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TSH改变亚临床甲减小鼠胸腺中T细胞发育及TSH在免疫系统中的作用

TSH改变亚临床甲减小鼠胸腺中T细胞发育及TSH在免疫系统中的作用

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作者：吴鲲鹏山东大学

学位级别：硕士

研究背景:促甲状腺素(thyrotropin,TSH)被认为仅仅甲状腺调节。然而,新的证据表明,高血清TSH水平可能存在潜在的有害的影响。高血清TSH水平,是非酒精性脂肪肝病和心血管疾病的独立危险因素,而且往往伴随着慢性炎症、胰岛素抵抗、氧化应... 详细信息

研究背景:促甲状腺素(thyrotropin,TSH)被认为仅仅甲状腺调节。然而,新的证据表明,高血清TSH水平可能存在潜在的有害的影响。高血清TSH水平,是非酒精性脂肪肝病和心血管疾病的独立危险因素,而且往往伴随着慢性炎症、胰岛素抵抗、氧化应激。亚临床甲状腺功能减退症(subclinical hypothyroidism,SCH),是一种临床上较为常见的隐匿性疾病,其特点是甲状腺功能血清学检测表现现为促甲状腺激素水平增高,但游离甲状腺素水平尚正常,是甲状腺机能减退障碍的早期阶段。亚甲减症的发病率呈现逐渐升高的趋势,并对健康有潜在的害影响。SCH在成年人中的患病率约为4-100%。胸腺是重要的中枢免疫器官,是T淋巴细胞离开骨髓后发育的重要场所。胸腺为T淋巴细胞的发育,提供了一个特定的微环境,既胸腺微环境。对胸腺内T细胞发育、分化以及成熟的研究,是当今免疫学研究的重要热门领域。研究表明,T细胞表达促甲状腺激素受体(TSHreceptor,TSH-R),而SCH中胸腺T细胞发育的变化尚未完全阐明。研究目的:本实验旨在阐明亚甲减小鼠模型中,TSH对胸腺T细胞发育的影响,SCH小鼠模型中胸腺的细胞组成情况以及不同发育阶段的T细胞凋亡变化。研究方法:***小鼠模型的构建:应用甲巯基咪唑喂养小鼠,甲巯基咪唑剂量为0.08mg/kg/d,甲巯基咪唑喂养16周时,采用I125标记放射免疫的方法,检测小鼠的血清中游离甲状腺素(FT4)水平,采取Elisa的方法测验小鼠血清TSH水平。通过评估小鼠的血清甲状腺功能,来构建SCH小鼠模型,使其血清检测符合SCH诊断标准,既血清TSH水平升高,甲状腺激素水平无显著变化的,研究TSH对T细胞发育的影响。***小鼠胸腺中不同发育阶段T的免疫学组成分析:应用多色彩流式分析的方法检测小鼠胸腺中T细胞不同发育阶段各T细胞亚群的比例。3.胸腺中不同发育阶段T细胞凋亡比例的测定:应用凋亡试剂盒检测各T细胞亚群细胞凋亡的比例。4.小鼠胸腺内凋亡相关蛋白检测:采取Western Blot法测验胸腺p-ERK/ERK的蛋白水平变化。5.胸腺近期输出功能检测:提取小鼠脾脏DNA,实时定量PCR检测小鼠脾脏T细胞DNA中TREC水平。结果:***小鼠模型的构建:甲巯基咪唑喂养小鼠16周,SCH组小鼠血清FT4测值与对照组小鼠相比,无明显差异性的变化(P>0.05);SCH模型组血清TSH水平明显高于对照组小鼠(P胸腺中不同发育阶段T的免疫学组成分析:SCH小鼠胸腺重量比对照组增加18%。胸腺中CD4 +和CD8 +单阳性(single positive,SP)胸腺细胞分别增加了38%和44%。3.胸腺中不同发育阶段T细胞凋亡比例的测定:通过检测凋亡,我们发现在SCH小鼠胸腺中,Annexin-V+细胞比例减少(p胸腺T细胞凋亡。4.小鼠胸腺内凋亡相关蛋白检测:Western blot结果显示,SCH小鼠胸腺中p-ERK 1/2增加,表明SCH小鼠胸腺组织中ERK通路被激活。5.胸腺近期输出功能检测:PCR检测小鼠脾脏组织T细胞受体切除环(TREC),结果显示,SCH组小鼠脾脏T细胞中TREC增加(p胸腺T细胞发育,增强胸腺近期输出。其机制可能是通过抑制胸腺细胞的凋亡,抗凋亡作用可能是通过p-ERK/ERK信号通路。

关键词： T细胞发育亚临床甲状腺功能减退胸腺近期输出促甲状腺激素

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