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胰凝乳蛋白酶和地塞米松对儿童急性淋巴细胞白血病核转录因子-κB表达的影响及其意义

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中国实验血液学杂志 2007年第2期15卷 399-403页

作者：安琪薛天阳许伟高吉照武怡徐春萍徐州市儿童医院血液科徐州221006 徐州医学院附属医院儿科徐州221002

本研究探讨胰凝乳蛋白酶(N-tosyl-L-phenylalnylchloromethyl ketone,TPCK)和地塞米松(dexamethasone,Dex)对儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响及意义,为临床寻求以NF-κB为靶点的治疗手段提供科学依据。应... 详细信息

本研究探讨胰凝乳蛋白酶(N-tosyl-L-phenylalnylchloromethyl ketone,TPCK)和地塞米松(dexamethasone,Dex)对儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响及意义,为临床寻求以NF-κB为靶点的治疗手段提供科学依据。应用SP免疫组织化学法检测20例ALL患儿NF-κB P65蛋白的表达,并检测TPCK和Dex对ALL细胞NF-κB P65蛋白活性的影响。结果显示:40μmol/L的TPCK能非常显著地抑制ALL细胞中NF-κB P65蛋白的活化,作用2小时,ALL细胞中NF-κB P65蛋白表达转为阴性,阳性表达率为(2.5±1.6)%;且TPCK对NF-κB P65蛋白活性的抑制作用在一定范围内具有时间依赖性。临床治疗相关剂量的Dex5.0μg/ml作用于ALL细胞24小时,能非常显著地抑制NF-κB P65蛋白的表达,其阳性表达率为(25.0±3.0)%;与基础状态相比较,有显著性差异(T=55,P<0.01)。结论:TPCK和Dex可抑制NF-κB的活性,NF-κB活性的抑制可能是Dex作用于儿童ALL细胞的机制之一。抑制NF-κB信号传导途径可能在儿童ALL治疗中有重大价值。

关键词：急性淋巴细胞白血病核转录因子-κB 胰凝乳蛋白酶地塞米松

α-胰凝乳蛋白酶的固定化及其对DL-苯丙氨酸的光学拆分

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高等学校化学学报 1997年第8期18卷 1388-1392页

作者：刘立建杨平卓仁禧武汉大学化学系武汉430072

以氨丙基多孔硅球为载体，戊二醛为交联剂制得固定化α-胰凝乳蛋白酶．其含酶量为3．6mg／g，米氏常数Km=1．2×10－3mol／L，最适宜温度为35℃，pH值为7．0，对热、酸碱、甲醇以及尿素的稳定性有较大提高，Ca2+激活效应明显．用该固定... 详细信息

以氨丙基多孔硅球为载体，戊二醛为交联剂制得固定化α-胰凝乳蛋白酶．其含酶量为3．6mg／g，米氏常数Km=1．2×10－3mol／L，最适宜温度为35℃，pH值为7．0，对热、酸碱、甲醇以及尿素的稳定性有较大提高，Ca2+激活效应明显．用该固定化酶连续拆分DL-苯丙氨酸制备L-苯丙氨酸时，拆分产率高于90％，产品纯度超过96％；连续使用2个月后仍能保持较高酶活力．

关键词：固定化 L-苯丙氨酸光学拆分胰凝乳蛋白酶

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胰凝乳蛋白酶短肽抑制剂的筛选和活性分析

中国生物化学与分子生物学报 1999年第2期15卷 296-299页

作者：刘莹张姝李天羽范洪宽周慧李惟吉林大学生命科学学院

报道了一种从噬菌体肽库中筛选胰凝乳蛋白酶短肽抑制剂的新方法．在通常的亲和富集筛选的基础上，利用胰凝乳蛋白酶自身的水解活力切割掉结合的底物噬菌体，再经抑制活力分析得到抑制性噬菌体克隆．这样筛得的噬菌体克隆具有明显的胰凝... 详细信息

报道了一种从噬菌体肽库中筛选胰凝乳蛋白酶短肽抑制剂的新方法．在通常的亲和富集筛选的基础上，利用胰凝乳蛋白酶自身的水解活力切割掉结合的底物噬菌体，再经抑制活力分析得到抑制性噬菌体克隆．这样筛得的噬菌体克隆具有明显的胰凝乳蛋白酶结合活力和抑制活力，ＤＮＡ序列分析发现其保守序列为（Ｓ／Ｔ）ＲＶＰＲ（Ｒ／Ｈ）．按此序列化学合成的短肽Ａｃ－ＡＳＲＶＰＲＲＧ－ＮＨ２、Ａｃ－ＡＳＲＶＰＲＨＧ－ＮＨ２同样表现出对胰凝乳蛋白酶的抑制作用．

关键词：胰凝乳蛋白酶抑制剂肽库噬菌体筛选

壳聚糖-精氨酸树脂固定化胰凝乳蛋白酶及其性质

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应用化学 2009年第7期26卷 780-785页

作者：肖燕王娟周小华重庆大学化学化工学院重庆400044

以具柔性亲水手臂的壳聚糖-精氨酸树脂为载体,用戊二醛交联胰凝乳蛋白酶,获得壳聚糖-精氨酸树脂固定化胰凝乳蛋白酶。最佳固定化条件为:m(酶)∶m(载体)=20∶1000、戊二醛体积分数为1.0%、pH=5.20、30℃交联60min。固定化酶活力达850U/g... 详细信息

以具柔性亲水手臂的壳聚糖-精氨酸树脂为载体,用戊二醛交联胰凝乳蛋白酶,获得壳聚糖-精氨酸树脂固定化胰凝乳蛋白酶。最佳固定化条件为:m(酶)∶m(载体)=20∶1000、戊二醛体积分数为1.0%、pH=5.20、30℃交联60min。固定化酶活力达850U/g,Km为1.83mmol/L,比游离酶增大33.6%,比交联壳聚糖固定化酶低24.0%。壳聚糖-精氨酸树脂固定化胰凝乳蛋白酶水解时间进程曲线与游离酶基本一致,均在反应30min达到最大速率,最适温度为70℃,比游离酶升高10℃;在75℃时的半衰期可达6.0h,比游离酶提高约4.3倍;最适pH值为5.92,比游离酶向酸性偏移2pH单位。4℃贮存半衰期为49d。

关键词：壳聚糖 L-精氨酸胰凝乳蛋白酶交联固定化

羧甲基纤维素固定化胰凝乳蛋白酶的稳定性研究

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食品工业科技 2008年第10期29卷 125-127页

作者：左秀凤杨莉河南职工医学院医学技术系河南郑州450003

研究以羧甲基纤维素作为载体,通过接枝后与胰凝乳蛋白酶进行偶联,通过正交实验测得酶固定化特性的最佳方案为:接枝温度50℃,接枝时间10min,酶偶联温度20℃,酶偶联时间4h。所得固定化酶的热稳定性提高5℃,最适pH提高到8～9,具有连续操作... 详细信息

研究以羧甲基纤维素作为载体,通过接枝后与胰凝乳蛋白酶进行偶联,通过正交实验测得酶固定化特性的最佳方案为:接枝温度50℃,接枝时间10min,酶偶联温度20℃,酶偶联时间4h。所得固定化酶的热稳定性提高5℃,最适pH提高到8～9,具有连续操作性,在2℃贮存放置20d后酶活仍在75%以上。

关键词：胰凝乳蛋白酶固定化羧甲基纤维素稳定性

应用胰凝乳蛋白酶消化法比较冬季和夏季鲢鱼肉肌球蛋白的构造特性

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水产学报 2011年第6期35卷 940-947页

作者：于克锋袁春红陈舜胜王锡昌今野久仁彦上海海洋大学水产与生命学院上海海洋大学食品学院日本北海道大学水产科学院

以夏季和冬季鲢为研究对象,利用胰凝乳蛋白酶能水解羧基端含芳香族氨基酸残基肽键的特性,根据其特异性酶切部位,结合电泳手段来分析肌球蛋白的内部构造差异性。结果表明,与夏季样品相比,冬季鲢的肌原纤维蛋白经酶切生成的肌球蛋白头部S-... 详细信息

以夏季和冬季鲢为研究对象,利用胰凝乳蛋白酶能水解羧基端含芳香族氨基酸残基肽键的特性,根据其特异性酶切部位,结合电泳手段来分析肌球蛋白的内部构造差异性。结果表明,与夏季样品相比,冬季鲢的肌原纤维蛋白经酶切生成的肌球蛋白头部S-1较长,在高温下分子量为165 ku的重酶解肌球蛋白HMM容易被再降解成小片段的135 ku HMM,呈现出冬季肌球蛋白的结构不稳定性。在不同温度下加热夏季和冬季肌球蛋白,其ATPase失活速度和酶解肌球蛋白生成S-1的产生量的减少速度呈现一致性,说明酶解生成的S-1只来源于有活性的肌球蛋白。同时,冬季肌球蛋白热变性温度较夏季肌球蛋白要低6℃,表明冬季肌球蛋白的不稳定性。

关键词：鲢胰凝乳蛋白酶肌球蛋白肌球蛋白S-1 热稳定性 ATPase活性

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CdTe量子点对胰凝乳蛋白酶的荧光标记

分析测试学报 2008年第2期27卷 188-191页

作者：陈启凡杨冬芝王文星徐淑坤东北大学化学系

用巯基丙酸作为表面修饰剂在水相中制备了稳定的CdTe纳米量子点。利用量子点外层包被的巯基丙酸上的羧基,实现了量子点与胰凝乳蛋白酶的直接偶联。偶联后溶液的吸光度值略有增大而吸收峰位不变,同时荧光强度明显增强,荧光发射峰位稍有... 详细信息

用巯基丙酸作为表面修饰剂在水相中制备了稳定的CdTe纳米量子点。利用量子点外层包被的巯基丙酸上的羧基,实现了量子点与胰凝乳蛋白酶的直接偶联。偶联后溶液的吸光度值略有增大而吸收峰位不变,同时荧光强度明显增强,荧光发射峰位稍有蓝移。通过荧光发射光谱确定了CdTe量子点与胰凝乳蛋白酶偶联的最佳反应条件为:pH9.0,反应温度37℃,反应时间1.5 h。重点考察了NaCl浓度和胰凝乳蛋白酶浓度对量子点与胰凝乳蛋白酶偶联产物荧光强度的影响。

关键词： CdTe量子点胰凝乳蛋白酶生物标记荧光探针

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固定化胰凝乳蛋白酶拆分L-苯丙氨酸

中国医药工业杂志 1997年第8期28卷 342-343页

作者：刘立建杨平卓仁禧武汉大学化学系

用酶活力为２．５ｍｇ／ｇ的多孔硅球固定化胰凝乳蛋白酶可拆分ＤＬ－苯丙氨酸甲酯得Ｌ－苯丙氨酸，拆分收率９２．３％，光学纯度９６．２％。

关键词：苯丙氨酸胰凝乳蛋白酶拆分

检测胰凝乳蛋白酶荧光/光声探针的构建及其生物应用

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检测胰凝乳蛋白酶荧光/光声探针的构建及其生物应用

作者：邹翔广西大学

学位级别：硕士

生物酶是人体代谢活动不可缺少的活性物质,其引导的专一且高效的催化作用维持着生体机能的正常运转;在消化过程中也起着重要作用,并参与各种疾病的病理过程。胰凝乳蛋白酶(Chymotrypsin,CHT)就是其中一种存在于人体消化系统中的丝氨酸... 详细信息

生物酶是人体代谢活动不可缺少的活性物质,其引导的专一且高效的催化作用维持着生体机能的正常运转;在消化过程中也起着重要作用,并参与各种疾病的病理过程。胰凝乳蛋白酶(Chymotrypsin,CHT)就是其中一种存在于人体消化系统中的丝氨酸蛋白酶,参与生物体内的多种代谢过程。CHT在生物体的代谢中起着至关重要的作用,并影响细胞的增殖和凋亡。生物体内CHT水平的异常将会引发多种疾病,如炎症性关节炎、肾炎、糖尿病、咽炎、消化不良和胰腺癌等。因此,设计一种有效的检测生命系统中CHT的方法对于疾病的诊断和治疗具有重要意义。近红外(NIR)荧光成像技术因其卓越的组织穿透能力、极佳的信号背景比、高的灵敏度和特异性,已被广泛地应用于各种检测和生物学研究中。通过对花菁衍生物和异氟尔酮的研究,我们提出了三种新型的可激活型成像探针,它们能够在不同的波长范围内进行CHT水平的检测,并且也能够进行荧光(FL)和光声(PA)的成像。具体如下:一,将异氟尔酮与对羟基苯甲醛有效结合,合成了一种深红色非肽荧光探针(DT),以3-苯基丙酰氯为识别基团,采用保护-去保护策略检测CHT。DT的发射范围为525～700 nm,具有良好的光稳定性、高灵敏度和对CHT检测的选择性;值得注意的是,DT探针首次提供了一种直观的方法来可视化小鼠胰腺内源性CHT,显示了在未来胰腺疾病临床诊断中的应用潜力。二,首次提出了一种由CHT触发的光声成像/近红外成像(3D-PA/NIRF)双模态策略以对深部肿瘤进行高空间分辨率和深组织穿透成像。以半花菁为双模态信号平台,4-溴丁酰基为CHT的反应位点,建立了非肽荧光探针(HDC)。HDC在体外对CHT显示出良好的灵敏度、选择性和亲和力。值得注意的是,探针HDC使CHT激活的深部肿瘤的三维光声成像具有高空间分辨率和深度穿透能力。同时,由于肿瘤部位近红外荧光强,对比度高于周围健康组织,便于描绘肿瘤边缘并进行解剖分析。因此,CHT激活的体内三维光声/近红外荧光双模态成像策略有望用于进一步指导临床治疗。三,利用花菁结构的优势,通过简单的反应链接识别基团4-溴丁酰氯,我们设计并合成了一种新型的近红外荧光探针(Cy G),用于检测生物体内的CHT。Cy G对于CHT表现出较高的选择性和灵敏度;最关键的是,该探针成功的用于细胞成像和活体小鼠成像中CHT的检测,为临床检测CHT提供了一种新的思路。

关键词：荧光探针荧光成像光声成像胰凝乳蛋白酶异氟尔酮花菁