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哮喘小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素及其受体的表达以及布地奈德、卡介苗干预的影响

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哮喘小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素及其受体的表达以及布地奈德、卡...

作者：王淑丽苏州大学

学位级别：硕士

目的:观察哮喘小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)及其受体(TSLPR)的表达以及布地奈德混悬液(BUD)、卡介苗(BCG)干预对其表达的影响,探讨TSLP、TSLPR与哮喘的关系,为哮喘的防治提供新的思路。方法:1.40只雌性昆明小鼠随机分成4组:哮喘组... 详细信息

目的:观察哮喘小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)及其受体(TSLPR)的表达以及布地奈德混悬液(BUD)、卡介苗(BCG)干预对其表达的影响,探讨TSLP、TSLPR与哮喘的关系,为哮喘的防治提供新的思路。方法:1.40只雌性昆明小鼠随机分成4组:哮喘组、BUD干预组、BCG干预组、正常对照组,每组10只。2.哮喘组:昆明小鼠于第1、7、14天分别腹腔内注射0.01%OVA和10%氢氧化铝混悬液0.2ml进行致敏,第21天起,雾化吸入2%OVA生理盐水溶液5ml进行激发,每天1次,每次30分钟,连续7天。***干预组:致敏和激发方法同哮喘组,在雾化吸入OVA前1h予以BUD生理盐水溶液5ml(含BUDlmg)雾化吸入20～30min。***干预组:致敏和激发方法同哮喘组,于OVA致敏前5d、3d、1d分别以BCG0.025mg皮内注射干预。5.正常对照组:昆明小鼠以生理盐水代替OVA致敏、激发。6.末次激发24h后收集肺泡灌洗液(BALF)、外周血、肺组织及脾组织。肺组织切片行HE染色观察病理改变,并用免疫组织化学方法判断肺组织TSLP、TSLPR的表达。酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定BALF中IL-4、肺组织和脾组织中TSLP和TSLPR以及血清TSLP的表达。实时荧光定量PCR法检测肺组织中TSLP mRNA和TSLPR mRNA的表达。结果:1.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠肺组织TSLP阳性细胞的平均光密度分别为(0.277±0.009)、(0.064±0.015)、(0.160±0.009)、(0.004±0.001)。四组间存在显著差异(P＜0.01)。哮喘组明显高于正常对照组(P＜0.01);BUD干预组和BCG干预组明显低于哮喘组(P＜0.01):BUD干预组和BCG干预组明显高于正常组(P＜0.01);BUD干预组明显低于BCG干预组(P＜0.01)。2.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠肺组织TSLPR阳性细胞的的平均光密度分别为(0.413±0.030)、(0.040±0.004)、(0.168±0.008)、(0.006±0.001)。结果与肺组织TSLP阳性细胞的平均光密度比较结果相似。3.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠BALF中IL-4的表达水平分别为(244.200±4.601)pg/ml、(220.600±3.034)pg/ml、(224.900±2.930)pg/ml、(219.200±2.480)pg/ml。四组间存在显著差异(P＜0.01)。哮喘组明显高于正常对照组(P＜0.01);BUD干预组和BCG干预组明显低于哮喘组(P＜0.01);BUD干预组和BCG干预组虽高于正常对照组,但差别无统计学意义(P＞0.05);BUD干预组与BCG干预组比较,差别无统计学意义(P＞0.05)。4.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠肺组织TSLP的表达水平分别为(4.221±0.115)ng/ml、(3.899±0.071)ng/ml、(3.8980±0.046)ng/ml、(3.621±0.129)ng/ml。结果与BALF中IL-4比较结果相似。5.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠肺组织TSLPR的表达水平分别为(17.160±0.157)ng/ml、(16.460±0.209)ng/ml、(15.740±0.273)ng/ml、(15.860±0.285)ng/ml。结果与BALF中IL-4比较结果相似。6.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠脾组织TSLP的表达水平分别为(5.467±0.074)ng/ml、(5.096±0.077)ng/ml、(5.101±0.161)g/ml、(4.975±0.073)ng/ml。结果与BALF中IL-4比较结果相似。7.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠脾组织TSLPR的表达水平分别为(20.901±0.421)ng/ml、(18.280±0.159)ng/ml、(18.840±0.273)ng/ml、(17.930±0.156)ng/ml。四组间存在显著差异(P＜0.01)。BCG干预组明显高于正常对照组(P＜0.05)。其余结果与BALF中IL-4比较结果相似。8.哮喘组、BUD干预组、BCG干预组及正常对照组小鼠血清TSLP的表达水平分别为(1.611±0.204)ng/ml、(0.484±0.061)ng/ml

关键词：哮喘胸腺基质淋巴细胞生成素胸腺基质淋巴细胞生成素受体布地奈德减毒活菌卡介苗小鼠

胸腺基质淋巴细胞生成素与变态反应性疾病的关系

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临床儿科杂志 2014年第1期32卷 83-84页

作者：张春霞陈柏谕内蒙古医科大学附属医院儿科内蒙古呼和浩特010050 内蒙古医科大学研究生学院内蒙古呼和浩特010059

胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)是由上皮细胞衍生的一类白介素7样细胞因子,于1994年由Friend等学者首次发现并报道。此后越来越多的研究表明,其广泛出现在变态反应性疾病中,在变态反应性疾病的发病机制中扮演重要角色。文章对近年来TSLP... 详细信息

胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)是由上皮细胞衍生的一类白介素7样细胞因子,于1994年由Friend等学者首次发现并报道。此后越来越多的研究表明,其广泛出现在变态反应性疾病中,在变态反应性疾病的发病机制中扮演重要角色。文章对近年来TSLP及其与变态反应性疾病密切相关性的研究进展作一综述。

关键词：胸腺基质淋巴细胞生成素胸腺基质淋巴细胞生成素受体变态反应性疾病

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胸腺基质淋巴细胞生成素的研究进展

微生物学免疫学进展 2005年第1期33卷 52-54页

作者：黄仕和黄仕权武汉生物制品研究所武汉430060 三峡大学医学院宜昌443000

胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)是一种新型的细胞因子,它存在多种类型。已鉴定了人、小鼠和大鼠的TSLP受体,属于造血细胞因子受体家族成员,功能性TSLP受体复合物是由TSLP受体和IL- 7Rα组成,与配体相互作用能活化Stat3和Stat5,发挥着多... 详细信息

胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)是一种新型的细胞因子,它存在多种类型。已鉴定了人、小鼠和大鼠的TSLP受体,属于造血细胞因子受体家族成员,功能性TSLP受体复合物是由TSLP受体和IL- 7Rα组成,与配体相互作用能活化Stat3和Stat5,发挥着多种生物学功能。

关键词：胸腺基质淋巴细胞生成素胸腺基质淋巴细胞生成素受体

固本防哮饮对支气管哮喘缓解期小鼠免疫失衡的影响

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中医杂志 2019年第14期60卷 1219-1224页

作者：刘力维赵霞谭敏南京中医药大学附属医院江苏省南京市210029 重点实验室

目的探讨固本防哮饮治疗支气管哮喘缓解期的可能作用机制。方法 36只BALB/c雌性小鼠随机分为正常组、模型组、孟鲁司特钠组、固本防哮饮预防组、固本防哮饮高剂量组及固本防哮饮等效剂量组,每组6只。除正常组外其余各组采用卵蛋白致敏... 详细信息

目的探讨固本防哮饮治疗支气管哮喘缓解期的可能作用机制。方法 36只BALB/c雌性小鼠随机分为正常组、模型组、孟鲁司特钠组、固本防哮饮预防组、固本防哮饮高剂量组及固本防哮饮等效剂量组,每组6只。除正常组外其余各组采用卵蛋白致敏、雾化联合呼吸道合胞病毒滴鼻诱导建立支气管哮喘缓解期小鼠模型。造模后正常组、模型组给予蒸馏水20 ml/kg灌胃,固本防哮饮等效剂量、高剂量组分别给予24、36 g/(kg·d)固本防哮饮灌胃,孟鲁司特钠组给予孟鲁司特钠片2. 6 mg/(kg·d)灌胃,每日1次,共28天。固本防哮饮预防组从致敏第1天给予24 g/(kg·d)的固本防哮饮每日灌胃1次,共83天。比较各组小鼠肺组织病理变化,采用实时定量PCR法检测肺组织中胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、胸腺基质淋巴细胞生成素受体(TSLPR)、GATA3 mRNA表达,Western Blotting法检测TSLP、TSLPR、GATA3蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验测定血清TSLP、TSLPR蛋白表达。结果病理学结果显示,正常组小鼠气道上皮平整,支气管管腔光滑,无明显炎性细胞浸润;模型组小鼠气道上皮不完整,肺泡壁增厚,同时气道黏膜层、黏膜下层以及血管周围组织可见大量炎性细胞浸润;固本防哮饮各治疗组和孟鲁司特钠组小鼠肺组织病理炎症均较模型组减轻,且各治疗组病理差异不明显。与正常组比较,模型组小鼠肺组织TSLP、TSLPR、GATA3 mRNA及蛋白表达显著升高(P 0. 05)。结论固本防哮饮可改善支气管哮喘缓解期的肺组织病理改变,其机制可能是抑制肺组织TSLP、TSLPR、GATA3表达,纠正肺组织Th1/Th2的偏移,从而调控机体的免疫功能。

关键词：固本防哮饮支气管哮喘胸腺基质淋巴细胞生成素胸腺基质淋巴细胞生成素受体免疫失衡

Ag85B调节小鼠髓样树突状细胞的成熟和TSLP介导下TSLPR和OX40L的表达

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中国病理生理杂志 2015年第9期31卷 1680-1687页

作者：钱江吴健安弘房祥峰李东风杨士芳孟锦绣高兴林南方医科大学研究生院广东广州510515 广东省人民医院、广东省医学科学院、广东省老年医学研究所呼吸内科广东广州510080 广东省人民医院、广东省医学科学院、广东省老年医学研究所医学研究中心广东广州510080

目的：研究抗原85B（Ag85B）体外诱导小鼠未成熟的髓样树突状细胞（m DCs）的成熟以及对胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）介导下m DCs表达TSLP受体（TSLPR）和OX40L的影响,探究Ag85B抑制哮喘气道炎症的可能机制。方法：应用重组小鼠GM-CS... 详细信息

目的：研究抗原85B（Ag85B）体外诱导小鼠未成熟的髓样树突状细胞（m DCs）的成熟以及对胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）介导下m DCs表达TSLP受体（TSLPR）和OX40L的影响,探究Ag85B抑制哮喘气道炎症的可能机制。方法：应用重组小鼠GM-CSF和IL-4体外诱生C57BL/6小鼠未成熟的m DCs,并运用免疫磁珠分离的方法纯化,采用光镜和扫描电镜、流式细胞术进行形态学观察和细胞表型鉴定;分别用0、50、100、200μg/L不同浓度的Ag85B或TSLP作用于纯化并鉴定后的m DCs,培养24 h,流式细胞术检测细胞表面分子CD80、CD86、TSLPR和OX40L的表达,选取最佳的Ag85B或TSLP处理浓度。随后将m DCs随机分为空白对照组、Ag85B处理组、TSLP处理组和Ag85B＋TSLP处理组,培养24 h后检测m DCs的促炎表面分子TSLPR和OX40L的表达。结果：体外诱导培养7 d,倒置相差显微镜下可见细胞表面呈现不规则树突样突起,扫描电镜下见细胞类圆形,表面有少量皱褶和较少分叉的树突状突起,符合未成熟m DCs的形态学特点;纯化后的m DCs表达表面分子CD11c的细胞较表达共刺激分子CD80和CD86的细胞多,符合未成熟m DCs的表型特征。与空白对照组比较,50~200μg/L的Ag85B处理组m DCs表达CD80和CD86的细胞比率显著增高（P〈0.05）,表达TSLPR和OX40L的细胞比率无显著差异。与空白对照组相比较,50、100和200μg/L浓度的TSLP处理组的m DCs表达CD80和CD86的细胞比率均显著增加（P〈0.05）;与空白对照组和50μg/L TSLP处理组相比较,100μg/L和200μg/L TSLP处理组的m DCs表达TSLPR和OX40L的细胞比率均显著升高（P〈0.05）。选取200μg/L作为Ag85B和TSLP的优化作用浓度,结果发现Ag85B处理组和Ag85B＋TSLP处理组的m DCs表达TSLPR和OX40L的细胞比率较TSLP处理组均显著降低（P〈0.05）,与空白对照组比较差异不显著。结论：Ag85B可通过上调m DCs表达共刺激分子CD80和CD86促进其成熟,同时下调TSLP介导的m DCs表达促炎表面分子TSLPR和OX40L,推测Ag85B可能通过TSLP介导的m DCs途径抑制气道炎症。

关键词：抗原85B 胸腺基质淋巴细胞生成素髓样树突状细胞胸腺基质淋巴细胞生成素受体 OX40L

Ag85B慢病毒抑制人支气管上皮细胞TSLP及其受体的表达

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中国病理生理杂志 2014年第11期30卷 2015-2020页

作者：房祥峰钱江孟锦绣李东风吴健南方医科大学研究生学院广东广州510515 广东省人民医院广东省医学科学院呼吸内科广东广州510080 广东省人民医院广东省医学科学院医学研究中心广东广州510080

目的:研究结核分枝杆菌抗原85B(Ag85B)慢病毒对正常人支气管上皮细胞(NHBEC)表达胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)和其受体TSLPR的影响,探究Ag85B抑制哮喘气道炎症的机制。方法:将Ag85B基因重组质粒转入293T... 详细信息

目的:研究结核分枝杆菌抗原85B(Ag85B)慢病毒对正常人支气管上皮细胞(NHBEC)表达胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)和其受体TSLPR的影响,探究Ag85B抑制哮喘气道炎症的机制。方法:将Ag85B基因重组质粒转入293T细胞,构建携带Ag85B和EGFP报告基因的慢病毒载体p LVXIRES-Neo-EGFP-Ag85B(Ag85B慢病毒)。用鉴定后的Ag85B慢病毒感染HEK293细胞,计算滴度并观察感染效率。利用Lipofectamine? 2000使Ag85B慢病毒感染体外培养NHBEC,设立空病毒感染和空白对照组。Real-time PCR和Western blotting检测Ag85B、TSLP和TSLPR mRNA和蛋白表达水平。结果:成功构建Ag85B慢病毒感染NHBEC体系,Ag85B慢病毒感染NHBEC 48 h后,荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白表达,细胞生长状态良好,病毒滴度为2×1011TU/L,感染效率达到90%以上。Real-time PCR和Western blotting结果显示Ag85B慢病毒成功感染NHBEC,可见相应Ag85B mRNA和蛋白表达。与空病毒感染和空白对照组比较,Ag85B慢病毒感染组TSLP mRNA表达有下降趋势,TSLPR mRNA与TSLP和TSLPR的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:Ag85B慢病毒感染NHBEC可以抑制NHBEC的TSLP和TSLPR的表达,提示Ag85B可能通过靶向阻滞TSLP-TSLPR途径抑制哮喘气道炎症。

关键词：胸腺基质淋巴细胞生成素胸腺基质淋巴细胞生成素受体慢病毒载体抗原85B 人支气管上皮细胞

哮喘小鼠TSLP及其受体表达和布地奈德干预的影响

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临床儿科杂志 2010年第4期28卷 380-383页

作者：王淑丽张建华郭盛蒋菲王小鹏刘芬苏州大学附属儿童医院江苏苏州215003 山东省临沂市人民医院儿科上海交通大学附属第六人民医院儿科上海200233

目的观察哮喘小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)及其受体(TSLPR)的表达和布地奈德(BUD)干预对其表达的影响。方法30只雌性昆明小鼠随机分成哮喘组、BUD干预组及正常对照组,每组10只。用卵清蛋白(OVA)进行致敏和激发,建立哮喘模型,同时进... 详细信息

目的观察哮喘小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)及其受体(TSLPR)的表达和布地奈德(BUD)干预对其表达的影响。方法30只雌性昆明小鼠随机分成哮喘组、BUD干预组及正常对照组,每组10只。用卵清蛋白(OVA)进行致敏和激发,建立哮喘模型,同时进行BUD干预。酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清TSLP的水平及肺组织和脾脏中TSLP和TSLPR的表达。结果哮喘组小鼠外周血TSLP的水平较正常对照组明显上升,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。各组小鼠肺组织及脾脏TSLP和TSLPR的组间比较结果均与血清TSLP组间比较结果相似。结论哮喘小鼠血清TSLP的表达及肺组织和脾脏内TSLP和TSLPR的表达均增高。TSLP可能在哮喘中起着重要作用,BUD可明显抑制哮喘小鼠TSLP和TSLPR的表达,TSLP或TSLPR可能成为治疗哮喘的潜在靶点。

关键词：哮喘胸腺基质淋巴细胞生成素胸腺基质淋巴细胞生成素受体布地奈德小鼠