检索结果-南通市图书馆

胸腺细胞分化抗原-1DNA甲基化在硫酸铍致人胚肺成纤维细胞纤维化中的作用研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

胸腺细胞分化抗原-1DNA甲基化在硫酸铍致人胚肺成纤维细胞纤维化...

作者：王瑶宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的观察硫酸铍(Be SO4)刺激下人胚肺成纤维细胞(MRC-5)中胸腺细胞分化抗原-1(Thy-1)DNA甲基化改变情况,Thy-1m RNA及蛋白的变化,纤维化相关因子胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ、α-SMA m RNA及蛋白的改变,探讨Thy-1DNA甲基化在Be SO4致肺纤维... 详细信息

目的观察硫酸铍(Be SO4)刺激下人胚肺成纤维细胞(MRC-5)中胸腺细胞分化抗原-1(Thy-1)DNA甲基化改变情况,Thy-1m RNA及蛋白的变化,纤维化相关因子胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ、α-SMA m RNA及蛋白的改变,探讨Thy-1DNA甲基化在Be SO4致肺纤维化中的作用。用甲基化转移酶酶抑制剂5-氮杂胞苷(AZC)干预MRC-5进一步验证Thy-1DNA甲基化变化。使用组蛋白乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA),观察MRC-5中是否同时存在组蛋白乙酰化。同时观察在这两种抑制剂的作用下,纤维相关因子和Thy-1的表达情况。方法建立离体MRC-5培养实验模型,以终浓度分别为1.0、10.0、100.0μmol/L的Be SO4染毒(设为低、中、高剂量组),对照组不作染毒处理;另设AZC干预组,终浓度为10.0μmol/L的硫酸铍和10.0μmol/L AZC混合液处理组(Be SO4+AZC组)和TSA干预组,终浓度为10.0μmol/L的硫酸铍和0.5μmol/L TSA混合液处理组(Be SO4+TSA组)。分别在染毒24、48和72 h后收集细胞,采用实时定量式聚合酶链式反应检测胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Thy-1 m RNA相对表达水平;巢式降落式甲基化特异性聚合酶链式反应检测Thy-1 DNA甲基化水平;蛋白免疫印迹法(western-blot)检测胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ、α-SMA和Thy-1蛋白的相对表达水平。结果***-5细胞中胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ和α-SMA的m RNA的蛋白相对表达水平均呈随染毒剂量增加而增加的趋势(P细胞Thy-1 m RNA和蛋白的相对表达水平均低于对照组(P细胞纤维化的发生,该过程中Thy-1DNA甲基化程度升高,Thy-1m RNA表达水平降低,可能是硫酸铍致肺纤维化的重要机制之一,在该过程中可能同时存在组蛋白乙酰化。

关键词：硫酸铍胸腺细胞分化抗原-1 胶原蛋白 α-平滑肌肌动蛋白肺纤维化 DNA甲基化组蛋白乙酰化人胚肺成纤维细胞

尘肺患者外周血胸腺细胞分化抗原-1 DNA甲基化的改变及意义

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

环境与职业医学 2019年第3期36卷 242-247页

作者：王宇欣周慈王和静王凯张娜车双双刘科良蔺文轩李思睿刘志宏宁夏医科大学公共卫生与管理学院宁夏银川750004

[目的 ]尘肺是严重影响我国职业人群健康的一种发病率较高的职业病。通过检测尘肺患者外周血胸腺细胞分化抗原-1(Thy-1)DNA甲基化水平,旨在探讨其与尘肺发病的关系。[方法 ]对84例确诊为尘肺病的男性患者以及具有相同接尘史且同地点工作... 详细信息

[目的 ]尘肺是严重影响我国职业人群健康的一种发病率较高的职业病。通过检测尘肺患者外周血胸腺细胞分化抗原-1(Thy-1)DNA甲基化水平,旨在探讨其与尘肺发病的关系。[方法 ]对84例确诊为尘肺病的男性患者以及具有相同接尘史且同地点工作的75例健康男性工人进行调查。尘肺患者分为煤工尘肺组(40人)和矽肺组(44人),健康工人作为对照组。在知情同意的情况下收集血液样本进行研究。采用ELISA法检测人胶原蛋白Ⅰ(COL-Ⅰ)、胶原蛋白Ⅱ(ICOL-Ⅲ)、Smad蛋白2/3(Smad2/3)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白的表达,qRT-PCR法检测DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)、DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)及甲基结合蛋白-2(MeCP2)基因mRNA的表达,巢式降落式甲基化特异性PCR法检测Thy-1 DNA甲基化水平。[结果 ]矽肺组工人COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白表达水平高于煤工尘肺组和对照组(P 0.05)。矽肺组工人Smad2/3、TGF-β1、TNF-α,煤工尘肺组工人TGF-β1、TNF-α蛋白表达水平均较对照组提高(P 1蛋白表达水平也高于煤工尘肺组(P 1、DNMT3A基因mRNA表达水平3组间未呈现差异(P> 0.05),但煤工尘肺组、矽肺组DNMT3B基因mRNA表达较对照组升高(P 1 DNA甲基化水平均升高(P 1 DNA甲基化水平与TGF-β1、Smad2/3、TNF-α蛋白表达呈正相关关系(r=0.25、0.17、0.31,均P 1 DNA甲基化的表达检测,本研究认为Thy-1 DNA甲基化水平发生变化,可能是调控尘肺病发展进程中表观遗传学机制之一。

关键词：尘肺胸腺细胞分化抗原-1 DNA甲基化肺纤维化

脂多糖对肺成纤维细胞胸腺细胞分化抗原-1及整合素β3表达的调控并抑制自噬的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

国际麻醉学与复苏杂志 2018年第10期39卷 918-923页

作者：万晗曦谢婷婷徐侨翌胡晓婷邢顺鹏皋源何征宇上海交通大学医学院附属仁济医院重症医学科 200127

目的明确脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）对小鼠肺成纤维细胞胸腺细胞分化抗原-1（thymocyte differentiation antigen-1, Thy-1）和整合素β3蛋白表达的调控作用，并观察其与肺成纤维细胞自噬抑制的关系。方法将原代培养的小鼠... 详细信息

目的明确脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）对小鼠肺成纤维细胞胸腺细胞分化抗原-1（thymocyte differentiation antigen-1, Thy-1）和整合素β3蛋白表达的调控作用，并观察其与肺成纤维细胞自噬抑制的关系。方法将原代培养的小鼠肺成纤维细胞采用随机数字法分为4组（每组3孔）：PBS对照组（Con组）、0.25 mg/L LPS组（LPS0.25组）、0.50 mg/L LPS组（LPS0.50组）、1.00 mg/L LPS组（LPS1.00组），随后以不同浓度LPS（0.25、0.50、1.00 mg/L）刺激，于刺激后6 h通过Western blot检测不同浓度LPS刺激小鼠肺成纤维细胞后Thy-1和整合素β3蛋白的表达情况。于刺激后30 h比较肺成纤维细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1的表达情况，同时通过透射电子显微镜观察细胞内自噬小体形成情况。结果随着LPS刺激浓度的增加，小鼠肺成纤维细胞的Thy-1蛋白表达量下降，其中LPS1.00组较Con组有明显下降（P〈0.05）；整合素β3蛋白表达量升高，其中LPS1.00组较Con组有明显升高（P〈0.05）。LPS1.00组刺激小鼠肺成纤维细胞30 h后明显抑制其自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1的表达（P〈0.05），并抑制自噬小体形成（P〈0.05）。结论 LPS可下调Thy？蛳1蛋白表达、上调整合素β3蛋白表达，同时抑制自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1的表达及自噬小体的生成，该过程可能与LPS诱导肺成纤维细胞自噬抑制以及肺纤维化进展有关。

关键词：脂多糖肺成纤维细胞自噬胸腺细胞分化抗原-1 整合素β3

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国免疫学杂志 2018年第7期34卷 996-1000页

作者：修乘波吴刚孙培春朱元增银平章河南省新野市人民医院普外科新野473500 河南省人民医院普外科郑州450000 河南省人民医院病理科郑州450000

目的:探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)在调控胃癌细胞发生上皮间质转化(EMT)及迁移能力中的作用。方法:培养胃癌细胞系(SNU-1和MKN45)和原代成纤维细胞,分离和鉴定原代成纤维细胞;Western blot和实时定量PCR技术检测细胞内胸腺细胞分化抗... 详细信息

目的:探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)在调控胃癌细胞发生上皮间质转化(EMT)及迁移能力中的作用。方法:培养胃癌细胞系(SNU-1和MKN45)和原代成纤维细胞,分离和鉴定原代成纤维细胞;Western blot和实时定量PCR技术检测细胞内胸腺细胞分化抗原(Thy-1)的表达情况;并且建立胃癌细胞和CAFs共培养体系,将细胞分为胃癌细胞组、共培养体系组(空白对照组)、共培养体系+同型Ig G抗体组(阴性对照组)、共培养体系+抗Thy-1抗体组。Transwell实验检测Thy-1对共培养体系中胃癌细胞的迁移能力的影响;Western blot技术检测Thy-1对共培养体系胃癌细胞株的上皮(E-cad)及间质(N-cad和ZEB2)表型标记蛋白表达的影响。结果:成功分离CAFs,与正常成纤维细胞的形态并无明显差异,均出现纺锤形态,发现CAFs中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达比配对NFs细胞的表达量显著增加,提示分离出的CAFs可以作为后续相关实验研究;Western blot和实时定量PCR技术检测提示,CAFs中Thy-1的mRNA和蛋白质高表达,这与配对的NFs相比具有明显的统计学意义,且Thy-1在胃癌细胞系中低表达;CAFs与胃癌细胞共培养后,与胃癌细胞组相比,胃癌细胞系的迁移能力明显增强,且E-cad的表达显著降低,N-cad和ZEB2的表达明显升高,但共培养体系中CAFs预先孵育Thy-1抗体后,发现与阴性对照组相比,胃癌细胞系的迁移能力和EMT效应明显减弱。结论:CAFs细胞内过表达的Thy-1增强体外共培养体系中胃癌细胞的迁移能力和EMT效应。

关键词：肿瘤相关成纤维细胞胸腺细胞分化抗原-1 上皮间质转化胃癌

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

氧化铍致大鼠肺纤维化的实验研究

氧化铍致大鼠肺纤维化的实验研究

作者：王凯宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的本研究以BeO为染毒物质,复制大鼠肺纤维化动物模型,通过检测实验动物染毒Thy-1、TGFβ-smad2/3信号通路蛋白的表达,探讨Thy-1、TGFβ1-smad2/3信号通路在铍致肺纤维化中的意义,为后续研究提供依据。方法64只SPF级健康雄性SD大鼠,随... 详细信息

目的本研究以BeO为染毒物质,复制大鼠肺纤维化动物模型,通过检测实验动物染毒Thy-1、TGFβ-smad2/3信号通路蛋白的表达,探讨Thy-1、TGFβ1-smad2/3信号通路在铍致肺纤维化中的意义,为后续研究提供依据。方法64只SPF级健康雄性SD大鼠,随机分为阴性对照组(32只)、BeO染毒组(32只)。氧化铍组气管灌注BeO混悬液0.5ml,阴性对照组注入等量的无菌生理盐水,处死时间为染毒后20、40、60和80 d四个时间点取材,分别进行以下实验:1.取肺组织,制作石蜡切片并进行HE、Masson和免疫组化染色,同时制作电镜切片。2.实时定量PCR(RT-PCR)法检测COL-I,COL-III和α-SMA的基因表达水平。3.蛋白质印迹法(western-blot)检测各组肺组织中COL-I,CLOL-III和α-SMA的蛋白水平。4.取肺组织制备肺组织匀浆,酶联免疫法(ELISA)检测Thy-1、TGFβ1、smad2、smad3、p-smad2、p-smad3的蛋白表达。结果1鼠肺组织解剖学形态和病理学的改变:大体观察结果显示:阴性对照组肺呈粉红色,光滑质软。BeO染毒后,随染毒时间延长肺部损伤进行性加重,逐渐出现充血、体积增大、局部白色粟粒状结节等,最终可见全肺结节及萎缩等。HE染色显示:BeO染毒后20、40 d主要病理改变以炎性细胞浸润为主,肺泡隔增厚;染毒后60、80 d肺泡腔缩小,部分肺泡结构消失和结构紊乱,局部可见纤维化结节且可见BeO粉尘颗粒,局部发生肺组织实变。Masson染色显示:BeO染毒后支气管及肺泡间隔可见蓝色胶原沉积随着时间的延长蓝色胶原沉积明显增加。电镜结果显示:BeO染毒20d和40d后呈现肺泡Ⅱ型上皮细胞胞浆嗜锇小体排空;60d和80d后肺泡Ⅱ型上皮细胞胞浆嗜锇小体嗜锇小体致密,肺间质可见纤维束存在。***染毒组COL-I mRNA和蛋白表达升高(P1表达升高(P1随着时间延长而增加(P1表达降低,随着时间延长而降低(P1)一次性非暴露式气管内灌注质量浓度为10 g/L的BeO溶液0.5 mL可成功制备铍化合物致SD大鼠肺纤维化模型。(2)BeO可引起肺组织中细胞外基质成分的沉积和成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞。(3)BeO诱导肺纤维化过程中TGFβ1-smad2/3信号通路被激活,TGFβ1-smad2/3信号通路参与肺纤维化的形成与发展。(4)BeO致肺纤维化过程中Thy-1的表达降低,导致天然的TGFβ1被激活。

关键词：慢性铍病氧化铍肺纤维化 TGFβ1-smad2/3信号通路胸腺细胞分化抗原-1

LPS诱导肺成纤维细胞自噬抑制及肺纤维化的机制研究

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

LPS诱导肺成纤维细胞自噬抑制及肺纤维化的机制研究

作者：万晗曦上海交通大学

学位级别：硕士

背景脂多糖是脓毒症和脓毒症相关性肺纤维化的重要致病因素,对LPS诱导肺纤维化发病机制的深入研究始终是重症医学领域的重要研究方向,但其相关机制目前尚未阐明。本研究采用LPS诱导肺成纤维细胞自噬、肺纤维化模型深入研究Thy-1表达缺... 详细信息

背景脂多糖是脓毒症和脓毒症相关性肺纤维化的重要致病因素,对LPS诱导肺纤维化发病机制的深入研究始终是重症医学领域的重要研究方向,但其相关机制目前尚未阐明。本研究采用LPS诱导肺成纤维细胞自噬、肺纤维化模型深入研究Thy-1表达缺失、整合素β3表达上调对肺成纤维细胞自噬的保护作用及机制。方法1.第一部分:应用LPS刺激小鼠肺成纤维细胞,通过Western Blot技术检测Thy-1、整合素β3、自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的表达,透射电子显微镜检测自噬小体。2.第二部分:采用抑制剂和siRNA抑制整合素β3、siRNA或过表达慢病毒抑制或过表达Thy-1,Western Blot检测LPS刺激后细胞内Thy-1、整合素β3、PI3K-Akt-m TOR信号通路关键分子、自噬相关蛋白的表达,透射电子显微镜技术检测自噬小体。应用LPS多次打击的方法构建小鼠肺纤维化模型,肺组织切片行HE和Masson染色以及α-SMA的免疫组织化学染色;Western Blot检测肺组织Thy-1、整合素β3、LC3、P62和α-SMA蛋白表达;检测肺组织羟脯氨酸和I型胶原蛋白含量。经气管内注射Thy-1过表达腺相关病毒或腹腔内预注射整合素β3抑制剂西仑吉肽,继之按前述方法建立肺纤维化模型,比较以上各指标的变化情况。结果1.第一部分:LPS刺激后引起Thy-1表达下降、整合素β3表达增加、自噬相关蛋白Beclin-1和LC3-II/I表达下降以及细胞内自噬小体数量减少。2.第二部分:细胞实验证实抑制整合素β3、过表达Thy-1均能逆转LPS诱导的PI3K-Akt-m TOR通路活化及自噬抑制;在LPS缺失的情况下,抑制Thy-1能模拟LPS刺激所诱导的PI3K-Akt-m TOR通路活化及自噬抑制的相关效应。动物实验证实LPS多次打击能引起小鼠肺纤维化,伴随着小鼠肺组织Thy-1表达下调、整合素β3表达增高和自噬抑制;经气管内注射Thy-1过表达AAV或腹腔内预注射剂西仑吉肽均能逆转LPS诱导的小鼠肺纤维化、Thy-1表达下调、整合素β3表达增高和自噬抑制过程。结论LPS能抑制肺成纤维细胞自噬并引起肺纤维化,LPS通过诱导Thy-1表达缺失和整合素β3表达上调而活化PI3K-Akt-m TOR通路,抑制肺成纤维细胞自噬并促进肺纤维化进程。

关键词：肺成纤维细胞细胞自噬脂多糖胸腺细胞分化抗原-1 整合素β3 肺纤维化