118L/S189H/V264Q,其对4’-溴苯乙胺的酶活力分别提高至对照TM＿phe DH/A62M/S189H/V264Q的1.76倍、1.21倍、1.14倍、2.49倍、1.64倍、1.07倍。此外,突变体对另外两种苯乙胺卤代物4’-氯苯乙胺、4’-氟苯乙胺的脱氨基反应活性也得到了提升。

关键词：手性胺胺脱氢酶催化效率底物谱热稳定性

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胺脱氢酶催化合成手性胺的机遇与挑战

生物加工过程 2020年第1期18卷 70-79页

作者：陈飞飞汪东浩许建和郑高伟华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室

光学纯的手性胺是一类重要的手性砌块,广泛应用于药物、天然产物、精细化学品等化合物的合成中。手性胺的酶促合成方法因立体选择性高、反应条件温和、反应过程绿色等优点,引起了学术界与工业界的广泛关注。近年来,一类新颖的胺脱氢酶... 详细信息

光学纯的手性胺是一类重要的手性砌块,广泛应用于药物、天然产物、精细化学品等化合物的合成中。手性胺的酶促合成方法因立体选择性高、反应条件温和、反应过程绿色等优点,引起了学术界与工业界的广泛关注。近年来,一类新颖的胺脱氢酶被报道,其能够利用廉价氨作为氨基供体,催化酮的不对称还原胺化,成为一种有潜力的手性胺合成生物催化剂。在胺脱氢酶的发现、分子改造、底物谱拓展、过程强化、多酶级联构建等方面已取得了显著的进展。本文中,笔者对该类酶取得的研究进展进行总结,并预测其未来的研究趋势和应用中面临的机遇与挑战。

关键词：生物催化胺脱氢酶还原胺化手性胺多酶级联反应

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一锅法合成去甲基麻黄素

高等学校化学学报 2021年第8期42卷 2458-2464页

作者：罗磊穆晓清吴涛聂尧徐岩江南大学工业生物技术教育部重点实验室无锡214122 宿迁市江南大学产业技术研究院宿迁223800

以廉价底物苯甲醛、丙酮酸和NH_4Cl为原料,通过级联乙醛羟酸合成酶(ASAHⅠ)催化缩合反应和胺脱氢酶(BbAmDH)催化还原胺化反应,构建了去甲基麻黄素的生物合成新途径.通过优化分步法和一锅法的反应条件,使苯甲醛转化率分别达到99%和83%.... 详细信息

以廉价底物苯甲醛、丙酮酸和NH_4Cl为原料,通过级联乙醛羟酸合成酶(ASAHⅠ)催化缩合反应和胺脱氢酶(BbAmDH)催化还原胺化反应,构建了去甲基麻黄素的生物合成新途径.通过优化分步法和一锅法的反应条件,使苯甲醛转化率分别达到99%和83%.采用一锅法,利用底物补料策略,有效解除了ASAHⅠ的底物和产物抑制作用,批次反应的苯甲醛浓度从40 mmol/L提高到100 mmol/L,苯甲醛转化率从83%提高到90%,苯甲醛的时空转化率提高了2.7倍.

关键词：去甲基麻黄素一锅法生物转化乙醛羟酸合成酶胺脱氢酶