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胶体金读数仪法快速检测动物肌肉中克伦特罗含量

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食品安全质量检测学报 2020年第11期11卷 3528-3531页

作者：张晓丽山东省运动康复研究中心济南250002

目的建立用于运动队肉食品克伦特罗(clenbuterol,CL)快速检测的方法。方法采用克伦特罗胶体金检测卡确定阳性结果,胶体金读数仪法确定克伦特罗含量。结果已知克伦特罗含量为0.94 ng/g的羊肉,测试结果平均值为1.21 ng/g。结论从运动员饮... 详细信息

目的建立用于运动队肉食品克伦特罗(clenbuterol,CL)快速检测的方法。方法采用克伦特罗胶体金检测卡确定阳性结果,胶体金读数仪法确定克伦特罗含量。结果已知克伦特罗含量为0.94 ng/g的羊肉,测试结果平均值为1.21 ng/g。结论从运动员饮食安全角度出发,胶体金读数仪法快速检测动物肌肉中克伦特罗暂时无法完全达到含量检测的要求,经过检测卡和胶体金读数仪的进一步优化改进,可以给运动队尤其是外训队伍提供了一种快速、便捷的检测方法。

关键词：胶体金读数仪胶体金法克伦特罗正交试验

酶联免疫吸附和胶体金技术对黄曲霉毒素M1检测的结合验证

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中国乳业 2024年第1期 69-72,77页

作者：乔宽王路阳王艳飞张云鲜时长旭蒙牛乳业(焦作)有限公司河南焦作454100

[目的]为准确完成生牛乳中黄曲霉毒素M1检测。[方法]对比分析酶标仪、胶体金读数仪检测生牛乳中黄曲霉毒素M1的处理过程和检测数据。[结果]发现2种方法检验操作过程各有优劣,检测结果能满足不同需求。酶标仪可用于半定量检测,并进行精... 详细信息

[目的]为准确完成生牛乳中黄曲霉毒素M1检测。[方法]对比分析酶标仪、胶体金读数仪检测生牛乳中黄曲霉毒素M1的处理过程和检测数据。[结果]发现2种方法检验操作过程各有优劣,检测结果能满足不同需求。酶标仪可用于半定量检测,并进行精准检测和半定量复核。胶体金读数仪适合快速定性筛查。[结论]2种方法可配合使用,相互补充,灵活运用设备优势,高效完成检测需求。

关键词：酶标仪胶体金读数仪黄曲霉毒素M1 生牛乳

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烟叶中多菌灵胶体金定量试纸条的研制及应用

烟草科技 2022年第7期55卷 33-39页

作者：李晓芳周润鑫王春琼魏力杰张燕李天伟王兆芹北京勤邦生物技术有限公司北京昌平102206 北京市食品安全免疫快速检测工程技术研究中心北京昌平102206 云南省烟草质量监督检测站昆明650106

为了建立烟叶中残留的多菌灵的快速定量检测方法,利用胶体金免疫层析技术并配套胶体金读数仪,确定更适用于现场检测的多菌灵试纸条的产品形式,明确温度对胶体金试纸条定量结果的影响,用恒温孵育器控制检测温度,基于胶体金读数仪绘制标... 详细信息

为了建立烟叶中残留的多菌灵的快速定量检测方法,利用胶体金免疫层析技术并配套胶体金读数仪,确定更适用于现场检测的多菌灵试纸条的产品形式,明确温度对胶体金试纸条定量结果的影响,用恒温孵育器控制检测温度,基于胶体金读数仪绘制标准曲线。结果表明:①研制的定量胶体金试纸条检测限为0.017 mg/kg,检测范围为0.020~2.0 mg/kg,定量范围为0.020~0.50 mg/kg,加标回收率为95.6%~128.9%,批内变异系数为6.2%~11.2%;②与高效液相色谱-串联质谱法的检测结果相比,阴性样品检测结果准确率大于95%,阳性样品的检测结果在定量范围0.020~0.50 mg/kg内线性关系良好;③对于与多菌灵结构相似的药物,试纸条与其无交叉反应,可特异性定量检测烟叶中残留的多菌灵。本研究中研制的多菌灵定量试纸条具有操作简便、检测速度快、准确性高、稳定性好等优点,适用于基层实验室的大批量样品检测及现场快速检测。

关键词：多菌灵烟叶胶体金免疫层析技术胶体金读数仪

食源性致病菌多重重组酶聚合酶扩增快速检测技术研究

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食源性致病菌多重重组酶聚合酶扩增快速检测技术研究

作者：厉佳丽中国计量大学

学位级别：硕士

食品是人类赖以生存和发展的物质基础,食品安全是关乎人民健康与国计民生的重大课题。目前,各种食品安全问题层出不穷,尤其是食源性病原体的污染,对人们健康造成极大的危害。在世界范围内,金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、副溶... 详细信息

食品是人类赖以生存和发展的物质基础,食品安全是关乎人民健康与国计民生的重大课题。目前,各种食品安全问题层出不穷,尤其是食源性病原体的污染,对人们健康造成极大的危害。在世界范围内,金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)和沙门氏菌(Salmonella)是最为常见的三种引起食物中毒的致病菌。许多食品中,尤其是水产品中可能同时存在该三种致病菌,严重威胁着人们的生命财产安全。因此建立快速准确、灵敏、特异的多重检测技术至关重要。随着生物技术的不断发展,除传统培养法外,许多新技术已应用于病原菌的检测。其中,核酸扩增技术(Nucleic acid amplification technology,NAAT)可以从样品中检测出痕量目标分子,具有扩增速度快、灵敏高、特异性强等诸多特点,是食源性致病菌检测的重要技术手段。但是传统的核酸扩增技术如聚合酶链式反应(PCR)通常需要精密的仪器设备和专业的操作人员,且耗时相对较长,并不适用于现场快速检测。本研究将RPA技术应用于多重核酸检测技术中,与侧流免疫层析技术结合建立多重LFD-RPA体系,实现食源性致病菌多靶标同步快速检测。本研究以金黄色葡萄球菌nuc基因(Gen Bank登录号:EF529607.1)、副溶血性弧菌tox R基因(Gen Bank登录号:GQ228073.1)、沙门氏菌fim Y基因(Gen Bank登录号:JQ665438.1)为检测的目的基因设计RPA特异性引物。通过实验,确定金黄色葡萄球菌RPA上游引物标记生物素(Biotin)、副溶血性弧菌RPA上游引物标记羧基荧光素(FAM)、沙门氏菌RPA上游引物标记Cy5,三组RPA下游引物均标记地高辛(Digoxin)。经过系列多重RPA反应体系优化实验,确定最终多重RPA反应体系如下:基础缓冲液(含d NTPs)25μL、10μM金黄色葡萄球菌上下游引物各2μL(终浓度400 n M)、10μM副溶血性弧菌上下游引物各0.75μL(终浓度1500 nM)、10μM沙门氏菌上下游引物各2μL(终浓度400 n M)、三种致病菌DNA模板各1μL、酶10μL、280 m M醋酸镁2.5μL,最佳反应温度为37℃,最适反应时间为10 min。特异性实验结果显示,多重LFD-RPA技术特异性强,只能检出目标致病菌,且三种目标致病菌之间无交叉反应,与其它食源性致病菌也不存在交叉扩增。灵敏度实验结果表明,多重LFD-RPA方法检测灵敏度高,金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、沙门氏菌检测限分别为2.6×10CFU/m L、7.6×10CFU/m L、1.3×10CFU/m L。结合TSR-200胶体金读数仪读数结果绘制标准曲线金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、沙门氏菌标准曲线R分别为0.9903、0.9928、0.9945。人工污染样品检测实验中,多重LFD-RPA方法检测人工污染食物样品中的金黄色葡萄球菌,副溶血性弧菌和肠炎沙门氏菌的检出限分别为4.5×10CFU/m L、8.3×10CFU/m L和2.7×10CFU/m L。对应的添加回收率分别为92-106.22%,93.73-107.59%和92.96-106.66%。实际样品检测实验中,分别使用多重LFD-RPA和传统培养法检测123个食物样品。结果显示,金黄色葡萄球菌的阳性检出率均为0%。本地市场样本和舟山出入境检验检疫局样本中副溶血性弧菌和肠炎沙门氏菌的阳性检出率均分别为1.9%和0%。本研究将RPA扩增和侧流免疫层析试纸条结合,建立多重LFD-RPA方法同时检测金黄色葡萄球菌,副溶血性弧菌和沙门氏菌。此外,为了突破试纸条无法进行定量检测的瓶颈,我们尝试使用了胶体金读数仪(TSR-200)来扫描和分析试纸条测试线上的彩色信号,对多重LFD-RPA定量化检测进行初步实验。同时,胶体金读数仪的使用减轻了肉眼读数的误差,提高了准确性。除此之外,它还成功地应用于实际食物样品检测。多重LFD-RPA测检测是一种快速,便携,高灵敏度、高特异性的技术,且操作简单,无需复杂仪器,它将有助于食源性病原体的现场快速检测,为资源匮乏地区食源性致病菌的快速检测提供了新的思路,具有广泛的应用前景。

关键词：重组酶聚合酶扩增侧流免疫层析试纸条多重快速检测食源性病原菌金黄色葡萄球菌副溶血性弧菌沙门氏菌胶体金读数仪