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胸腺素β4对体外培养的兔角膜上皮细胞氧化损伤的保护作用

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中华眼科杂志 2013年第8期49卷 716-722页

作者：李轩姜志昕郝朋汤欣天津市眼科医院、天津市眼科学与视觉科学重点实验室、天津市眼科研究所、天津医科大学眼科临床学院

目的探讨胸腺素B4（Tβ4）对体外培养的兔角膜上皮细胞氧化损伤的影响。方法实验研究。采用组织块培养法获得原代兔角膜上皮细胞并进行传代培养。采用形态学观察和逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测成熟角蛋白（keratin）12和缝隙连... 详细信息

目的探讨胸腺素B4（Tβ4）对体外培养的兔角膜上皮细胞氧化损伤的影响。方法实验研究。采用组织块培养法获得原代兔角膜上皮细胞并进行传代培养。采用形态学观察和逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测成熟角蛋白（keratin）12和缝隙连接蛋白（connexin）43的表达情况，对细胞进行鉴定。以H_20_2处理角膜上皮细胞制备体外细胞氧化损伤模型，并观测Tβ4对其保护作用。实验分为4组：正常对照组、Tβ4组、H20：组和H_2O_2＋Tβ4组。采用MTF比色法检测角膜上皮细胞存活度；运用TUNEL染色观察角膜上皮细胞凋亡；利用DCFH—DA荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）水平；通过划痕实验观察角膜上皮细胞的迁移运动能力。组间均数比较采用方差分析，进一步两两比较采用LSD—t检验。结果培养的细胞呈圆形、卵圆形和多边形，铺路石样生长；RT—PCR法检测显示培养的细胞表达角膜上皮细胞特异性基因，keratin12和connexin43，呈现角膜上皮细胞的特征。经H_2O_2刺激后，角膜上皮细胞的存活率（67．20％±5．87％）较正常对照组显著下降（100．00％±9．99％）（4个组间比较F=18．61，P=0．001，两两比较P=0．000）；H202＋Tβ4组细胞存活率（83．42％±7．43％）与H202组（67．20％±5．87％）比较明显增高（P=0．023）。4个组间细胞划痕实验结果的差异具有统计学意义（F=36．38，P=0．000），在12hTβ4组划痕已基本消失，细胞迁移率为117．6％±2．22％，与正常对照组（100．00％±4．06％）相比显著增加（P=0．005）；12h时H_20_2＋Tβ4组与H202组相比，细胞迁移率为96．57％±8．22％，与H202组（64．38％±11．08％）相比明显增加（P=0．000）。H202刺激后细胞内ROS水平为234．42％±22．15％，较正常对照组（100．00％±5．28％）明显增加（P=0．000），H_20_2＋Tβ4组细胞内ROS水平（163．26％±10．53％）虽然较正常对照组偏高，但与H_20_2组（234．42％±22．15％）比较显著降低（P=0．000）。TUNEL染色结果显示，H_2O_2组呈现较多凋亡细胞，H_2O_2＋Tβ4组与H_20_2组相比，凋亡细胞明显减少。结论Tβ4通过抑制氧化损伤后细胞内ROS的产生对氧化应激损伤后的角膜上皮细胞具有减少细胞凋亡，增加细胞存活率并促进细胞迁移的作用，提示Tβ4对角膜上皮细胞氧化损伤具有保护作用。

关键词：上皮,角膜上皮细胞胸腺素氧化性应激细胞凋亡细胞,培养的

胸腺素β4对乙醇诱导的体外兔角膜上皮细胞损伤的保护作用

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中华实验眼科杂志 2016年第2期34卷 108-114页

作者：姜志昕郝朋汤欣李轩天津市眼科医院天津市眼科学与视觉科学重点实验室天津市眼科研究所天津医科大学眼科临床学院 300020

背景准分子激光角膜上皮瓣下磨镶术（LASEK）是目前主要的屈光矫正术式之一，但术中使用的乙醇可引起角膜上皮的损伤。胸腺素β4（Tβ4）具有抗凋亡等多种生物学作用，但其对乙醇所致的角膜上皮细胞损伤是否具有保护作用尚不清楚。目的... 详细信息

背景准分子激光角膜上皮瓣下磨镶术（LASEK）是目前主要的屈光矫正术式之一，但术中使用的乙醇可引起角膜上皮的损伤。胸腺素β4（Tβ4）具有抗凋亡等多种生物学作用，但其对乙醇所致的角膜上皮细胞损伤是否具有保护作用尚不清楚。目的研究T[34对乙醇诱导的角膜上皮细胞损伤是否具有预防作用。方法收集10只健康成年新西兰白兔的角膜，采用组织块培养法获得兔原代角膜上皮细胞传代，逆转录PCR（RT—PCR）法检测缝隙连接蛋白COilnexin 43和成熟角蛋白keratin 12的表达情况，对细胞进行鉴定。选取第2代处于对数生长期的细胞均衡分为4个组，正常对照组细胞进行常规培养，Tβ4组细胞在培养液中添加终浓度为1μg／ml的Tβ4，乙醇组细胞用含体积分数20％乙醇的PBS作用20s以制备角膜上皮细胞损伤模型，乙醇＋Tβ4组在损伤模型培养液中加入Tβ4。采用MTT法检测各组角膜上皮细胞存活率；采用TUNEL法观察角膜上皮细胞的凋亡情况；采用实时荧光定量PCR法检测各组角膜上皮细胞中细胞周期蛋白D1（CyclinD1）和细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）mRNA的相对表达量；应用ELISA法检测各组角膜上皮细胞中bcl-2蛋白的质量浓度；用分光光度法检测细胞裂解液中caspase-3酶活性。结果MTT法结果显示，正常对照组细胞存活率设定为100％，乙醇组细胞存活率为（52．1±14．07）％，明显低于正常对照组，差异有统计学意义（P=0．001）；乙醇＋TB4组细胞存活率为（77．7±19．60）％，明显高于乙醇组，差异有统计学意义（P=0．035）。TUNEL染色显示，乙醇组和乙醇＋Tβ4组均可见明显的TUNEL阳性染色细胞，乙醇＋Tβ4组阳性细胞百分比为（30．0±6．7）％，明显低于乙醇组的（42．4±4．0）％，差异有统计学意义（P=0．01）。实时定量PCR显示，乙醇＋Tβ4组细胞中Cyclin D1 mRNA和CDK4 mRNA的相对表达量分别为0．93±0．17和0．88±0．09，均明显高于乙醇组的0．68±0．05和0．54±0．07，差异均有统计学意义（P=0．027、0．002）。ELISA显示，乙醇组细胞中bcl-2蛋白质量浓度明显低于乙醇＋Tβ4组，而caspase-3酶活性则高于乙醇＋Tβ4组，差异均有统计学意义（P=0．030、0．021）。结论Tβ4对乙醇诱导的角膜上皮细胞损伤具有保护作用，其作用机制可能是通过降低角膜上皮细胞中caspase-3酶活性和增加bcl-2蛋白质量浓度来阻止乙醇所致的细胞凋亡；Tβ4也可上调角膜上皮细胞中Cyclin D1及CDK4的表达，以调控细胞分裂和增生，促进角膜上皮损伤的愈合。

关键词：角膜上皮/药物影响乙醇相关异常胸腺素细胞生存/药物影响凋亡/药物影响细胞培养动物,兔

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从猪胸腺提取胸腺素1的工艺

清华大学学报（自然科学版） 2008年第6期48卷 1062-1064页

作者：邹和昌蔡文李海龙顾益孟凡国清华大学生物科学与技术系北京100084 浙江嘉信医药股份有限公司嘉兴314001 浙江清华长三角研究院嘉兴314050

为了提高猪胸腺的利用价值,探索猪胸腺素活性物质的提取工艺。选取猪胸腺为原料,采用匀浆、凝胶过滤、离子交换层析和丙酮分级沉淀的方法纯化胸腺素α1,并用Bradford法检测蛋白含量,用SDS-PAGE电泳测定蛋白纯度。将猪胸腺组织匀浆、三... 详细信息

为了提高猪胸腺的利用价值,探索猪胸腺素活性物质的提取工艺。选取猪胸腺为原料,采用匀浆、凝胶过滤、离子交换层析和丙酮分级沉淀的方法纯化胸腺素α1,并用Bradford法检测蛋白含量,用SDS-PAGE电泳测定蛋白纯度。将猪胸腺组织匀浆、三次冻融和80℃热变性纯化后,上清采用Sephadex G-50柱填料凝胶过滤,然后进行阴离子交换树脂DEAE-C32离子交换层析和丙酮分级沉淀,通过真空冷冻干燥,最后得到胸腺素α1,纯度为95%以上,得率为3.84×10-5。最终得到提取胸腺素α1的有效工艺。

关键词：胸腺素离子交换层析胸腺素α1

胸腺素β4促进创伤愈合过程中对多种生长因子及新生细胞迁移的作用

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第11期12卷 2143-2147页

作者：李艳王冠于虎杨小凡车永哲许松山聂李亚南开大学医学院天津市300071 北京诺思兰德生物技术有限责任公司北京市100085

学术背景:近年来,胸腺素β4的促进创伤愈合作用受到关注。最近的研究发现,在心肌、角膜和皮肤的创伤愈合过程中,胸腺素β4主要是作为一种化学诱导因子,调节多种生长因子的表达以及趋化新生细胞的迁移。目的:阐述胸腺素β4的生物学性质... 详细信息

学术背景:近年来,胸腺素β4的促进创伤愈合作用受到关注。最近的研究发现,在心肌、角膜和皮肤的创伤愈合过程中,胸腺素β4主要是作为一种化学诱导因子,调节多种生长因子的表达以及趋化新生细胞的迁移。目的:阐述胸腺素β4的生物学性质及创伤愈合的机制,并重点就胸腺素β4促进皮肤创伤愈合的作用及机制进行分析。检索策略:文章作者应用计算机检索Medline1980-01/2007-08有关胸腺素β4促进创伤愈合机制的文章,检索词为"thymosinβ4,skin wound healing,myocardium wound healing,cornea wound healing",限定文章语言种类为English。同时检索中国期刊全文数据库2000-01/2007-08有关胸腺素β4促进创伤愈合机制的文章,检索词为"胸腺素,皮肤创伤愈合,心肌修复,角膜修复",并限定文章语言种类为中文。初检得到660篇文献,全部为机检。文献评价:阅读标题和摘要对660篇文献进行初筛,排除研究目的与本课题无关及内容重复性研究,保留218篇中英文文献进一步分析,其中55篇综述类文献,163篇研究论文。按纳入标准筛选,共126篇文章满足全部纳入标准,予以纳入。其中23篇文献研究了胸腺素β4的生物学特性,51篇研究了胸腺素β4与皮肤愈合的问题,33篇研究了胸腺素β4与心肌损伤修复的问题,19篇研究了胸腺素β4与角膜修复的问题。资料综合:由于机体自身修复愈合的能力极其有限,一旦发生损伤或者病变很难自愈,甚至导致溃疡或瘢痕形成,多需要外缘性修复或启动内源性修复,但目前尚未发现有效的促进创伤愈合的药物。近年来,胸腺素β4促进创伤愈合的作用受到关注,为创伤愈合药物的研究提供了一个新方向。结论:虽然有很多研究证实胸腺素β4在创伤愈合过程中有重要作用,但是具体作用机制尚未完全明了。目前,人工合成的胸腺素β4已用于大量实验,以探讨其在创伤愈合中的作用和机制,结果显示胸腺素β4很有可能成为促进创伤愈合,尤其是糖尿病溃疡、免疫功能低下慢性损伤的新的治疗药物。

关键词：胸腺素伤口愈合皮肤角膜心脏

胸腺素β4对大鼠皮质神经细胞氧糖剥夺-复氧损伤的保护作用研究

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中国脑血管病杂志 2019年第6期16卷 296-302页

作者：张忠胜刘双凤黄四春广州医科大学附属第六医院(清远市人民医院)神经内科

目的研究胸腺素β4对体外培养大鼠皮质神经细胞氧糖剥夺-复氧(OGD/R)损伤的保护作用及其机制。方法分离并鉴定原代培养的皮质神经细胞,通过OGD/R法建立皮质神经细胞模拟缺血-再灌注损伤模型(氧糖剥夺6h,复氧12h)。实验分为对照组、模型... 详细信息

目的研究胸腺素β4对体外培养大鼠皮质神经细胞氧糖剥夺-复氧(OGD/R)损伤的保护作用及其机制。方法分离并鉴定原代培养的皮质神经细胞,通过OGD/R法建立皮质神经细胞模拟缺血-再灌注损伤模型(氧糖剥夺6h,复氧12h)。实验分为对照组、模型组、治疗组(建模前2h加入胸腺素β4)。CCK8法确定胸腺素β4的最佳作用浓度,流式细胞术和末端脱氧核苷酸转移酶脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,Western blotting检测78000葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bax的表达水平并进行组间比较。应用SPSS19.0软件分析处理数据,正态分布的计量资料3组间比较采用单因素方差分析。结果大鼠皮质神经细胞被正确分离。胸腺素β4最佳作用浓度为10μg/L。与对照组比较,模型组皮质神经细胞存活率明显下降(P=0.002),细胞凋亡率明显增加(P胸腺素β4)细胞活力明显增高(P=0.008),细胞凋亡率明显降低(P=0.002),GRP78、CHOP、Bax表达水平明显下降(P值分别为0.032、0.027、0.019),Bcl-2表达水平明显升高(P=0.028),差异均有统计学意义。结论胸腺素β4能抑制OGD/R诱导的内质网应激依赖性细胞凋亡,为胸腺素β4在脑缺血-再灌注损伤治疗中的应用提供了理论依据。

关键词：胸腺素细胞凋亡胸腺素β4 皮质神经元内质网应激

胸腺素及干扰素基因表达对乙型肝炎基因疫苗的免疫增强效应

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中华肝脏病杂志 2005年第7期13卷 497-500页

作者：周陶友赵连三陈敏陈守春王松刘丽唐红四川大学华西医院感染性疾病中心生物治疗国家重点实验室成都610041 成都地奥集团药物研究所深圳市东湖医院

目的观察胸腺素及干扰素基因表达对乙型肝炎基因疫苗pVAX1-S2S的免疫增强效应。方法从乙型肝炎患者血清中扩增S2S基因,构建表达质粒pVAX1-S2S。从成人外周血白细胞总RNA中,逆转录聚合酶链反应扩增干扰素α基因Ⅰ,将其与S2S相连接,构建... 详细信息

目的观察胸腺素及干扰素基因表达对乙型肝炎基因疫苗pVAX1-S2S的免疫增强效应。方法从乙型肝炎患者血清中扩增S2S基因,构建表达质粒pVAX1-S2S。从成人外周血白细胞总RNA中,逆转录聚合酶链反应扩增干扰素α基因Ⅰ,将其与S2S相连接,构建重组表达质粒pVAX1-I/S2S;将干扰索α基因Ⅰ与人工合成的胸腺素α基因T相连接,构建重组表达质粒pVAX1-T/I。将上述表达质粒分组肌肉接种BALB/c小鼠:单独免疫组接种pVAX1-S2S 100 μg;联合免疫组1:接种pVAX1-I/S2S 100 μg;联合免疫组2:每只小鼠同时接种pVAX1-T/I与pVAX1-S2S各50 μg。上述各组于2、4周后分别加强免疫1次。然后动态检测小鼠血清抗-HBs和前S2抗体。结果接种后3、5、8周,小鼠血清抗-HBs阳转率:联合免疫组1分别为12.5%、12.5%、62.5%;联合免疫组2分别为25%、50%、50%,二者总体上均优于pVAX1- S2S单独免疫组。联合免疫组2的前S2抗体水平则高于其它两组。结论胸腺素α1和(或)干扰素α8 基因的表达具有分子免疫佐剂的效应,能够增强乙型肝炎基因疫苗的特异性体液免疫诱生效力。

关键词：胸腺素干扰素基因表达乙型肝炎基因疫苗免疫增强 DNA 肝炎病毒免疫应答

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胸腺素与肿瘤

中华病理学杂志 2001年第3期30卷 227-228页

作者：关有彦周伟炜邱雪杉中国医科大学第二临床医院学生科 110003 中国医科大学病理学教研室

胸腺素最早是从牛胸腺中提取出来的一类蛋白质[1],当时被认为是一类胸腺激素,后来发现它们普遍存在于各种组织细胞当中.国内对于胸腺素的研究很少,而且多停留在α族胸腺素的治疗作用.近年来,许多国外学者发现胸腺素在肿瘤细胞中高表达,... 详细信息

胸腺素最早是从牛胸腺中提取出来的一类蛋白质[1],当时被认为是一类胸腺激素,后来发现它们普遍存在于各种组织细胞当中.国内对于胸腺素的研究很少,而且多停留在α族胸腺素的治疗作用.近年来,许多国外学者发现胸腺素在肿瘤细胞中高表达,并且与肿瘤的发生、发展密切相关,认为胸腺素将成为又一评估肿瘤的重要参考指标.了解胸腺素的生物学作用,尤其是在肿瘤组织中的情况,将有助于我们了解肿瘤的发病机制.

关键词：肿瘤发病机制胸腺素结构生物学功能

胸腺素β4对肾小管间质纤维化大鼠转化生长因子β／结缔组织生长因子的影响

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中华肾脏病杂志 2016年第3期32卷 206-211页

作者：袁静沈燕谢莹杨霞林鑫田茂露查艳贵州省人民医院肾脏泌尿疾病研究所贵阳550002

目的探讨两种剂量胸腺素p4（thymosinp4，Tp4）对肾小管问质纤维化大鼠转化生长因子β（TGF—β）和结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响，并进一步评估各组肾小管问质损伤和肾功能。方法应用单侧输尿管梗阻（UUO）手术建立大鼠模型。... 详细信息

目的探讨两种剂量胸腺素p4（thymosinp4，Tp4）对肾小管问质纤维化大鼠转化生长因子β（TGF—β）和结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响，并进一步评估各组肾小管问质损伤和肾功能。方法应用单侧输尿管梗阻（UUO）手术建立大鼠模型。将健康成年的雄性SD大鼠随机分为4组，每组15只：假手术组（Sham组）、UUO模型组、低剂量组（UUO术后给予lmg／LTp4治疗）、高剂量组（UUO术后给予5mg／LTp4治疗）。模型组和Sham组术后给予等量生理盐水灌胃。观察术后第2周各组肾功能（24h尿蛋白量、尿素氮和血肌酐）和肾组织病理学改变，应用原位杂交和Western印迹分别检测肾小管间质中TGF—β、CTGF的mRNA和蛋白表达。结果与Sham组比较，模型组肾组织有高水平TGF-β、CTGFmRNA及蛋白表达均降低（均P〈0．01）；与模型组比较，两TS4组TGF—β和CTGF的mRNA、蛋白表达（均P〈0．01），高剂量组比低剂量组下降更明显（P〈0．05）。且TGF-β mRNA表达与CTGFmRNA表达呈正相关（r=0．697，P〈0．01）。模型组大鼠24h尿蛋白量及肾小管间质损伤面积比Sham组明显增加；TB4能改善这种肾脏损害，TIM组24h尿蛋白量及肾小管间质损伤面积均低于模型组，而且高剂量组比低剂量组的效果更显著（均P〈0．05）。各组血肌酐及血尿素氮差异无统计学意义。结论TB4可能以剂量依赖的方式抑制肾问质纤维化大鼠肾脏TGF-β／CTGF表达，从而发挥肾脏保护作用。

关键词：胸腺素转化生长因子β 细胞外基质蛋白质类纤维化

胸腺素β4介导牵张成骨区骨生成的作用及机制研究

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中华创伤骨科杂志 2016年第9期18卷 791-797页

作者：陈红浩贾亚超康庆林梁川柴益民上海交通大学附属第六人民医院 200233

目的探讨胸腺素B4对大鼠牵张成骨区骨生成的作用及机制。方法将60只SD大鼠随机分为A、B、C3组。分别于左股骨行截骨术外固定建立牵张成骨模型，牵张期结束时A组不予处理，B组于牵张成骨区注射磷酸盐缓冲液，C组于牵张成骨区注射等量胸腺... 详细信息

目的探讨胸腺素B4对大鼠牵张成骨区骨生成的作用及机制。方法将60只SD大鼠随机分为A、B、C3组。分别于左股骨行截骨术外固定建立牵张成骨模型，牵张期结束时A组不予处理，B组于牵张成骨区注射磷酸盐缓冲液，C组于牵张成骨区注射等量胸腺素B4。术后第22、29、43天分别处死大鼠，取材行X线、Micr-CT、HE染色、免疫组化染色检测牵张成骨区的骨生成情况，逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测相关基因的转录水平。结果X线检测显示C组术后第22、29、43天成骨优于A、B组。Micro-CT检测显示C组术后第22、29、43天取材标本骨体积、骨矿化密度、骨体积分数高于A、B组，C组术后第43天骨表面体积分数小于A、B组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。HE染色显示C组局部毛细血管密度明显高于A、B组。免疫组化染色显示c组成骨区毛细血管密度增多以及成骨细胞在截骨断端募集，均高于A、B组。RT—PCR检测C组第22天内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、OsterixmRNA的转录水平高于A、B组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论在牵张成骨区局部应用外源性胸腺素B4可促进成骨区新生血管形成与骨生成，可能与牵张成骨区eNOS、Osterix的表达增高有关。

关键词：胸腺素骨延长术骨生成牵张外固定器